临床微生物标本采集规范课件

临床微生物标本临床微生物标本采集规范采集规范临床微生物标本采集规范1世界人口死因世界人口死因 感染性疾病：感染性疾病：2525抗生素时代，感染仍是人抗生素时代，感染仍是人类健康的主要类健康的主要“杀手杀手”临床微生物标本采集规范课件2高死亡率原因高死亡率原因v新现传染病：新现传染病：近近3030年，已有近年，已有近3030种新的病原种新的病原生物，其中包括生物，其中包括HIVHIV、SARS SARS、禽流感和各种、禽流感和各种新型肝炎病毒等引起的各种疾病。新型肝炎病毒等引起的各种疾病。v再现传染病：再现传染病：以往已被认为得到很好控制的以往已被认为得到很好控制的传染病，如结核、登革热等的流行和传播又传染病，如结核、登革热等的流行和传播又重新抬头。重新抬头。高死亡率原因新现传染病：近30年，已有近30种新的病原生物，3v低免疫人群急剧上升：低免疫人群急剧上升：艾滋病、移植医学国际间艾滋病、移植医学国际间交通的快速便捷使得当今疾病传播无国界的概念。交通的快速便捷使得当今疾病传播无国界的概念。v气候变暖，人口快速增长，都市化进程加快，伴气候变暖，人口快速增长，都市化进程加快，伴随人口密度和人口流动增加，清洁水源不足和卫随人口密度和人口流动增加，清洁水源不足和卫生设施的不完善，以及生态破坏造成人与媒介生生设施的不完善，以及生态破坏造成人与媒介生物接触机会增多（物接触机会增多（动物微生物向人类的袭击动物微生物向人类的袭击）等。）等。v人类还没有足够的能力战胜病原体人类还没有足够的能力战胜病原体。v病原生物的抗药性产生的速度已超过新型抗生素病原生物的抗药性产生的速度已超过新型抗生素发明的速度（发明的速度（细菌耐药性的快速发展细菌耐药性的快速发展)。低免疫人群急剧上升：艾滋病、移植医学国际间交通的快速便捷使得4提高感染样本送检率提高感染样本送检率加强细菌耐药监测加强细菌耐药监测关注细菌性疾病的病原学诊断，已成为关注细菌性疾病的病原学诊断，已成为临床工作者、临床微生物与微生态工作者、临床工作者、临床微生物与微生态工作者、药学家和从事感染控制的工作者共同关注的药学家和从事感染控制的工作者共同关注的热门焦点。热门焦点。提高感染样本送检率5成功治疗感染症的因素成功治疗感染症的因素 成功分离病原菌成功分离病原菌标本收集、运送、保存标本收集、运送、保存标本处理方法标本处理方法检验医师专业知识检验医师专业知识 医师判读病原菌培养结果医师判读病原菌培养结果 选择适当治疗方法选择适当治疗方法成功治疗感染症的因素6临床医生要合理用好两种数据临床医生要合理用好两种数据v1.1.本地区、本单位病原流行病学资料，指导本地区、本单位病原流行病学资料，指导经验用药。经验用药。（微生物室、院感科、临床科室）（微生物室、院感科、临床科室）v2.2.药敏试验报告，纠正经验用药。药敏试验报告，纠正经验用药。重视病原学检查重视病原学检查,尽可能在应用抗菌药物之尽可能在应用抗菌药物之前留取标本送检。以提高病原学诊断率前留取标本送检。以提高病原学诊断率,为选为选药和调整药物提供依据。药和调整药物提供依据。临床医生要合理用好两种数据1.本地区、本单位病原流行病学资7 “正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。”著名的临床微生物检验专著Manual of Clinical Microbiology 的主编Patrick Murray “正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、护师及8 标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关键 但由于标本的采集和运送常由护士或医生或病人自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题所在之处，造成的后果是:临床医生最不能接受的问题:阳性率低 标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关键9国内微生物标本的采集目前存在的问题国内微生物标本的采集目前存在的问题 ：标本送检率低标本送检率低 从全国来看，抗感染治疗从全国来看，抗感染治疗前，送检相关标本可能只占应送标本的一半前，送检相关标本可能只占应送标本的一半左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，此时已失去阳性培养的机会。此时已失去阳性培养的机会。标本有缺陷标本有缺陷 正确收集各种临床标本，正确收集各种临床标本，关注特检标本采样与送检的方法和条件，是关注特检标本采样与送检的方法和条件，是完成病原学诊断的先决条件。完成病原学诊断的先决条件。