中药分析概论课件

中药分析概论中药分析概论Brief Introduction of Brief Introduction of TCM AnalysisTCM Analysis中药分析概论Brief Introduction of T学习要求学习要求n掌握部分：掌握部分：1、掌握中药分析的特点、掌握中药分析的特点2、样品前处理和纯化方法、样品前处理和纯化方法3、中药鉴别试验和主要的含量测定方法、中药鉴别试验和主要的含量测定方法4、中药指纹图谱及其研究方法、中药指纹图谱及其研究方法n熟悉部分：熟悉部分：1、中药主要检查项目和浸出物、中药主要检查项目和浸出物2、中药中有害物质的测定方法、中药中有害物质的测定方法n了解部分：了解部分：1、中药体内动态及代谢组学研究方法、中药体内动态及代谢组学研究方法学习要求掌握部分：目目 录录中药分析的特点中药分析的特点中药分析的特点中药分析的特点12鉴别实验鉴别实验鉴别实验鉴别实验3检查检查检查检查4含量测定含量测定含量测定含量测定5中药安全性相关的质量控制项目中药安全性相关的质量控制项目中药安全性相关的质量控制项目中药安全性相关的质量控制项目6中药指纹图谱和特征图谱中药指纹图谱和特征图谱中药指纹图谱和特征图谱中药指纹图谱和特征图谱7中药分析的样品处理方法中药分析的样品处理方法中药分析的样品处理方法中药分析的样品处理方法中药体内分析中药体内分析中药体内分析中药体内分析8目 录中药分析的特点12鉴别实验3检查4含量测定5中药安什么是中药？什么是中药？什么是中药？中中 药药n以以中医药学理论体系的中医药学理论体系的术语表述其性能、功效和术语表述其性能、功效和使用规律，并且按中医药学理论指导其临床应用使用规律，并且按中医药学理论指导其临床应用的药物。的药物。n中医使用的药物称之为中药？中医使用的药物称之为中药？nChinese Medicine（中医中医药）药）nTraditional Chinese Medicine（TCM，传统传统中医中医药）药）nChinese Materia Medica（CMM，中药），中药）中 药以中医药学理论体系的术语表述其性能、功效和使用规律中医药理论中医药理论n中药药性中药药性：性（四气）、味（五味）、归经：性（四气）、味（五味）、归经（脏腑经络）等。（脏腑经络）等。n冰片：辛、苦冰片：辛、苦,微寒。归心、脾、肺经。微寒。归心、脾、肺经。n单味药有性味归经，复方呢？单味药有性味归经，复方呢？中医药理论中药药性：性（四气）、味（五味）、归经（脏腑经络）中医药理论中医药理论n配伍理论：君臣佐使？（复方配伍原则）配伍理论：君臣佐使？（复方配伍原则）n复方丹参：丹参、三七、冰片复方丹参：丹参、三七、冰片n大处方（大处方（5味）如何区分和控制质量？味）如何区分和控制质量？中医药理论配伍理论：君臣佐使？（复方配伍原则）中医药理论中医药理论n整体观（整体观（holistic theory）：系统观？）：系统观？n小檗碱代表黄连？小檗碱代表黄连？n黄酮类代表黄芩？黄酮类代表黄芩？中医药理论整体观（holistic theory）：系统观？中医药理论中医药理论n辨证论治：辨证论治：Precision Medicine？中医药理论辨证论治：Precision Medicine？中医药现代化？中医药现代化？中医药现代化？中医药现代化的优势和不足中医药现代化的优势和不足n优势：优势：临床有效临床有效 毒副作用小毒副作用小 费用低？费用低？n不足：不足：质量不稳定质量不稳定 成分不清成分不清 作用机理不明作用机理不明 质量标准！质量标准！中医药现代化的优势和不足优势：质量标准！