第八章杂环类药物的分析课件

第八章杂环类药物的分析第八章杂环类药物的分析1概述n n定义：定义：定义：定义：杂环类药物是指：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化杂环类药物是指：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化杂环类药物是指：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化杂环类药物是指：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化 合物，其中的非碳原子成为杂原子，一般为氧合物，其中的非碳原子成为杂原子，一般为氧合物，其中的非碳原子成为杂原子，一般为氧合物，其中的非碳原子成为杂原子，一般为氧 、硫、氮、硫、氮、硫、氮、硫、氮 等。等。等。等。n n分类：分类：分类：分类：按其所含的杂原子种类与数目，环的元数与环数的不同按其所含的杂原子种类与数目，环的元数与环数的不同按其所含的杂原子种类与数目，环的元数与环数的不同按其所含的杂原子种类与数目，环的元数与环数的不同 分为：分为：分为：分为：吡啶类、喹啉类、托烷类、酚噻嗪类和苯并二氮吡啶类、喹啉类、托烷类、酚噻嗪类和苯并二氮吡啶类、喹啉类、托烷类、酚噻嗪类和苯并二氮吡啶类、喹啉类、托烷类、酚噻嗪类和苯并二氮 卓类等。卓类等。卓类等。卓类等。而各大类又可根据环上取代基的类型、数目、而各大类又可根据环上取代基的类型、数目、而各大类又可根据环上取代基的类型、数目、而各大类又可根据环上取代基的类型、数目、位置的不同衍生出众多的位置的不同衍生出众多的位置的不同衍生出众多的位置的不同衍生出众多的同系列药物。同系列药物。同系列药物。同系列药物。概述定义：2n n共性共性:(1)(1)杂环类药物是合成药物中所占比例最多杂环类药物是合成药物中所占比例最多 的一大类药物的一大类药物.(2)(2)多为五元环或六元环多为五元环或六元环,单环或并合环单环或并合环.(3)(3)杂环结构较稳定杂环结构较稳定,不易开环不易开环,其性质受杂其性质受杂 原子种类、数目、位置影响原子种类、数目、位置影响.(4)(4)杂环上取代基性质较活泼杂环上取代基性质较活泼,常用于分析常用于分析.(5)(5)含氮杂环含氮杂环,其碱性的强弱往往用于分析其碱性的强弱往往用于分析.共性:3第一节第一节 吡啶类药物分析吡啶类药物分析一、结构分析1.结构：本类药物均有吡啶环吡啶异烟肼尼可刹米第一节吡啶类药物分析一、结构分析吡啶异烟肼尼可刹米42.性质：性质：（1 1）碱性：吡啶环上氮原子具有叔胺性质，）碱性：吡啶环上氮原子具有叔胺性质，pKb=8.8pKb=8.8（水中），可非水滴定；水中），可非水滴定；（2 2）母核能与金属盐反应生成有色沉淀）母核能与金属盐反应生成有色沉淀（3 3）异异烟烟肼肼：酰酰肼肼基基有有强强还还原原性性,且且能能与与羰羰基基缩缩合合,氧氧化还原滴定；化还原滴定；（4 4）尼尼可可刹刹米米:酰酰胺胺基基碱碱性性下下可可水水解解,放放出出NH(CNH(C2 2H H5 5)2 2，用于鉴别或凯氏定，用于鉴别或凯氏定N N直接蒸馏测定。直接蒸馏测定。2.性质：5二、鉴别：二、鉴别：（一）吡啶环的开环反应适用于a,a未取代，b,烷基或羧基取代的。1.戊烯二醛反应（knig反应）二、鉴别：1.戊烯二醛反应（knig反应）62、与2，4-二硝基氯苯反应，加醇制氢氧化钾紫红色紫红色2、与2，4-二硝基氯苯反应，加醇制氢氧化钾紫红色7（二）、酰肼基团的反应常用的氧化剂：I2、Br2、KBrO3、AgNO31还原反应：（二）、酰肼基团的反应常用的氧化剂：I2、Br2、KBrO8取本品约10mg加水2ml溶解加氨制硝酸银试液反应现象：产生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上形成银镜取本品约10mg加水2ml溶解加氨制硝酸银试液反应现象：产生92、缩合反应：与芳醛缩合形成腙，如香草醛、水杨醛、二甲氨基苯甲醛黄色异烟腙max=380nm，在105干燥后，测定熔点，228231香草醛2、缩合反应：与芳醛缩合形成腙，黄色异烟腙max=380n10(四)形成沉淀的反应（吡啶环）（1）与金属离子反应生成有色沉淀异烟肼,尼可刹米+HgCl2白色沉淀异烟肼+CuSO4红棕色（Cu2O）尼可刹米+CuSO4+硫氰酸钾草绿色絮状沉淀(四)形成沉淀的反应（吡啶环）（1）与金属离子反应生成有色沉11（五）分解产物的反应1.尼可刹米尼可刹米 ChP（2000）【鉴鉴别别】（1）取取本本品品 10 滴滴，加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液 3 ml，加加热热，即即发发生生二二乙乙胺胺的的臭臭气气，能能使使湿湿润润的的红红色色石石蕊蕊试纸变蓝色。试纸变蓝色。（六）紫外与红外吸收光谱特征（五）分解产物的反应1.尼可刹米ChP（12三、杂质检查杂质来源杂质来源 原料引入、降解产生原料引入、降解产生（一）异烟肼中游离肼的检查（一）异烟肼中游离肼的检查1.