国内微生物标本的采集目前存在的问题：10微生物让人类步步为营，微生物让人类步步为营，我们应该追求：我们应该追求：“准确的病原学诊断准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗针对性病原学治疗”正确的微生物标本采集和运送，正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！是准确的病原学诊断的前提！微生物让人类步步为营，11标本规范化采集的重要性标本规范化采集的重要性v正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌检验成功的关键。检验成功的关键。v标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础。要的临床感染信息的基础。v好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患照顾质量，降低医疗成本。照顾质量，降低医疗成本。标本规范化采集的重要性正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接12如何提高细菌阳性检出率如何提高细菌阳性检出率标本采集时机标本采集时机标本采集方法标本采集方法标本的质与量标本的质与量标本的运送与保存标本的运送与保存镜检筛选合格标本镜检筛选合格标本高质量、多种分离培养基高质量、多种分离培养基培养环境培养环境合理的收费制度合理的收费制度如何提高细菌阳性检出率标本采集时机13微生物样本采样基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检甚至床旁接种尤其是厌氧培养5.棉拭子标本宜用运送培养基6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂8.送检标本应注明来源和检验目的微生物样本采样基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查14标本收集部位 非无菌部位 无菌部位 眼 血液 耳 脊髓液 呼吸道 胸膜液 肠胃道 腹膜液 泌尿道 关节液 皮肤 毛发标本收集部位 非无菌部位 15一、血培养标本采集规范一、血培养标本采集规范一、血培养标本采集规范16相似规模医院的血培养数相似规模医院的血培养数 国内多数三甲综合医院国内多数三甲综合医院2 210 10 瓶瓶/天天 复旦大学中山医院复旦大学中山医院20205050瓶瓶/天天 香港玛丽医院香港玛丽医院200200瓶瓶/天天 台湾大学医院台湾大学医院300300瓶瓶/天天 我院约我院约10102020瓶瓶/天天相似规模医院的血培养数17（一）血培养检测采血指征（一）血培养检测采血指征 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者患者 1.1.发热（发热（3838）或低温（）或低温（3636）2.2.寒战寒战3.3.白细胞增多（白细胞增多（101010109 9/L/L，特别有，特别有“核左移核左移”未未成熟的或杆状核白细胞增多）成熟的或杆状核白细胞增多）4.4.粒细胞减少（成熟的多核白细胞粒细胞减少（成熟的多核白细胞11010105 5CFU/ml CFU/ml 或革兰阳性球菌数或革兰阳性球菌数10104 4CFU/mlCFU/ml时有临床诊断意义。时有临床诊断意义。（不是绝对的，受多（不是绝对的，受多因素影响，综合判断）因素影响，综合判断）v2.2.尿液标本的采集和培养中的问题是污染杂菌，故应尿液标本的采集和培养中的问题是污染杂菌，故应严格进行严格进行无菌操作无菌操作。v3.3.尿标本采集后应立即送检，以免污染，尿液中尿标本采集后应立即送检，以免污染，尿液中不得不得加防腐剂和消毒剂加防腐剂和消毒剂。（四）注意事项52v4.4.除非是流行病学调查，除非是流行病学调查，长期留置导尿管患者常规长期留置导尿管患者常规尿培养没有临床意义尿培养没有临床意义，大量病原菌常可在这类患者，大量病原菌常可在这类患者中检出，导尿管留置时间延长易导致与引起患者尿中检出，导尿管留置时间延长易导致与引起患者尿道感染不一致的微生物定植生长；道感染不一致的微生物定植生长；v5.5.不可从集尿袋的下端管口留取标本，集尿袋内的不可从集尿袋的下端管口留取标本，集尿袋内的尿液也不能用于培养，可能会引起污染；尿液也不能用于培养，可能会引起污染；v6.6.临床常让患者留取清洁中段尿，临床常让患者留取清洁中段尿，应该在医护人员应该在医护人员监督指导下让患者正确的留取清洁中段尿监督指导下让患者正确的留取清洁中段尿；v7.7.