中国药典中国药典20102010年版年版I I部部药材和饮片药材和饮片植物油脂和提取物植物油脂和提取物成方制剂和单味制剂成方制剂和单味制剂 中药质量标准中国药典2010年版I部中药质量标准第一节第一节 中药分析的特点中药分析的特点一、以中医药理论为指导，评价中药质量的整体性一、以中医药理论为指导，评价中药质量的整体性 1、中药药性、中药药性 2、君臣佐使、君臣佐使 3、整体观、整体观 4、。、。第一节 中药分析的特点一、以中医药理论为指导，评价中药质量二、中药成分具复杂性，药效成分非单一性二、中药成分具复杂性，药效成分非单一性第一节第一节 中药分析的特点中药分析的特点二、中药成分具复杂性，药效成分非单一性第一节 中药分析的特三、中药材质量具有多变性三、中药材质量具有多变性n n 五倍子五倍子 鞣质（鞣质（80%）n 槐米槐米 芦丁（芦丁（20%）n 长春花长春花 长春新碱（百万分之一）长春新碱（百万分之一）第一节第一节 中药分析的特点中药分析的特点三、中药材质量具有多变性第一节 中药分析的特点四、中药炮制、制剂工艺及辅料具有多样性，杂四、中药炮制、制剂工艺及辅料具有多样性，杂质来源途径多质来源途径多第一节第一节 中药分析的特点中药分析的特点 例：三黄泻心汤干浸膏（大黄例：三黄泻心汤干浸膏（大黄/黄连黄连/黄芩）黄芩）常压常压 减压减压 逆浸透逆浸透 成分成分 浓缩浓缩 浓缩浓缩 喷雾喷雾小檗碱小檗碱 34.5 37.5 94.5%黄连碱黄连碱 6.3 12.0 93.7%黄芩苷黄芩苷 77.4 77.6 98.5%四、中药炮制、制剂工艺及辅料具有多样性，杂质来源途径多第一节第二节第二节 中药分析的样品处理方法中药分析的样品处理方法含量测定含量测定检查检查鉴别鉴别取样取样中药分析的一般程序中药分析的一般程序前处理前处理第二节 中药分析的样品处理方法含量测定检查鉴别取样中药分析一、中药分析的前处理方法一、中药分析的前处理方法n根据作用机制，可分为：根据作用机制，可分为：n液固提取法，液固提取法，Liquid-Solid Extraction，LSEn液液提取法，液液提取法，Liquid-Liquid Extraction，LLEn水蒸气蒸馏法，水蒸气蒸馏法，Steam Distillation，SDn超临界流体提取法，超临界流体提取法，Supercritical Fluid Extraction,SFE一、中药分析的前处理方法根据作用机制，可分为：1、液固提取法（、液固提取法（LSE）1、液固提取法（LSE）用于皂苷类用于皂苷类正丁醇正丁醇正丁醇正丁醇氯仿氯仿氯仿氯仿乙醚、石油醚乙醚、石油醚醋酸乙酯醋酸乙酯醋酸乙酯醋酸乙酯n也称萃取法利用溶质在两种互不相也称萃取法利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同溶的溶剂中溶解度的不同用于生物碱类用于生物碱类用于黄酮类用于黄酮类用于挥发油用于挥发油2、液液提取法（、液液提取法（LLE）用于皂苷类正丁醇氯仿乙醚、石油醚醋酸乙酯也称萃取法利用溶3、水蒸气蒸馏（、水蒸气蒸馏（SD）n用于提取挥发油，小分子生物碱等用于提取挥发油，小分子生物碱等3、水蒸气蒸馏（SD）用于提取挥发油，小分子生物碱等4、超临界流体提取法（、超临界流体提取法（SFE）超临界流体超临界流体是指在临界温度和临界压力以上是指在临界温度和临界压力以上的流体，介于气体与液体之间的一种物相。的流体，介于气体与液体之间的一种物相。