薄层色谱法（薄层色谱法（TLC）（1）ChP（2000）杂质对照品法杂质对照品法三、杂质检查杂质来源原料引入、降解产生（13 取本品，加水制成每取本品，加水制成每 1ml 中含中含 50mg的溶液，作的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每 1ml中含中含 0.20mg（相当于游离肼（相当于游离肼50g 的溶液，作为对照溶液。的溶液，作为对照溶液。吸取供试品溶液吸取供试品溶液 10l 与对照溶液与对照溶液 2l 分别点于同一硅分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙酮（醇丙酮（3 2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，后检视，在供试品主在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。点。取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶14（2）BP（1998）游离肼游离肼 杂质对照品法杂质对照品法 有关物质有关物质 高低浓度对比法高低浓度对比法（2）BP（1998）152.比浊法比浊法 JP（13）检查方法检查方法 灵敏度法灵敏度法 反应原理反应原理 游离肼游离肼+水杨醛水杨醛水杨醛腙水杨醛腙 优点：优点：不用对照品，价廉、简单易行不用对照品，价廉、简单易行 缺点：缺点：准确度差准确度差2.比浊法JP（13）16（二）尼可刹米中有关物质的检查（二）尼可刹米中有关物质的检查 ChP（2005）TLC 高低浓度对比法高低浓度对比法 配制两种不同浓度的对照溶液配制两种不同浓度的对照溶液（二）尼可刹米中有关物质的检查ChP（2005）17第二节第二节 喹啉类药物喹啉类药物共性：含有吡啶与苯环稠合而成的喹啉杂环共性：含有吡啶与苯环稠合而成的喹啉杂环 代表药物：硫酸奎宁、硫酸奎尼丁代表药物：硫酸奎宁、硫酸奎尼丁 硫酸奎宁硫酸奎宁 硫酸奎尼丁硫酸奎尼丁 第二节喹啉类药物硫酸奎宁18 盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星19主要化学性质主要化学性质：1、碱性：喹啉环上的氮原子具有碱性，可与强酸形成稳定的盐。2、旋光性：硫酸奎宁为左旋体；硫酸奎尼丁为右旋体。3、荧光特性主要化学性质：20二、鉴别试验二、鉴别试验（一）绿奎宁反应6羟基喹啉，经氯水的氯化反应，再以氨水处理，生成绿色的二醌基吲胺的铵盐。O二、鉴别试验（一）绿奎宁反应O21（二）光谱特征（二）光谱特征1.UV1.UV1.UV1.UV Ch.P Ch.P Ch.P Ch.P采用本法鉴别盐酸环丙沙星。采用本法鉴别盐酸环丙沙星。采用本法鉴别盐酸环丙沙星。采用本法鉴别盐酸环丙沙星。2.2.2.2.荧光光谱特征荧光光谱特征荧光光谱特征荧光光谱特征 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀H H H H2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4中均显中均显中均显中均显 蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。3.IR3.IR3.IR3.IR Ch.P Ch.P Ch.P Ch.P中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方 法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。（二）光谱特征22（三）无机酸盐（三）无机酸盐硫酸奎宁硫酸奎宁硫酸奎尼丁硫酸奎尼丁酸性条件 BaCl2白色沉淀白色沉淀盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星酸性条件 AgNO3白色沉淀白色沉淀（三）无机酸盐硫酸奎宁酸性条件BaCl2白色沉淀盐酸23第三节第三节 托烷类（莨菪烷类）托烷类（莨菪烷类）莨菪烷衍生的氨基醇和不同有机酸缩合成酯莨菪烷衍生的氨基醇和不同有机酸缩合成酯硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱 硫酸阿托品硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱第三节托烷类（莨菪烷类）硫酸阿托品24主要化学性质主要化学性质主要化学性质主要化学性质1.1.1.1.水解性水解性水解性水解性 本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇以阿托品为例，水解生成莨菪醇以阿托品为例，水解生成莨菪醇以阿托品为例，水解生成莨菪醇()()()()和莨菪和莨菪和莨菪和莨菪 酸酸酸酸()()()()。2.2.碱性碱性 阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有 叔胺氮原子叔胺氮原子,具有较强的碱性具有较强的碱性,易与酸成盐。如易与酸成盐。如 阿托品的阿托品的pKpKb1b1为为4.354.35。3.3.