由于种种原因，患者常常不能正确地留取清洁中由于种种原因，患者常常不能正确地留取清洁中段尿，实验室只是针对尿液标本培养的结果进行评段尿，实验室只是针对尿液标本培养的结果进行评估，或常常由于分析前尿液标本污染了多种细菌无估，或常常由于分析前尿液标本污染了多种细菌无法正确解释的结果，可能延误了临床的正确诊断和法正确解释的结果，可能延误了临床的正确诊断和治疗。治疗。4.除非是流行病学调查，长期留置导尿管患者常规尿培养没有临床53下列因素可使尿液中细菌数量减少，判断结果下列因素可使尿液中细菌数量减少，判断结果时应注意时应注意使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；尿液稀释，尿比重尿液稀释，尿比重1.0031.003，营养成分减少，细菌生长迟缓；，营养成分减少，细菌生长迟缓；尿尿PHPH5.05.0或或8.58.5，细菌生长受阻；，细菌生长受阻；尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数减少；尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数减少；尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数减少；尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数减少；不同种类的细菌生长速度不同、营养要求不同，菌落计数有所不同种类的细菌生长速度不同、营养要求不同，菌落计数有所不同。不同。下列因素可使尿液中细菌数量减少，判断结果时应注意使用抗生54四、四、大便培养标本采集规范大便培养标本采集规范 四、大便培养标本采集规范 55（一）采集时间（一）采集时间v腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集新腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集新鲜粪便；伤寒患者在发病鲜粪便；伤寒患者在发病2 2周以后。周以后。（二）采集方法（二）采集方法v1 1自然排便采集法自然排便采集法 自然排便后，挑取有自然排便后，挑取有脓血或黏液脓血或黏液部部位的粪便位的粪便2-3g 2-3g，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或置于保存液或增菌液中送检。置于保存液或增菌液中送检。v2 2直肠拭子采集法直肠拭子采集法 对不易获得粪便或排便困难的患者对不易获得粪便或排便困难的患者及婴幼儿，可采用直肠拭子法采集标本，其方法是将拭子及婴幼儿，可采用直肠拭子法采集标本，其方法是将拭子前端用甘油湿润。然后插入肛门约前端用甘油湿润。然后插入肛门约4 45cm5cm（幼儿约（幼儿约2 23cm3cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，盛入无菌试管或保存液中送检。盛入无菌试管或保存液中送检。（一）采集时间56（三）实验室检查（三）实验室检查 v肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有各种正常菌群，形态上区分困难，因此各种正常菌群，形态上区分困难，因此一般不做直一般不做直接涂片检查接涂片检查。v只有当临床怀疑肠道菌群失调或检查霍乱弧菌、结只有当临床怀疑肠道菌群失调或检查霍乱弧菌、结核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩梭菌引起的伪膜核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩梭菌引起的伪膜性肠炎以及真菌性腹泻时，才做直接涂片检查。性肠炎以及真菌性腹泻时，才做直接涂片检查。v疑似葡萄球菌引起的抗菌素相关性肠炎，可取水样疑似葡萄球菌引起的抗菌素相关性肠炎，可取水样便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴性杆菌明显减少，革兰阳性球菌大量散在或成堆性杆菌明显减少，革兰阳性球菌大量散在或成堆（葡萄状）排列，可提示（葡萄状）排列，可提示肠道菌群失调肠道菌群失调。（三）实验室检查 57（四）注意事项（四）注意事项v在腹泻发病的正确时间收集标本，病人应尽量在急在腹泻发病的正确时间收集标本，病人应尽量在急性期（性期（3d3d）内和用药前采集标本，以提高检出率。）内和用药前采集标本，以提高检出率。v大便标本中含有很多杂菌，粪便标本的采集须注意大便标本中含有很多杂菌，粪便标本的采集须注意防止外界脏物污染，防止外界脏物污染，尽量采用无菌容器。尽量采用无菌容器。v为提高阳性检出率，要采集新鲜标本，立即送检。