免疫浊度测定及其临床应用课件

免疫浊度测定免疫浊度测定及其临床应用及其临床应用免疫浊度测定免免 疫疫 测测 定定IMMUNOASSAYI A免 疫 测 定免疫测定原理免疫测定原理利用抗原抗体反应检测标本中微量物质利用抗原抗体反应检测标本中微量物质 抗原抗原+抗体抗体 抗原抗体复合物抗原抗体复合物 Ag+Ab Ag*AbAg+Ab Ag*Ab免疫测定原理免疫测定特点免疫测定特点特异性特异性 抗原性不同的物质不干扰敏感性敏感性 g-ng-pg可测物可测物 蛋白质，酶，激素，药物，毒品免疫测定特点免疫测定分类免疫测定分类免疫浊度测定 g ng标记免疫测定 ng pg免疫测定分类免疫浊度测定 g ng免疫浊度测定免疫浊度测定免疫浊度测定免疫沉淀反应免疫沉淀反应海德堡曲线 Heidelbergs Curve免疫沉淀反应海德堡曲线 Heidelbergs抗原浓度抗原浓度测定范围测定范围抗体抗体过剩过剩抗原抗原过剩过剩Ag*Ab抗原浓度测定范围抗体过剩抗原过剩Ag*Ab免疫浊度测定分类免疫浊度测定分类透射浊度法透射浊度法散射浊度法散射浊度法免疫浊度测定分类透射浊度法和散射浊度法的光路透射浊度法和散射浊度法的光路检测器检测器A(透射浊度法)检测器检测器B(散射浊度法散射浊度法)I0I浑浊浑浊样品样品光源光源透射浊度法和散射浊度法的光路检测器A(透射浊度法)检测器B(散射浊度法散射浊度法免疫浊度测定及其临床应用课件Analyte Antibody Other stuffAnalyte-antibody complexingNow big enough to scatter lightToo small to detect opticallyWhat happens inside the flow cell?Analyte Antibody O321TimeScatterScatter Signal Versus TimeNephelometry1.Buffer addition 2.Sample Addition 3.Antibody additionFluid in the cell has causes little scatterAdding sample increases scatter slightlyAdding antibody causes a large increase in light scattering321TimeScatterScatter Signal V免疫浊度测定分类免疫浊度测定分类2终终 点点 法法速速 率率 法法免疫浊度测定分类2终 点 法终终 点点 法法固定时间法固定时间法终 点 法速率散射浊度法速率散射浊度法速率散射浊度法速率峰的测定速率峰的测定速率峰的测定速率峰的测定速率峰的测定速率峰的测定321TimeScatterMeasure the RATE After Antibody AdditionRate Nephelometry1.Buffer addition 2.Sample Addition 3.Antibody additionFirst derivative:rate of change of scatter over time;this is the SLOPE of the curveRate321TimeScatterMeasure the RATEPEAK RATETIMERATERate of Change of Scatter Signal versus TimePEAK RATETIMERATERate of ChangCONCENTRATIONRATE在速率峰基础上完成的标准曲线在速率峰基础上完成的标准曲线CONCENTRATIONRATE在速率峰基础上完成的标准曲抗原过剩的测定抗原过剩的测定抗原过剩的测定Analyte-antibody complexingAnalyte AntibodyAntigen ExcessAnalyte-antibody complexingAna免疫浊度测定及其临床应用课件RATE of SCATTER抗体过量时的反应抗原过量时的反应抗原过量时的反应60850反应时间反应时间(秒秒)ARRAYARRAY抗原过量自动检测抗原过量自动检测加入校正液加入校正液RATE of SCATTER抗体过量时的反应抗原过药物浓度测定药物浓度测定免疫浊度抑制测定免疫浊度抑制测定(小分子物质小分子物质)药物浓度测定免疫浊度抑制测定12Conjugate-antibody complexing213Inhibition of complexing by hapten(drug)1.Conjugate(hapten on carrier)2.Antibody3.Hapten(drug)12Conjugate-antibody complexin免疫浊度测定试剂免疫浊度测定试剂免疫浊度测定试剂抗体试剂的要求抗体试剂的要求1 1 特异性特异性2 2 亲和力亲和力3 3 反应时保持抗体过剩反应时保持抗体过剩4 4 测定范围应包括高于及低于测定范围应包括高于及低于5 5 正常值的正常值的50%50%5 5 测定的精密度应在测定的精密度应在5%5%左右左右抗体试剂的要求1 特异性2 亲和力3 校正曲线：聚乙二醇的增强作用校正曲线：聚乙二醇的增强作用抗原浓度C1C2C3吸光度4%4%聚乙二醇聚乙二醇不加聚乙二醇不加聚乙二醇校正曲线：聚乙二醇的增强作用抗原浓度C1C2C3吸光度4%聚试剂组成配方举例试剂组成配方举例试剂试剂1 1100mmol Tris或磷酸缓冲液 pH7.2 8.24%聚乙二醇(分子量6000或10000)1%非离子型表面活性剂150mmol氯化钠或硫酸钠0.1 g/l 叠氮钠试剂试剂2 2100mmol Tris或磷酸缓冲液 pH7.2 8.220%多克隆羊抗血清150mmol氯化钠0.1 g/l 叠氮钠试剂组成配方举例试剂1试剂2抗原浓度抗原浓度测定范围测定范围抗体抗体过剩过剩抗原抗原过剩过剩Ag*Ab抗原浓度测定范围抗体过剩抗原过剩Ag*Ab技术特性技术特性并行的检测系统并行的检测系统并行的检测系统并行的检测系统:Rate NIPIARate Nephelometry技术特性NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析近红外颗粒速率法免疫分析BenefitsBenefitsAbility to expand the menu Ability to expand the menu into high sensitivity assaysinto high sensitivity assaysincluding:Ferritin,Digoxin,and IgE.including:Ferritin,Digoxin,and IgE.NIR eliminates the interferenceNIR eliminates the interferenceof biological substances of biological substances such as biliribin and hemoglobin.such as biliribin and hemoglobin.NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析BenefitsNIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析近红外颗粒速率法免疫分析优点优点优点优点扩展检测菜单，增加高敏项目分析：扩展检测菜单，增加高敏项目分析：如铁蛋白，地高辛如铁蛋白，地高辛 ，IgEIgE，超敏超敏CRPCRP等等近红外波长分析消除生物物质如胆近红外波长分析消除生物物质如胆红素和血色素的干扰红素和血色素的干扰NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析优点NIR：940nm波长波长近近0oC检测角检测角检测颗粒大小：检测颗粒大小：200500nm直径直径速率法测定速率法测定NIR：940nm波长NIPIA：940nm LED光源光源速率散射法速率散射法：670nm 激光光源激光光源NIPIA：940nm 蛋白应用分类蛋白应用分类心血管功能监测心血管功能监测载脂蛋白载脂蛋白A1A1载脂蛋白载脂蛋白B B脂蛋白脂蛋白a a蛋白应用分类心血管功能监测