超临界CO2：Pc=7.37MPa；Tc=31.3 4、超临界流体提取法（SFE）超临界流体是指在临界温度和临界超临界流体萃取法超临界流体萃取法CO2萃取过程萃取过程无味、无臭、无味、无臭、无毒，安全性无毒，安全性好；好；CO2价格便宜，价格便宜，纯度高，可循纯度高，可循环使用；环使用；样品易浓集；样品易浓集；超临界流体萃取法CO2萃取过程无味、无臭、无毒，安全性好；nPurify，目的：去除干扰，富集组分，目的：去除干扰，富集组分二、中药分析样品的纯化方法二、中药分析样品的纯化方法过滤法过滤法柱色谱法柱色谱法薄层色谱法薄层色谱法Purify，目的：去除干扰，富集组分二、中药分析样品的纯化第三节第三节 鉴别试验（鉴别试验（Identification Test）假药泛滥，质量难以保证，严重危害群众健康！假药泛滥，质量难以保证，严重危害群众健康！第三节 鉴别试验（Identification Test）鉴别是保障药品质量的第一步！鉴别是保障药品质量的第一步！鉴别：判定真伪鉴别：判定真伪检查：安全性、有效性、均一性检查：安全性、有效性、均一性含量测定：有效成分的定量含量测定：有效成分的定量药品检验工作的主要内容药品检验工作的主要内容鉴别是保障药品质量的第一步！鉴别：判定真伪药品检验工作的主要复习：维生素复习：维生素C的鉴别的鉴别一般鉴一般鉴别别专属鉴专属鉴别别复习：维生素C的鉴别一般鉴别专属鉴别化学药物的鉴别化学药物的鉴别n化化学学药药物物的的鉴鉴别别步步骤骤：（1）性性状状（2）一一般般鉴鉴别别试试验验（理理化化鉴鉴别别为为主主）（3）专专属属鉴鉴别别试试验验（光光谱谱鉴鉴别别为为主主）化学药物的鉴别化学药物的鉴别步骤：例：中药黄芪的鉴别例：中药黄芪的鉴别例：中药黄芪的鉴别显微鉴别显微鉴别黄芪黄芪处理处理供试品供试品黄芪甲苷黄芪甲苷对照药材对照药材处理处理对照药材对照药材薄层色谱法薄层色谱法比较比较位置位置Rf颜色颜色大小大小斑点斑点黄芪处理供试品黄芪甲苷对照药材处理对照药材薄层色谱法比较位置中药的鉴别中药的鉴别（1）性状）性状（2）显微鉴别）显微鉴别（3）（薄层）色谱鉴别）（薄层）色谱鉴别（4）理化鉴别）理化鉴别中药的鉴别（1）性状例：乙肝宁颗粒的鉴别例：乙肝宁颗粒的鉴别例：乙肝宁颗粒的鉴别黄芪黄芪乙乙肝肝宁宁颗颗粒粒处理处理处理方法处理方法1处理方法处理方法2处理方法处理方法3处理方法处理方法4黄芪甲苷黄芪甲苷原儿茶醛原儿茶醛芍药苷芍药苷何首乌何首乌大黄素大黄素薄层色薄层色谱法谱法比较比较位置位置Rf颜色颜色大小大小斑点斑点乙肝宁颗粒处理处理方法1处理方法2处理方法3处理方法4黄芪甲中药分析概论课件中药复方不同于单味药的鉴别内容：中药复方不同于单味药的鉴别内容：（1）中药复方，中药复方，原则上每味药都要鉴别。原则上每味药都要鉴别。最少要选最少要选择制剂处方中的择制剂处方中的1/3的药味进行鉴别。的药味进行鉴别。（2）按按君臣佐使君臣佐使选择药味进行鉴别（黄芪、丹参）。选择药味进行鉴别（黄芪、丹参）。（3）对对贵重药、毒性药进行鉴别（何首乌）。贵重药、毒性药进行鉴别（何首乌）。（4）凡有凡有原粉原粉入药者，应做入药者，应做显微鉴别显微鉴别。没有显微鉴。没有显微鉴别的，尽可能做理化鉴别。别的，尽可能做理化鉴别。n思考题：中药单味药的流浸膏或提取物是否可思考题：中药单味药的流浸膏或提取物是否可以采用显微鉴别的方法？以采用显微鉴别的方法？中药复方不同于单味药的鉴别内容：（1）中药复方，原则上每味药中药及其制剂鉴别方法中药及其制剂鉴别方法u 形状、大小形状、大小u 色泽、表面特征色泽、表面特征u 质地、折断面特征质地、折断面特征u 气味气味性状鉴别性状鉴别中药及其制剂鉴别方法 形状、大小性状鉴别u 对组织、细胞或内含对组织、细胞或内含物进行鉴别物进行鉴别u 显微特征应明显、易显微特征应明显、易查见查见u 多来源药材应选择其多来源药材应选择其共有的特征共有的特征显微鉴别显微鉴别 对组织、细胞或内含物进行鉴别显微鉴别u 多为化学法观察颜色多为化学法观察颜色反应或沉淀反应，易受反应或沉淀反应，易受植物中其他成分干扰植物中其他成分干扰u 