为提高阳性检出率，要采集新鲜标本，立即送检。（四）注意事项在腹泻发病的正确时间收集标本，病人应尽量在急性58五、五、生殖道标本采集规范生殖道标本采集规范 五、生殖道标本采集规范 59（一）送检指征（一）送检指征1.1.男性泌尿系统表现男性泌尿系统表现尿急、尿频、尿痛尿急、尿频、尿痛尿道分泌物增多尿道分泌物增多会阴部疼痛及阴囊疼痛会阴部疼痛及阴囊疼痛性功能障碍性功能障碍泌尿生殖器畸形和缺损泌尿生殖器畸形和缺损（一）送检指征1.男性泌尿系统表现602.2.女性泌尿系统表现女性泌尿系统表现分泌物增多及性状异常分泌物增多及性状异常尿道口搔痒及脓性分泌物流畅尿道口搔痒及脓性分泌物流畅下腹疼痛下腹疼痛月经失调月经失调阴道出血阴道出血外阴搔痒外阴搔痒外阴或阴道疼痛外阴或阴道疼痛性功能障碍性功能障碍临床微生物标本采集规范课件61（二）标本采集（二）标本采集v生殖器官标本包括子宫颈、阴道、前列腺；生殖器官标本包括子宫颈、阴道、前列腺；男性及女性外生殖器的分泌物及经血等。应男性及女性外生殖器的分泌物及经血等。应根据感染的部位和可能的病原体决定用于病根据感染的部位和可能的病原体决定用于病原学诊断的标本种类、采集部位和采集方法原学诊断的标本种类、采集部位和采集方法等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，收集于无菌试管内送检。师采集，收集于无菌试管内送检。（二）标本采集62v尿道分泌物1.女性尿道：患者排尿1小时后采集，首先拭去尿道口的渗出物；再用拭子通过阴道，靠着耻骨联合，按摩尿道，采集分泌物；如未获得分泌物，清洗外尿道，用灭菌纱布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道24cm，旋转拭子2秒。2.男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm，旋转拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收。尿道分泌物63v阴道分泌物 擦除过多的分泌物和排出液，用无菌棉拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹窿处分泌物，如果需要涂片，需再用一个拭子。v男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，冲洗尿道膀胱，从肛门用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用无菌容器收集。无肉眼可见脓液时，可用灭菌拭子轻轻伸入前尿道内，旋转拭子采集标本。阴道分泌物64（三）注意事项（三）注意事项 1.1.生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵循无菌操作规程以减少杂菌污染。循无菌操作规程以减少杂菌污染。2.2.由于阴道正常菌群的存在而使细菌的分离鉴定由于阴道正常菌群的存在而使细菌的分离鉴定受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽量量减少或避免正常菌群的污染减少或避免正常菌群的污染。3.3.疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送检。检。4.4.沙眼衣原体和病毒沙眼衣原体和病毒均在宿主细胞内繁殖，取材均在宿主细胞内繁殖，取材时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几秒钟，并采集尽可能多的上皮细胞。秒钟，并采集尽可能多的上皮细胞。（三）注意事项65 5.5.生殖道感染生殖道感染厌氧菌厌氧菌也较多见，疑有厌氧菌感染也较多见，疑有厌氧菌感染时，标本采集和运送应避免与氧气接触，最佳方时，标本采集和运送应避免与氧气接触，最佳方法是床边采样，直接接种至厌氧装置内。法是床边采样，直接接种至厌氧装置内。6.6.淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌检查时，取材的深度一定要够，因检查时，取材的深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈尿道及子宫颈3cm3cm深转动并停留深转动并停留10-30s10-30s取样送检。取样送检。7.7.淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境变化颇为敏感，淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后要尽快送检，立即接种，有足够的成功率，取材后要尽快送检，立即接种，标本离体时间越短越好。