病毒感染的诊断与防治课件

第三章第三章 病毒感染的诊断与防治病毒感染的诊断与防治吉林大学吉林大学吉林大学吉林大学 基础医学院基础医学院基础医学院基础医学院病原生物学教研室病原生物学教研室病原生物学教研室病原生物学教研室1 1感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929第三章第三章 病毒感染的诊断与防治吉林大学病毒感染的诊断与防治吉林大学 基础医学院基础医学院1感谢你的观感谢你的观常用的病毒学诊断方法包括：常用的病毒学诊断方法包括：病毒的分离鉴定病毒的分离鉴定病毒的血清学检查病毒的血清学检查病毒蛋白和核酸的检测病毒蛋白和核酸的检测第一节 病毒感染的诊断2 2感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929常用的病毒学诊断方法包括：第一节常用的病毒学诊断方法包括：第一节 病毒感染的诊断病毒感染的诊断2感谢你的感谢你的一、标本的采取与送检一、标本的采取与送检应注意下列原则：应注意下列原则：应注意下列原则：应注意下列原则：1.对本身带有杂菌对本身带有杂菌(如咽拭子、粪便如咽拭子、粪便)或易或易受污染的标本，要进行病毒分离培养时，受污染的标本，要进行病毒分离培养时，应使用抗生素。应使用抗生素。2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低温因病毒在室温中易失去活性，标本应低温保存并尽快送检。保存并尽快送检。3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后后23w内各取内各取1份血清，以便对比双份份血清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化。血清抗体效价的动态变化。3 3感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929一、标本的采取与送检应注意下列原则：一、标本的采取与送检应注意下列原则：3感谢你的观看感谢你的观看2019年年二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定(一)病毒的分离1.动物接种动物接种 是最原始的病毒培养方法，根据病毒种是最原始的病毒培养方法，根据病毒种类不同，选择敏感动物及适宜接种部位，类不同，选择敏感动物及适宜接种部位，如嗜如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可接种神经性病毒（狂犬病毒）可接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。或皮内。4 4感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定(一一)病毒的分离病毒的分离4感谢你的观看感谢你的观看2012.鸡鸡胚胚培培养养 鸡鸡胚胚对对多多种种病病毒毒敏敏感感。一一般般采采用用孵孵化化914天天的的鸡鸡胚胚，根根据据病病毒毒种种类类不不同同，将将病病毒毒标标本本 接接种种于于鸡鸡胚胚的的不不同同部部位位，最最常常用用的的鸡鸡胚胚接接种种部部位位有有：羊羊膜膜腔腔、尿尿囊囊腔腔、绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜和和卵卵黄黄囊囊等等。5 5感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29292.鸡胚培养鸡胚培养 5感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月296 6感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29296感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月297 7感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29297感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月293.组组织织培培养养法法 (tissueculture)或或细细胞胞培培养养(cellculture)法法 是是将将离离体体活活组组织织块块或或分分散散的的组组织织细细胞胞加加以以培培养养的的技技术术总总称称，为为病病毒毒分分离离鉴鉴定定中中的的最最常常用用的的基基本本方方法法。8 8感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29293.组织培养法组织培养法 (tissueculture)或细胞培养或细胞培养9 9感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29299感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月291.