矿物药及特殊鉴别反矿物药及特殊鉴别反应中仍在采用应中仍在采用理化鉴别理化鉴别 多为化学法观察颜色反应或沉淀反应，易受植物中其他成分干扰理u 制备供试液制备供试液u 色谱条件选择：获得色谱条件选择：获得清晰、圆整、比移值稳清晰、圆整、比移值稳定和可重复的色谱图定和可重复的色谱图u 对照物选择对照物选择u 显色与检视显色与检视u 鉴别和限度检查鉴别和限度检查色谱鉴别色谱鉴别薄层色谱法薄层色谱法 制备供试液色谱鉴别薄层色谱法u 采用公认的、相对较短采用公认的、相对较短DNA序列进行序列进行物种物种鉴定。鉴定。u适用于难以用性状、显微和适用于难以用性状、显微和理化鉴定的中药及其理化鉴定的中药及其原物种鉴原物种鉴定定。DNA条形码条形码DNA序列序列 采用公认的、相对较短DNA序列进行物种鉴定。DNA条形码D第四节第四节 检查（检查（Purification Test）具有中药特色具有中药特色 的检查项目的检查项目水分水分总灰分总灰分酸不溶性酸不溶性灰分灰分农药残留量农药残留量杂质杂质重金属及重金属及 有害元素有害元素第四节 检查（Purification Test）具有中药中药分析概论课件中药制剂特有的剂型及检查项目中药制剂特有的剂型及检查项目中药制剂特有的剂型及检查项目中药分析概论课件其他杂质检查项目其他杂质检查项目n水分水分n膨胀度膨胀度n酸败度酸败度n溶出度溶出度n含量均匀度含量均匀度n浸出物测定浸出物测定n。其他杂质检查项目水分第五章第五章 含量测定（含量测定（Determination）n中药含量测定的原则：中药含量测定的原则：（1）凡已知有效成分、毒性成分或能反映内在）凡已知有效成分、毒性成分或能反映内在质量的指标成分的药材，应进行含量测定。质量的指标成分的药材，应进行含量测定。第五章 含量测定（Determination）中药含量测定（2）对中药制剂中君药、）对中药制剂中君药、毒性药毒性药、贵重药应进、贵重药应进行含量测定。行含量测定。第五章第五章 含量测定含量测定（2）对中药制剂中君药、毒性药、贵重药应进行含量测定。第五章（3）制剂含量测定尽可能选择与选用药材相同）制剂含量测定尽可能选择与选用药材相同的分析方法，要对处方中药材做全面考察。的分析方法，要对处方中药材做全面考察。如：黄芪如：黄芪黄芪甲苷黄芪甲苷TLC 乙肝宁颗粒乙肝宁颗粒黄芪黄芪黄芪甲苷黄芪甲苷TLC 但采用的方法可能不一样！？但采用的方法可能不一样！？第五章第五章 含量测定含量测定（3）制剂含量测定尽可能选择与选用药材相同的分析方法，要对处（4）测定干扰大且确证干扰无法排除而难以测）测定干扰大且确证干扰无法排除而难以测定的，可测定与其化学结构定的，可测定与其化学结构母核类似、相对分子母核类似、相对分子量接近量接近的种类成分的含量或测定浸出物。的种类成分的含量或测定浸出物。（5）含量限度）含量限度低于万分之一低于万分之一的，应增加一个含的，应增加一个含量测定指标或浸出物测定。量测定指标或浸出物测定。（6）化学方法测定有困难时，也可建立）化学方法测定有困难时，也可建立生物测生物测定定方法。方法。第五章第五章 含量测定含量测定（4）测定干扰大且确证干扰无法排除而难以测定的，可测定与其化方法方法u 主要用于测定挥发主要用于测定挥发油及其他挥发性组分含油及其他挥发性组分含量量u 内标法、外标法、内标法、外标法、归一化法等归一化法等分光光度法分光光度法化学分析法化学分析法高效毛细管电泳法高效毛细管电泳法电化学方法电化学方法含量测定的主要方法含量测定的主要方法u 多采用多采用RP-HPLCu 酸碱性化合物的酸碱性化合物的 流动相系统流动相系统u 梯度洗脱梯度洗脱&波长梯度波长梯度 u 薄层吸收扫描法薄层吸收扫描法&薄层荧光扫描法薄层荧光扫描法u 反射法反射法&透射法透射法u 直线式扫描直线式扫描&锯齿状扫描锯齿状扫描u 主要采用外标法定量主要采用外标法定量HPLCGCTLCS其他方法方法 主要用于测定挥发油及其他挥校正因子法同时测定多指标成分的含量校正因子法同时测定多指标成分的含量 待测成分待测成分标准品可得标准品可得多指标成分多指标成分 待测成分待测成分标准品难得标准品难得p 同建立单一成分测同建立单一成分测定的步骤类似，常采定的步骤类似，常采用梯度洗脱的方法以用梯度洗脱的方法以使个待测成分达到满使个待测成分达到满意的分离效果。