标本离体时间越短越好。临床微生物标本采集规范课件66六、六、化脓和创伤标本采集规范化脓和创伤标本采集规范六、化脓和创伤标本采集规范67 组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可分为两类：组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可分为两类：v 内源性内源性：感染源是炎症局部周围器官中的正常菌群，：感染源是炎症局部周围器官中的正常菌群，由于损伤等因素进入无菌状态的组织内，发生感染。由于损伤等因素进入无菌状态的组织内，发生感染。v 外源性外源性：感染源是存在于人体外部自然界的微生物，：感染源是存在于人体外部自然界的微生物，由于外伤和直接接触通过人体表面进入人体，造成感染由于外伤和直接接触通过人体表面进入人体，造成感染。脓液的细菌学检查对于确定感染的种类（结核性或非脓液的细菌学检查对于确定感染的种类（结核性或非结核性等）、提供药物敏感结果和指导临床治疗有重要结核性等）、提供药物敏感结果和指导临床治疗有重要的意义。的意义。组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可分为两类：68（一）标本采集（一）标本采集v1 1开放性感染和已溃破的化脓灶开放性感染和已溃破的化脓灶 标本采集前先标本采集前先用灭菌生理盐水拭去表面渗出物，尽可能用抽吸或用灭菌生理盐水拭去表面渗出物，尽可能用抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，从脓肿底部从脓肿底部或脓肿壁取样，效果最好或脓肿壁取样，效果最好。慢性感染，污染严重，。慢性感染，污染严重，很难分离到致病菌，可取感染部位下的组织，研磨很难分离到致病菌，可取感染部位下的组织，研磨成组织匀浆接种于适宜的培养基。成组织匀浆接种于适宜的培养基。v2 2封闭性脓肿封闭性脓肿 局部消毒后用局部消毒后用针及注射器抽吸针及注射器抽吸脓脓肿壁，将所有物质置于无菌试管内送检，疑为厌氧肿壁，将所有物质置于无菌试管内送检，疑为厌氧菌感染时立即作床边接种或置于厌氧转运装置送检菌感染时立即作床边接种或置于厌氧转运装置送检（针头插一橡皮塞隔绝空气）。但取样时，可能会（针头插一橡皮塞隔绝空气）。但取样时，可能会带入与感染过程无关的定植细菌。带入与感染过程无关的定植细菌。v3 3大面积创伤感染大面积创伤感染：可取感染组织块或沾有脓汁的：可取感染组织块或沾有脓汁的内层敷料送检。内层敷料送检。（一）标本采集69（二）注意事项（二）注意事项v细菌对干燥敏感细菌对干燥敏感或只能采集少量标本时，用棉拭或只能采集少量标本时，用棉拭子采集标本后立即放入液体培养基内，或采标本子采集标本后立即放入液体培养基内，或采标本前先将棉拭子沾少许肉汤以前先将棉拭子沾少许肉汤以保持标本湿度保持标本湿度。v对于不能立即送检的标本，应放对于不能立即送检的标本，应放44保存，培养保存，培养淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌的标本除外。淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌的标本除外。v尽可能在用药前采集标本。尽可能在用药前采集标本。v采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。v革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细胞提示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞胞提示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本采集正确。说明标本采集正确。v有的创伤均可有细菌污染，但不一定发生感染，有的创伤均可有细菌污染，但不一定发生感染，因此对分离到的细菌要根据创伤的情况、菌量和因此对分离到的细菌要根据创伤的情况、菌量和种数，收集标本的处理过程、机体免疫力及抗生种数，收集标本的处理过程、机体免疫力及抗生素的使用情况等多种因素来分析判断。素的使用情况等多种因素来分析判断。临床微生物标本采集规范课件70七、七、穿刺液标本采集规范穿刺液标本采集规范 七、穿刺液标本采集规范 71v穿刺液主要包括穿刺液主要包括:脑脊液脑脊液 胆汁胆汁 胸水胸水 腹水腹水 心包液心包液 关节液关节液 鞘膜液鞘膜液 在正常人体中，上述体液均是无菌的。有感染的在正常人体中，上述体液均是无菌的。