细胞的变化细胞的变化有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应(CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。有些病毒(如狂犬病病毒、麻疹病毒等)可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。病毒在培养细胞中增殖的指标病毒在培养细胞中增殖的指标1010感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929 细胞的变化病毒在培养细胞中增殖的指标细胞的变化病毒在培养细胞中增殖的指标10感谢你的观看感谢你的观看2011111感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月292911感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月29病毒培养时出现的CPE1212感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929病毒培养时出现的病毒培养时出现的CPE12感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月292 2.红红红红细细细细胞胞胞胞吸吸吸吸附附附附 (h he emma ad ds so or rp pt ti io on n,HHA Ad d)流流感感或或副副流流感感病病毒毒等等感感染染细细胞胞后后，由由于于细细胞胞膜膜上上出出现现了了血血凝凝素素(h ha ae emma ag gg gl lu ut ti in ni in n,H HA A)，具具有有吸吸附附脊脊椎椎动动物物 (豚豚鼠鼠、鸡鸡、猴猴等等)红红细细胞胞的的能能力力，这这一一现现象象称称红红细细胞胞吸吸附附，常常用用来来测测定定具具有有H HA A的的粘粘病病毒毒与与副副粘粘病病毒毒的的增增殖殖。若若有有相相应应的的抗抗血血清清，则则能能中中和和细细胞胞膜膜上上的的H HA A，H HA Ad d不不再再发发生生，称称红红细细胞胞吸吸附附抑抑制制试试验验。1313感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29292.红细胞吸附红细胞吸附(hemadsorption,HAd)13感感3.干干扰扰现现象象(interference)某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒(ECHOV)的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。1414感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29293.干扰现象干扰现象(interference)14感谢你的观看感谢你的观看204.细细胞胞代代谢谢的的改改变变 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标。1515感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29294.细胞代谢的改变细胞代谢的改变 15感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月29(二二)病毒的数量与感染性测定病毒的数量与感染性测定 1.1.蚀斑测定蚀斑测定蚀斑测定蚀斑测定 是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 (如如中性红中性红)染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)(plaque)。每个蚀。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成单斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成单位位 (plaque forming unit,PFU)(plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染。病毒悬液中的感染性病毒量的滴度可用性病毒量的滴度可用PFUPFUmlml表示。表示。1616感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929(二二)病毒的数量与感染性测定病毒的数量与感染性测定 1.蚀斑测定蚀斑测定16感谢你的观看感谢你的观看2.50%2.50%组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量 (TCID50)(TCID50)测定法测定法测定法测定法 该方法是测定病毒能使该方法是测定病毒能使50%50%的组织培养细胞发的组织培养细胞发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作生感染的最小量。