意的分离效果。p 一测多评一测多评p 原理是在一定的线性范原理是在一定的线性范围内，母核结构类似成分围内，母核结构类似成分的量与检测器相应成正比的量与检测器相应成正比p计算出各成分吸收系数计算出各成分吸收系数间稳定的相关数值，仅测间稳定的相关数值，仅测定定1个对照品，计算其他成个对照品，计算其他成分含量分含量n中国药典采用此法对黄连中的表小檗碱、黄连碱、巴马中国药典采用此法对黄连中的表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱进行含量测定汀、小檗碱进行含量测定 校正因子法同时测定多指标成分的含量 待测成分多指标成分 第六节第六节 中药安全性相关的质量控制项目中药安全性相关的质量控制项目n重金属与砷盐检查重金属与砷盐检查n农药残留量分析农药残留量分析n黄曲霉素测定黄曲霉素测定n中药注射剂中药注射剂n中药掺伪掺假和非法添加的检查中药掺伪掺假和非法添加的检查n毒性成分的控制毒性成分的控制第六节 中药安全性相关的质量控制项目重金属与砷盐检查重金属与砷盐检查重金属与砷盐检查重金属与砷盐检查重金属与砷盐检查重金属与砷盐检查nChP附录收载有四种重金属检查法，参见总论第附录收载有四种重金属检查法，参见总论第5章章n砷盐检查法砷盐检查法：古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法n双硫腙比色法：选择性地测定制剂中的铅双硫腙比色法：选择性地测定制剂中的铅n原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法：铅使用铅空心阴极灯测定；：铅使用铅空心阴极灯测定；砷用砷空心阴极灯砷用砷空心阴极灯重金属与砷盐检查ChP附录收载有四种重金属检查法，参见总论第HPLC-ICP-MS高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICP-MS）：测定中药中不同价态重金属离子的含量：测定中药中不同价态重金属离子的含量HPLC-ICP-MS高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（农药残留量分析农药残留量分析农药残留量分析残留农药种类残留农药种类n有有机机氯氯类类：六六六六六六、DDT、五五氯氯硝硝基基苯苯、艾艾氏剂氏剂n有有机机磷磷类类：磷磷酸酸酯酯类类（敌敌敌敌畏畏、敌敌百百虫虫）、硫硫代代磷磷酸酸酯酯类类（对对硫硫磷磷）、磷磷酰酰胺胺及及硫硫代代磷磷酰胺（酰胺（甲胺磷甲胺磷）n拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类：氯氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯溴氰菊酯n氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类：西维因、呋喃丹：西维因、呋喃丹残留农药种类有机氯类：六六六、DDT、五氯硝基苯、艾氏剂ChP2010ChP2010一部附录一部附录IX Q IX Q 农药残留量测定法农药残留量测定法 n有机氯类农药残留量测定有机氯类农药残留量测定n色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系统适用性试验：nSE-54（30m 0.32mm 0.25um）或或DB-1701，63Ni-ECD电电子子捕捕获获检检测测器器。