有感染的情况下检出的细菌，在排除污染后应视为病原菌，情况下检出的细菌，在排除污染后应视为病原菌，及时给予正确的治疗，使病人早日恢复健康。及时给予正确的治疗，使病人早日恢复健康。穿刺液主要包括:72（一）脑脊液（一）脑脊液1.1.采集时间采集时间：怀疑为脑膜炎的病人，应立即采集脑怀疑为脑膜炎的病人，应立即采集脑脊液，最好在使用抗菌药物以前采集标本。脊液，最好在使用抗菌药物以前采集标本。2.2.采集方法采集方法：用腰穿方法采集脑脊液用腰穿方法采集脑脊液3 35ml5ml，分装，分装到到3 3个无菌试管中，每个试管个无菌试管中，每个试管1 12ml2ml。第一管用于第一管用于细菌培养细菌培养!也可将抽取液直接注入血培养瓶也可将抽取液直接注入血培养瓶,用血培养仪培养。用血培养仪培养。（一）脑脊液733.标本运送和保存：标本运送和保存：脑膜炎奈瑟菌离体后会迅速自溶,肺炎链球菌和流感嗜血杆菌也很容易死亡,因此,标本应立即送检,并注意保温、防干燥。切不可置冰箱保存,否则会影响检出率。脑脊液标本送检的理想时间为15分钟内，半小时送检是可接受的，如果送检时间超过1小时，则会影响结果。如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用血培养瓶）3.标本运送和保存：脑膜炎奈瑟菌离体后会迅速自溶,肺炎链球菌74新型隐球菌墨汁负染色新型隐球菌墨汁负染色左图：低倍镜；右图：高倍镜左图：低倍镜；右图：高倍镜新型隐球菌墨汁负染色75 （二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、（二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）心包液、关节液及鞘膜液等）1.1.采集时间采集时间 怀疑感染存在，应尽早采集标本，怀疑感染存在，应尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后2-32-3天天采集。采集。2.2.采集方法采集方法v无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本。无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本。v标本采集量应标本采集量应1ml1ml。胸腔积液、腹水可抽取胸腔积液、腹水可抽取10ml,10ml,心包液、关节液等可抽心包液、关节液等可抽取取2 25ml 5ml。v标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检也可标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检也可将抽取液直接注入血培养瓶，用血培养仪培养。将抽取液直接注入血培养瓶，用血培养仪培养。v为防止穿刺液的凝固为防止穿刺液的凝固，应在无菌试管中预先加入，应在无菌试管中预先加入灭菌肝素，灭菌肝素，再注入穿刺液。再注入穿刺液。（二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及76八、八、眼、耳、鼻、咽拭子标本采集规范眼、耳、鼻、咽拭子标本采集规范 八、眼、耳、鼻、咽拭子标本采集规范 77 正常眼部、中耳及鼻窦内是无菌的，而咽正常眼部、中耳及鼻窦内是无菌的，而咽峡部有口腔的常在菌丛。峡部有口腔的常在菌丛。耳、鼻、咽部的细耳、鼻、咽部的细菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有需氧菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有需氧菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官的感菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官的感染不仅考虑是需氧菌，也须检查厌氧菌。染不仅考虑是需氧菌，也须检查厌氧菌。正常眼部、中耳及鼻窦内是无菌的，而咽峡部有口腔的常78（一）标本采集（一）标本采集 1.1.眼眼 结膜结膜：分别用（无菌盐水预湿）拭子绕每一个结膜取；：分别用（无菌盐水预湿）拭子绕每一个结膜取；采集完即接种培养基；将拭子涂片在两个玻片上染色。采集完即接种培养基；将拭子涂片在两个玻片上染色。角膜刮擦角膜刮擦：滴两滴局部麻醉液；用无菌铲刮擦脓肿或：滴两滴局部麻醉液；用无菌铲刮擦脓肿或溃疡，将刮擦物直接接种于培养基；将剩余材料涂于溃疡，将刮擦物直接接种于培养基；将剩余材料涂于两个干净的玻片上染色。两个干净的玻片上染色。液体或抽吸物液体或抽吸物：备眼，用针头抽吸液体。先用无菌生：备眼，用针头抽吸液体。