一般是将病毒悬液作1010倍的倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察CPECPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感染染50%50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算细胞的量为终点。最后用统计方法计算出出50%50%组织细胞感染量（组织细胞感染量（50%tissue culture 50%tissue culture infectious dose,TCID50)infectious dose,TCID50)。1717感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29292.50%组织细胞感染量组织细胞感染量(TCID50)测定法测定法 17感谢感谢三三、病病毒毒感感染染的的血血清清学学诊诊断断 原理是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体，故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。另外，在采取临床标本及病人血清应注意病程，必须采取患者急性期血清与恢复期血清(双份血清)进行血清学试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高出4倍以上时，才有诊断意义。1818感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断 原理是用已知病毒抗原理是用已知病毒抗1.中和试验中和试验(neutralizing test,NT test)是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。体中和而失去感染性的一种试验。中和抗体中和抗体(netralizing antibodies,NTAb)(netralizing antibodies,NTAb)是是作用于病毒表面抗原作用于病毒表面抗原 (衣壳或包膜衣壳或包膜)的抗体，的抗体，同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况的调查，在临床诊断上较少使用。的调查，在临床诊断上较少使用。1919感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29291.中和试验中和试验(neutralizing test,NT te2.补体结合试验补体结合试验(complement fixation test,CF test)用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病毒的内部抗原，同种异型间常有交叉，故特异性较中和试验低。但CF抗体出现较早，消失较快，故CF阳性可作为近期感染的指标。2020感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29292.补体结合试验补体结合试验(complement fixation 3.血凝抑制试验血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test,HI test)具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称血凝现象。这种现象能被相应抗体抑制，称HI试验。其原理是相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面的HA与红细胞的结合。本试验简易、经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。2121感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29293.血凝抑制试验血凝抑制试验(hemagglutinatia inhib病毒 +鸡RBC =凝集（血凝试验）病毒 +特异性抗体+鸡RBC=不凝集 （血凝抑制试验）2222感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月292922感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月29四四、病病毒毒感感染染的的快快速速诊诊断断 快速诊断主要是指从含有病毒标本及感染机体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、IgM抗体和核酸等，往往在数小时内即可得出结果。