进进样样口口温温度度：230；检检测测器器温温度度：300；不不分分流流进进样样；程程序序升升温温：初初始始100，每每分分钟钟10升至升至220，每分钟，每分钟8升至升至250，保持，保持10分钟分钟n理理论论塔塔板板数数按按-BHC峰峰计计算算，不不低低于于106，分分离离度度应应大大于于1.5。ChP2010一部附录IX Q 农药残留量测定法 有机氯类黄曲霉素黄曲霉素n毒性强，可诱发肝癌，以黄曲霉素毒性强，可诱发肝癌，以黄曲霉素B1毒性最毒性最强。强。n测定方法：测定方法：HPLC-荧光法，酶联免疫吸附法和荧光法，酶联免疫吸附法和LC-MS/MS法。法。黄曲霉素毒性强，可诱发肝癌，以黄曲霉素B1毒性最强。中药注射剂的检查中药注射剂的检查中药注射剂的检查中药掺伪造假和非法添加的检查中药掺伪造假和非法添加的检查n掺杂、掺伪、造假掺杂、掺伪、造假n用白芍的根茎部分染色加工成用白芍的根茎部分染色加工成川乌、草乌川乌、草乌n用红薯染色加工成制首乌；用红薯染色加工成制首乌；n用淀粉压模制成冬虫夏草；用淀粉压模制成冬虫夏草；n西洋参掺入生晒参短枝西洋参掺入生晒参短枝n用薄纸切细丝染色掺杂于西红用薄纸切细丝染色掺杂于西红花中；花中；n滥用硫磺熏蒸药材使美观和防滥用硫磺熏蒸药材使美观和防虫蛀虫蛀 中药掺伪造假和非法添加的检查掺杂、掺伪、造假莪术伪充三七的鉴别莪术伪充三七的鉴别n三七具有散瘀止血、消肿定痛等功能，因其疗效三七具有散瘀止血、消肿定痛等功能，因其疗效显著，商品价格昂贵，一些不法商贩在利益驱动显著，商品价格昂贵，一些不法商贩在利益驱动下，以廉价的莪术伪充。下，以廉价的莪术伪充。n莪术作用峻猛，伪充三七可能产生副作用，故应莪术作用峻猛，伪充三七可能产生副作用，故应加以区别应用加以区别应用 n粉末显微鉴别粉末显微鉴别n薄层色谱鉴别薄层色谱鉴别 莪术伪充三七的鉴别三七具有散瘀止血、消肿定痛等功能，因其疗效中药中毒性成分的检查中药中毒性成分的检查n毒性成分：毒性成分：n有治疗作用：规定限量，上限和下限有治疗作用：规定限量，上限和下限n无治疗作用：规定上限。无治疗作用：规定上限。中药中毒性成分的检查毒性成分：第七节第七节 中药指纹图谱和特征图谱中药指纹图谱和特征图谱第七节 中药指纹图谱和特征图谱定义定义n中药材或中成药中药材或中成药，经过，经过适当处理适当处理后，利用现代后，利用现代信息采集技术信息采集技术和质量分析手段，得到的能够显和质量分析手段，得到的能够显现中药材或中成药性质的现中药材或中成药性质的图像、图形、光谱的图像、图形、光谱的图谱及其数据图谱及其数据，称之为中药指纹图谱。，称之为中药指纹图谱。定义中药材或中成药，经过适当处理后，利用现代信息采集技术和质第八节第八节 中药体内分析中药体内分析n中药：复杂系统；人体：复杂系统中药：复杂系统；人体：复杂系统n人体人体中药：药代动力学，中药：药代动力学，ADME过程过程n中药中药人体：代谢组学，体内小分子物质人体：代谢组学，体内小分子物质第八节 中药体内分析中药：复杂系统；人体：复杂系统思考题思考题n1、相对于化学药品，中药质量控制在各个环、相对于化学药品，中药质量控制在各个环节上有何异同？节上有何异同？n2、矿物药和动物药的质量控制与植物药有何、矿物药和动物药的质量控制与植物药有何区别？区别？思考题1、相对于化学药品，中药质量控制在各个环节上有何异同？