先用无菌生理盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用无菌棉拭理盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用无菌棉拭子采集分泌物。子采集分泌物。（一）标本采集792.2.耳耳 内耳内耳：对复杂的、反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓：对复杂的、反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓膜穿刺术，接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注膜穿刺术，接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器收集液体；对破裂的鼓室，借助耳科诊视器，射器收集液体；对破裂的鼓室，借助耳科诊视器，用软杆拭子收集液体。用软杆拭子收集液体。外耳外耳：用湿拭子将耳道的任何碎屑或痂皮拭去；在：用湿拭子将耳道的任何碎屑或痂皮拭去；在外耳道用力旋转拭子取样。外耳道用力旋转拭子取样。3 3鼻或鼻咽分泌物鼻或鼻咽分泌物 直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接触直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接触周围粘膜或皮肤，标本立即送检。周围粘膜或皮肤，标本立即送检。4 4咽分泌物咽分泌物 先用清水漱口，用压舌板将舌向下向外压，先用清水漱口，用压舌板将舌向下向外压，将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，插入运送培将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，插入运送培养基。切勿接触口腔和舌粘膜。养基。切勿接触口腔和舌粘膜。2.耳 80（二）标本运送和保存二）标本运送和保存 标本采集时，无菌手续以稍蘸肉汤的拭标本采集时，无菌手续以稍蘸肉汤的拭子采集病变明显处的脓液和分泌物。采取后子采集病变明显处的脓液和分泌物。采取后拭子应置于运送培养基或培养拭子运送，以拭子应置于运送培养基或培养拭子运送，以防干燥。立即送检，如不能及时送检，应置防干燥。立即送检，如不能及时送检，应置于于冰箱保存，超过冰箱保存，超过48h48h不可使用。不可使用。（二）标本运送和保存81九、九、导管标本采集规范导管标本采集规范 九、导管标本采集规范 82 血管内留置管道是现代医护工作，尤其是血管内留置管道是现代医护工作，尤其是ICUICU一个不可缺少的部分。一个不可缺少的部分。目前使用的有外周静脉导管和单腔、多腔的目前使用的有外周静脉导管和单腔、多腔的中心静脉导管、隧道式的中心静脉导管、漂浮式中心静脉导管、隧道式的中心静脉导管、漂浮式肺动脉导管、经外周静脉置入中心静脉的导管、肺动脉导管、经外周静脉置入中心静脉的导管、外周动脉导管等。外周动脉导管等。这些可留置的通道为医疗工作的液体、血液这些可留置的通道为医疗工作的液体、血液制品、营养物质、药物的输入、血流动力学监测、制品、营养物质、药物的输入、血流动力学监测、采血及急救通道的维持提供了可靠途径；但同时采血及急救通道的维持提供了可靠途径；但同时也带来了各种并发症，如导管相关的局部感染与也带来了各种并发症，如导管相关的局部感染与菌血症、血栓形成、血栓性脉管炎、脓性血栓脉菌血症、血栓形成、血栓性脉管炎、脓性血栓脉管炎等。管炎等。血管内留置管道是现代医护工作，尤其是ICU一个不83血管导管培养血管导管培养 血管导管（血管导管（intravascular catheter tips intravascular catheter tips）及腹）及腹膜透析导管（膜透析导管（peritoneal dialysis catheters peritoneal dialysis catheters）培）培养是侦测血流感染源方法之一养是侦测血流感染源方法之一 标准方法：标准方法：经由导管抽取经由导管抽取20ml20ml血液，进行血液培养；血液，进行血液培养；导管周围的皮肤乙醇消毒，然后以无菌剪刀取下约导管周围的皮肤乙醇消毒，然后以无菌剪刀取下约5cm5cm长度，置于无菌容器中送检（防干燥，不能作床旁接长度，置于无菌容器中送检（防干燥，不能作床旁接种者，可将导管置含有少量生理盐水的无菌试管内送种者，可将导管置含有少量生理盐水的无菌试管内送检。也可将剪下的导管体内段置肉汤增菌液或用于血检。也可将剪下的导管体内段置肉汤增菌液或用于血培养液内，但不能区分导管感染菌与少量的定植菌）培养液内，但不能区分导管感染菌与少量的定植菌）再由静脉端抽血进行另外一套血液培养。