2323感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929四、病毒感染的快速诊断四、病毒感染的快速诊断 快速诊断主要是指从含有病毒标本及快速诊断主要是指从含有病毒标本及(一一)形形态态学学检检查查1.电镜和免疫电镜检查 2.普通光学显微镜检查 有些病毒在宿主细胞内增殖后，在细胞的一定部位(胞核、胞浆或两者兼有)出现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的结构，即包涵体。包涵体对病毒感染的诊断有一定价值。2424感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929(一一)形态学检查形态学检查1.电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 24感谢你的观看感谢你的观看2(二二)病病毒毒蛋蛋白白抗抗原原检检查查 用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。1.1.免疫荧光技术免疫荧光技术 (immunofluorescence,IF)(immunofluorescence,IF)2.2.固相放射免疫测定固相放射免疫测定 (solid-phase(solid-phase radioimmunoassay,SPRIA)radioimmunoassay,SPRIA)3.3.酶免疫技术酶免疫技术 (enzyme immunoassay,EIA)(enzyme immunoassay,EIA)此法可此法可检测多种病毒及其抗体，主要是酶免疫组化法检测多种病毒及其抗体，主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸附试验法和酶联免疫吸附试验法(ELISA)(ELISA)。2525感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929(二二)病毒蛋白抗原检查病毒蛋白抗原检查 用荧光素、放射性同位素、过氧化用荧光素、放射性同位素、过氧化(三三)特特异异性性IgM抗抗体体的的检检测测 检检测测病病毒毒特特异异性性I Ig gMM抗抗体体可可诊诊断断急急性性感感染染，特特别别是是对对证证实实孕孕妇妇感感染染风风疹疹病病毒毒尤尤为为重重要要，但但应应注注意意类类风风湿湿因因子子 (I Ig gMM)的的干干扰扰。另另外外，检检测测早早期期抗抗原原的的抗抗体体是是快快速速诊诊断断的的另另一一途途径径。如如检检测测针针对对E EB BV V的的早早期期抗抗原原(E EA A)、核核心心抗抗原原 (E EA AN NA A)和和衣衣壳壳抗抗原原 (V VC CA A)等等的的抗抗体体，可可以以区区别别急急性性或或慢慢性性E EB BV V感感染染。此此外外，分分子子生生物物学学检检测测技技术术、气气相相色色谱谱技技术术等等，均均可可用用来来分分析析和和鉴鉴定定病病毒毒感感染染。2626感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929(三三)特异性特异性IgM抗体的检测抗体的检测 检测病毒特异性检测病毒特异性IgM抗体抗体(四四)检检测测病病毒毒核核酸酸 1.核酸杂交技术 用于病毒检测的有斑点杂交、细胞内原位杂交、DNA印迹杂交、RNA印迹杂交等。2.核酸扩增法 目前多数病毒基因已通过分子克隆技术被明确了核苷酸序列，使得DNA扩增技术逐步发展为常规诊断技术之一。3.基因芯片技术 2727感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929(四四)检测病毒核酸检测病毒核酸 1.核酸杂交技术核酸杂交技术 用于病毒检测的有斑点用于病毒检测的有斑点基因芯片基因芯片 又称又称DNADNA芯片、生物芯片（芯片、生物芯片（biochipbiochip）。）。其其原理原理是：将已知的生物分子探针或基因探针，是：将已知的生物分子探针或基因探针，大规模或有序排布于小块硅片等载体上，与待测大规模或有序排布于小块硅片等载体上，与待测样品中的生物分子或基因序列相互作用和并行反样品中的生物分子或基因序列相互作用和并行反应，在激光的激发下，产生的荧光谱信号被接受应，在激光的激发下，产生的荧光谱信号被接受器收集，计算机自动分析处理数据并报告结果。器收集，计算机自动分析处理数据并报告结果。其优点是：可以一次性完成大量样品其优点是：可以一次性完成大量样品DNADNA序列的序列的检测和分析，解决了传统核酸杂交技术的许多不检测和分析，解决了传统核酸杂交技术的许多不足。芯片技术在病毒等微生物学诊断和流行病学足。芯片技术在病毒等微生物学诊断和流行病学调查方面有着广阔的应用前景。调查方面有着广阔的应用前景。2828感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929基因芯片基因芯片 又称又称DNA芯片、生物芯片（芯片、生物芯片（biochip）。）。2第二节 病毒感染的预防一、人工自动免疫(一)活疫苗(attenuated vaccine,or living vaccine)1.常规活疫苗即减毒活疫苗(attenuated vaccine)，通常是用自然或人工选择法(如温度敏感株)筛选的对人低毒或无毒的变异株制成的疫苗，如脊髓灰质炎、流感、麻疹的减毒活疫苗等。2929感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929第二节第二节 病毒感染的预防一、人工自动免疫病毒感染的预防一、人工自动免疫29感谢你的观看感谢你的观看2012.新型活疫苗 应用基因工程技术，控制病毒变异，或利用DNA重组技术，插入和定向缺失病毒基因，将保护性病毒蛋白的编码基因插入活载体中或选择性地去除病毒的某一个或几个致病基因而达到减毒作用制备的可在机体内增殖，诱发抗病毒免疫应答的疫苗。3030感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29292.新型活疫苗新型活疫苗 应用基因工程技术，控制病毒变异，或利用应用基因工程技术，控制病毒变异，或利用DN(二二)死疫苗死疫苗(killed vaccine)1 1.灭灭活活全全病病毒毒疫疫苗苗 应应用用物物理理或或化化学学方方法法使使病病毒毒完完全全灭灭活活而而制制成成的的疫疫苗苗。常常用用的的有有乙乙型型脑脑炎炎、狂狂犬犬病病、流流感感等等灭灭活活疫疫苗苗。2 2.亚亚单单位位疫疫苗苗(s su ub bu un ni it t v va ac cc ci in ne e)制制备备不不含含有有病病毒毒核核酸酸、仅仅含含有有能能诱诱发发中中和和抗抗体体的的病病毒毒衣衣壳壳蛋蛋白白或或包包膜膜表表面面抗抗原原，是是最最理理想想的的疫疫苗苗。3 3.合合成成肽肽病病毒毒疫疫苗苗(s sy yn nt th he es si iz ze ed d p pe ep pt ti id de e v vi ir ra al l v va ac cc ci in ne e)人人工工合合成成与与病病毒毒保保护护性性抗抗原原决决定定簇簇的的氨氨基基酸酸序序列列相相同同的的肽肽段段，制制备备成成免免疫疫原原后后免免疫疫动动物物或或人人体体，使使机机体体产产生生保保护护性性抗抗体体 3131感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929(二二)死疫苗死疫苗(killed vaccine)1.灭活全病毒疫灭活全病毒疫4 4.基基因因工工程程疫疫苗苗(g ge en ne ee en ng gi in ne er ri in ng g v va ac cc ci in ne e)利利用用基基因因工工程程技技术术，分分离离、重重组组、转转化化和和表表达达基基因因，制制备备出出的的能能引引起起人人体体保保护护性性免免疫疫应应答答疫疫苗苗。5 5.D DN NA A疫疫苗苗 又又称称基基因因疫疫苗苗或或核核酸酸疫疫苗苗，这这种种核核酸酸分分子子是是一一种种细细菌菌的的质质粒粒，在在克克隆隆了了特特异异性性的的基基因因以以后后，能能在在真真核核细细胞胞中中表表达达蛋蛋白白质质抗抗原原，刺刺激激机机体体产产生生特特异异性性体体液液和和细细胞胞免免疫疫 。6 6.新新型型多多价价联联合合疫疫苗苗、口口服服疫疫苗苗的的研研究究 3232感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29294.基因工程疫苗基因工程疫苗(geneenginering vaccin减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较特点减毒活疫苗死疫苗制备方法通过非正常培养减毒株通过化学物理方法使感染失活免疫接种一般为一次性多次免疫疫苗的稳定性相对不稳定相对稳定免疫的类型体液免疫和细胞免疫体液免疫毒力回升有可能不可能安全性对免疫缺陷者有危险安全性好生产和成本生产较复杂、成本高生产简单、成本低3333感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较特点减毒活疫苗死疫苗制备方法通过减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较特点减毒活疫苗死疫苗制备方法通过二、人工被动免疫二、人工被动免疫 人人工工被被动动免免疫疫的的制制剂剂有有免免疫疫血血清清和和丙丙种种球球蛋蛋白白，或或与与细细胞胞免免疫疫有有关关的的因因子子等等。大大多多数数人人均均受受过过不不同同种种类类的的病病毒毒感感染染，从从正正常常血血清清中中提提取取免免疫疫球球蛋蛋白白可可用用于于紧紧急急预预防防。常常注注射射人人免免疫疫球球蛋蛋白白预预防防甲甲型型肝肝炎炎、麻麻疹疹、脊脊髓髓灰灰质质炎炎等等。可可使使接接触触病病原原者者不不出出现现症症状状或或仅仅出出现现轻轻微微症症状状。近近年年来来有有人人应应用用含含有有高高滴滴度度抗抗H HB Bs s的的乙乙肝肝免免疫疫球球蛋蛋白白I Ig g)预预防防乙乙型型肝肝炎炎有有一一定定效效果果。在在使使用用免免疫疫球球蛋蛋白白时时因因其其半半衰衰期期短短，故故应应注注意意有有效效期期。