再由静脉端抽血进行另外一套血液培养。血管导管培养84 标本处理：标本处理：实验室将体内段导管立即置血平皿上作滚实验室将体内段导管立即置血平皿上作滚动涂布接种，将血平板置动涂布接种，将血平板置3535培养培养8 824h24h，观察有无细菌生长，如细菌菌落数观察有无细菌生长，如细菌菌落数15 15 CFU/TipCFU/Tip即为阳性，则认为血流感染是可能即为阳性，则认为血流感染是可能与导管有关。与导管有关。标本处理：85导管相关感染主要病原菌：导管相关感染主要病原菌：v凝固酶阴性的葡萄球菌（主要是表皮葡萄凝固酶阴性的葡萄球菌（主要是表皮葡萄球菌）是最常见的导致导管相关性感染的球菌）是最常见的导致导管相关性感染的细菌，所占比例超过细菌，所占比例超过50%50%。主要原因是凝。主要原因是凝固酶阴性的葡萄球菌易粘附塑料导管，易固酶阴性的葡萄球菌易粘附塑料导管，易导致导管相关菌血症。导致导管相关菌血症。v其次是革兰氏阴性肠杆菌属及真菌，特别其次是革兰氏阴性肠杆菌属及真菌，特别是白色念珠菌。是白色念珠菌。v较少见的还有假单胞菌属、棒状菌属等。较少见的还有假单胞菌属、棒状菌属等。v其它如黄杆菌属、不动杆菌等不常见的感其它如黄杆菌属、不动杆菌等不常见的感染，常提示输液品感染或环境污染。染，常提示输液品感染或环境污染。导管相关感染主要病原菌：86十、十、组织标本采集规范组织标本采集规范 十、组织标本采集规范 87 根据不同的病变部位，炎症或坏死组织部位，采用相应的根据不同的病变部位，炎症或坏死组织部位，采用相应的方法采集组织标本。方法采集组织标本。（一）表浅组织（一）表浅组织 表浅的感染组织和各种窦道标本可用棉签擦拭、小刀表浅的感染组织和各种窦道标本可用棉签擦拭、小刀刮取、穿刺抽吸或手术切除。对窦道和瘘管应深部刮取管壁刮取、穿刺抽吸或手术切除。对窦道和瘘管应深部刮取管壁组织。组织。1 1皮肤、黏膜、指甲皮肤、黏膜、指甲 用棉签或小刀擦取或刮取，用棉签或小刀擦取或刮取，也可用手术切除或穿刺抽取置无菌试管送检。也可用手术切除或穿刺抽取置无菌试管送检。2 2牙周牙周 穿刺活检或抽取炎性分泌物置无菌的容器穿刺活检或抽取炎性分泌物置无菌的容器内送检。内送检。3 3窦道、瘘管窦道、瘘管 用深部刮取术，采集一小部分管用深部刮取术，采集一小部分管壁组织，置无菌的容器内送检。壁组织，置无菌的容器内送检。采集时间采集时间 一般表浅皮肤黏膜组织在使用抗菌药物之前采集。一般表浅皮肤黏膜组织在使用抗菌药物之前采集。88（二）深部组织（二）深部组织 深部组织标本可经皮肤穿刺采集或手术切取。深部组织标本可经皮肤穿刺采集或手术切取。标本置无菌容器并加少量生理盐水以保湿度，或置标本置无菌容器并加少量生理盐水以保湿度，或置肉汤增菌液，或置血平皿送检。如果怀疑为厌氧菌肉汤增菌液，或置血平皿送检。如果怀疑为厌氧菌感染，应把组织放入厌氧的传输系统内立即送检。感染，应把组织放入厌氧的传输系统内立即送检。采集各种深部组织活检之前，应严格进行皮肤消采集各种深部组织活检之前，应严格进行皮肤消毒后才行无菌穿刺采集。毒后才行无菌穿刺采集。采集时间采集时间 深部组织深部组织 包括肺、脑、胃、十二指肠等包括肺、脑、胃、十二指肠等腹部脏器、支气管、淋巴结、附件、扁桃体等，在腹部脏器、支气管、淋巴结、附件、扁桃体等，在手术或内窥镜检查时采集。手术或内窥镜检查时采集。（二）深部组织89v（三）作病原体分离的组织标本，不可用福尔马林固定。（三）作病原体分离的组织标本，不可用福尔马林固定。疑有污染的较大组织块，可用烧红的烙铁烧灼其表面或置疑有污染的较大组织块，可用烧红的烙铁烧灼其表面或置沸水中沸水中5 510s10s使表面变白消除污染后，再用无菌器械切开使表面变白消除污染后，再用无菌器械切开组织，取中央部位组织送检。组织，取中央部位组织送检。v 怀疑军团菌感染时，肺组织切片不要加入生理盐水，怀疑军团菌感染时，肺组织切片不要加入生理盐水，因为生理盐水可抑制军团菌生长。因为生理盐水可抑制军团菌生长。各种活检组织标本，在常温下保存最长时间为各种活检组织标本，在常温下保存最长时间为24h24h。（三）作病原体分离的组织标本，不可用福尔马林固定。疑有污染的90微生物标本的保存微生物标本的保存v储存环境储存环境 标本来源标本来源v44冰箱冰箱 尿液、痰液、粪便尿液、痰液、粪便v v3535温箱温箱 脑脊液细菌培养标本脑脊液细菌培养标本v室温室温 眼、耳、鼻、咽、血管导管、眼、耳、鼻、咽、血管导管、v 组织、体液、生殖道、组织、体液、生殖道、v 厌氧菌培养标本、厌氧菌培养标本、血液培养瓶血液培养瓶v 指甲，头发，皮肤刮取物霉菌培养标本指甲，头发，皮肤刮取物霉菌培养标本 微生物标本的保存91临床微生物标本采集规范课件92