3434感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929二、人工被动免疫二、人工被动免疫 人工被动免疫的制剂有免疫血清和丙种球蛋人工被动免疫的制剂有免疫血清和丙种球蛋第三节 病毒感染的治疗一一一一、抗抗抗抗病病病病化化化化学学学学制制制制剂剂剂剂（一一）核核苷苷类类药药物物 核核苷苷类类药药物物的的作作用用机机制制有有主主要要是是抑抑制制病病毒毒基基因因复复制制模模拟拟核核苷苷成成分分掺掺入入病病毒毒基基因因组组：合合成成的的异异常常嘧嘧啶啶取取代代病病毒毒D DN NA A前前体体的的胸胸腺腺嘧嘧啶啶，病病毒毒在在复复制制过过程程中中，这这种种异异常常的的嘧嘧啶啶分分子子掺掺入入子子代代D DN NA A中中使使子子代代病病毒毒结结构构基基因因的的合合成成和和表表达达无无法法进进行行，从从而而抑抑制制病病毒毒的的复复制制，或或复复制制出出的的病病毒毒为为缺缺陷陷病病毒毒。竞竞争争病病毒毒复复制制酶酶 3535感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929第三节第三节 病毒感染的治疗一、抗病化学制剂病毒感染的治疗一、抗病化学制剂35感谢你的观看感谢你的观看201.无环鸟苷(acyclovir,ACV，阿昔洛韦)和丙氧鸟苷（ganciclovir GCV，庚昔洛韦）为鸟嘌呤或脱氧鸟嘌呤核苷类似物。该药细胞毒性很小，是目前最有效的抗疱疹病毒药物之一。广泛用于疱疹病毒感染引起的单纯疱疹、生殖器疱疹及带状疱疹。3636感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29291.无环鸟苷无环鸟苷(acyclovir,ACV，阿昔洛韦，阿昔洛韦)和丙氧和丙氧2 2.叠叠氮氮胸胸苷苷 (a az zi id do ot th hy ymmi id di in ne e,A AZ ZT T)胸胸腺腺嘧嘧啶啶核核苷苷类类似似物物，通通过过阻阻断断前前病病毒毒D DN NA A的的合合成成而而抑抑制制H HI IV V的的复复制制，A AZ ZT T对对病病毒毒逆逆转转录录酶酶的的抑抑制制比比对对细细胞胞D DN NA A多多聚聚酶酶敏敏感感1 10 00 0倍倍以以上上。可可以以有有效效地地降降低低A AI ID DS S的的发发病病率率与与病病死死率率。耐耐药药株株的的出出现现系系由由基基因因突突变变导导致致逆逆转转录录酶酶具具有有耐耐药药性性。因因有有抑抑制制骨骨髓髓作作用用和和形形成成病病毒毒的的耐耐药药而而面面临临被被淘淘汰汰。3737感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29292.叠氮胸苷叠氮胸苷(azidothymidine,AZT)373.病毒唑 对多种RNA和DNA病毒的复制都有抑制作用，但主要用于RNA病毒感染的治疗，对细胞的核酸也有抑制作用。目前临床主要用于流感病毒和呼吸道合胞病毒的治疗。3838感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月29293.病毒唑病毒唑 38感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月29（二）病毒基因转录抑制剂 这类核苷衍生物模拟天然二脱氧核苷底物，经一系列磷酸化成为5-三磷酸后，作为相似的底物竞争性抑制病毒逆转录酶活性。被磷酸化的药物分子与核苷酸分子相似，在RNA模板合成DNA过程中被嵌入DNA中。此DNA再转录时，由于其中的药物分子不是正常的核苷酸，因而转录酶不能识别，从而使转录受阻。3939感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929（二）病毒基因转录抑制剂（二）病毒基因转录抑制剂 这类核苷衍生物模拟天然二脱氧核这类核苷衍生物模拟天然二脱氧核（三）（三）非核苷类逆转录酶抑制剂非核苷类逆转录酶抑制剂nevirapine 第1个新合成的非核苷类逆转录酶抑制剂。1996年获准用于治疗HIV，耐药株已出现，故建议与其它药联合使用；pyridone 作用类似nevirapine.4040感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929（三）（三）非核苷类逆转录酶抑制剂非核苷类逆转录酶抑制剂nevirapine 第第1（四）蛋白酶抑制剂（四）蛋白酶抑制剂1赛科纳瓦(saquinavir)1995年批准的第1个蛋白酶抑制剂。2英迪纳瓦（indinavir）、瑞托纳瓦（ritonavir）是1996年批准的新一代蛋白酶抑制剂，用于HIV。4141感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929（四）蛋白酶抑制剂（四）蛋白酶抑制剂1赛科纳瓦赛科纳瓦(saquinavir)19（五）其他抗病毒药物（五）其他抗病毒药物1 1.金金刚刚烷烷胺胺和和甲甲基基金金刚刚烷烷胺胺 金金刚刚烷烷胺胺为为合合成成胺胺类类，甲甲基基金金刚刚烷烷胺胺是是其其衍衍生生物物，两两者者有有相相同同的的抗抗病病毒毒谱谱和和副副作作用用，能能阻阻止止脱脱壳壳，主主要要用用于于治治疗疗甲甲型型流流感感。2 2.甲甲酸酸磷磷霉霉素素 无无机机焦焦磷磷酸酸盐盐的的有有机机类类似似物物，抑抑制制多多种种疱疱疹疹病病毒毒，包包括括C CMMV V、H HS SV V、V VZ ZV V、E EB BV V、H HH HV V6 6，可可能能还还对对H HB BV V和和逆逆转转录录病病毒毒有有作作用用。选选择择性性抑抑制制病病毒毒D DN NA A多多聚聚酶酶和和逆逆转转录录酶酶，而而对对宿宿主主细细胞胞无无影影响响。4242感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929（五）其他抗病毒药物（五）其他抗病毒药物1.金刚烷胺和甲基金刚烷胺金刚烷胺和甲基金刚烷胺 金刚烷胺为金刚烷胺为二、干扰素和干扰素诱生剂的应用二、干扰素和干扰素诱生剂的应用1.干扰素(IFN)具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于甲、乙、丙型肝炎，HSV，乳头瘤病毒和鼻病毒等感染的治疗。反复应用也会引起耐药性。2.IFN诱生剂 如：poly IC、甘草甜素、芸芝多糖。4343感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929二、干扰素和干扰素诱生剂的应用二、干扰素和干扰素诱生剂的应用1.干扰素干扰素(IFN)具有具有三、中草药防治病毒感染三、中草药防治病毒感染 中草药如黄芪、板蓝根、大青叶、贯众、螃蜞菊以及甘草和大蒜提取物等均有抑制病毒的作用，对肠道病毒、呼吸道病毒、虫媒病毒、肝炎病毒感染有一定防治作用，其作用机理尚在研究中。4444感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929三、中草药防治病毒感染三、中草药防治病毒感染 中草药如黄芪、板蓝根、大青叶、贯中草药如黄芪、板蓝根、大青叶、贯四、基因治疗四、基因治疗1.1.反义寡核苷酸反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,asONantisense oligonucleotide,asON）根据）根据病毒基因组的已知序列，设计能与病毒基因的某段序列病毒基因组的已知序列，设计能与病毒基因的某段序列互补的寡核苷酸，称为反义寡核苷酸，或反义核酸。互补的寡核苷酸，称为反义寡核苷酸，或反义核酸。2.2.干扰干扰RNARNA （short interfering RNAshort interfering RNA，siRNAsiRNA）用双股短小）用双股短小RNARNA，导致相同序列病毒基因的静止，同源，导致相同序列病毒基因的静止，同源m RNAm RNA降解，降解，通常双链通常双链RNARNA的长度要小于的长度要小于2626个核苷酸。个核苷酸。3.3.核酶核酶（ribozymeribozyme）是既能与靶基因序列结合又具有酶活是既能与靶基因序列结合又具有酶活性的一类性的一类RNARNA分子。核酶一方面能识别特异的靶分子。核酶一方面能识别特异的靶RNARNA序序列，并与之互补结合。另一方面具有酶活性，能通过特列，并与之互补结合。另一方面具有酶活性，能通过特异性位点切割降解靶异性位点切割降解靶RNARNA。4545感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929四、基因治疗四、基因治疗1.反义寡核苷酸（反义寡核苷酸（antisense oligo五、免疫治疗五、免疫治疗 免免疫疫治治疗疗病病毒毒感感染染可可应应用用特特异异性性抗抗体体、非非特特异异性性免免疫疫调调节节剂剂和和治治疗疗性性疫疫苗苗等等。根根据据不不同同的的病病程程，早早期期应应用用中中和和抗抗体体，可可阻阻断断病病毒毒在在体体内内血血液液中中的的扩扩散散，控控制制病病情情的的发发展展。我我国国已已用用针针对对乙乙脑脑病病毒毒包包膜膜抗抗原原的的单单克克隆隆抗抗体体，治治疗疗乙乙脑脑患患者者有有效效。鼠鼠源源性性单单克克隆隆抗抗体体在在体体内内存存留留的的时时间间不不长长，并并可可引引起起超超敏敏反反应应，现现国国外外均均致致力力于于研研制制人人源源单单克克隆隆抗抗体体，或或研研制制重重组组表表达达人人源源抗抗病病毒毒单单克克隆隆抗抗体体。4646感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929五、免疫治疗五、免疫治疗 免疫治疗病毒感染可应用特异性抗体、非特异性免疫治疗病毒感染可应用特异性抗体、非特异性THE END4747感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月2929THE END47感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月294848感谢你的观看感谢你的观看20192019年年8 8月月292948感谢你的观看感谢你的观看2019年年8月月29