旋光性旋光性 氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子，呈左氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子，呈左 旋体，阿托品结构中虽然有不对称碳原子，但因旋体，阿托品结构中虽然有不对称碳原子，但因 外消旋化而为消旋，无旋光性。外消旋化而为消旋，无旋光性。主要化学性质2.碱性阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环25（一）托烷生物碱一般鉴别试验（一）托烷生物碱一般鉴别试验鉴别试验鉴别试验生物碱生物碱水解水解莨菪酸莨菪酸发烟硝酸发烟硝酸 三硝基衍生物三硝基衍生物KOH（C2H5OH）固体固体KOH有色的醌型产物有色的醌型产物（一）托烷生物碱一般鉴别试验鉴别试验生物碱水解莨菪酸发烟硝酸26（二）氧化反应（二）氧化反应 本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重铬铬 酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味。其反应式为：而逸出类似苦杏仁的臭味。其反应式为：（二）氧化反应27(三三)沉淀反应沉淀反应 本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。如如如如：阿托品：阿托品：阿托品：阿托品+氯化汞醇试液氯化汞醇试液氯化汞醇试液氯化汞醇试液 黄色沉淀黄色沉淀黄色沉淀黄色沉淀 东莨菪碱东莨菪碱东莨菪碱东莨菪碱+氯化汞醇试液氯化汞醇试液氯化汞醇试液氯化汞醇试液 白色沉淀白色沉淀白色沉淀白色沉淀（四）硫酸盐与溴化物反应（四）硫酸盐与溴化物反应硫酸阿托品硫酸阿托品+氯化钡氯化钡白色沉淀（不溶于盐酸或硝酸）白色沉淀（不溶于盐酸或硝酸）硫酸阿托品硫酸阿托品 +醋酸铅醋酸铅白色沉淀（溶于醋酸氨或氢氧化钠溶液）白色沉淀（溶于醋酸氨或氢氧化钠溶液）氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱 +硝酸银硝酸银黄色凝乳沉淀氨试液中微溶，硝酸中几氨试液中微溶，硝酸中几乎不溶。加氯试液，再加氯乎不溶。加氯试液，再加氯仿，氯仿层显仿，氯仿层显黄色黄色或或红棕色红棕色(三)沉淀反应（四）硫酸盐与溴化物反应白色沉淀（不溶于盐28第四节第四节 吩噻嗪类药物分析吩噻嗪类药物分析一、结构分析共同点：（1）硫氮杂蒽母核；（2）含两个杂原子多环共轭体系，有UV吸收；（3）S具还原性，可被氧化生成砜或亚砜；（4）与金属离子络合，生成有色物，可比色测定第四节吩噻嗪类药物分析一、结构分析共同点：29第八章杂环类药物的分析课件30奋乃静奋乃静癸氟奋乃静癸氟奋乃静奋乃静癸氟奋乃静31二、性质1.紫紫外外与与红红外外吸吸收收光光谱谱 本本类类药药物物的的紫紫外外特特征征吸吸收收，主主要要由由母母核核三三环环的的系系统统所所产产生生，一一般般具具有有三三个个峰峰值值。即即在在 204209nm（205nm附附近近）、250265nm（254nm附附近近）和和300325nm（300nm附附近近）。最最强强峰峰多多在在 250265nm。2位位上上的的取取代代基基（R）不不同，会引起吸收峰发生位移。同，会引起吸收峰发生位移。其结构中的硫，易氧化，氧化产物砜及亚砜有四其结构中的硫，易氧化，氧化产物砜及亚砜有四个吸收峰。个吸收峰。二、性质322.易被氧化呈色易被氧化呈色 硫硫氮氮杂杂蒽蒽母母核核中中的的二二价价硫硫易易氧氧化化，遇遇不不同同氧氧化化剂剂（硫硫酸酸，过过氧氧化化氢氢），其其母母核核易易被被氧氧化化成成亚亚砜砜、砜砜等等 不同产物，随取代基的不同呈现的颜色不同。不同产物，随取代基的不同呈现的颜色不同。3.易与金属离子络合呈色易与金属离子络合呈色 本类药物分子结构中未被氧化的硫，可与金属钯离本类药物分子结构中未被氧化的硫，可与金属钯离 子形成配位化合物。子形成配位化合物。其氧化产物砜和亚砜无此反应其氧化产物砜和亚砜无此反应 4.碱性碱性 2.易被氧化呈色33二、鉴别试验（一）（一）UV和和IRUV：奋乃静奋乃静 ChP（2005）鉴鉴别别取取本本品品，加加无无水水乙乙醇醇制制成成每每1ml 中中含含 7 g 的的溶溶液液，照照分分光光光光度度法法（附附录录A）测测定定，在在 258nm 的的波波长处有最大吸收，吸收度约为长处有最大吸收，吸收度约为0.65。IR：本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致二、鉴别试验（一）UV和IRIR：本品的红外吸收图谱应与对34 （二）显色反应（二）显色反应 1.与氧化剂的显色反应与氧化剂的显色反应药物名称药物名称 硫硫 酸酸 硝硝 酸酸 过氧化氢过氧化氢 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 显红色显红色,渐变淡黄色渐变淡黄色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 显樱桃红色显樱桃红色,放置放置 生成红色沉淀生成红色沉淀,加热即溶解加热即溶解,后颜色渐变深后颜色渐变深 溶液由红色转变为橙黄色溶液由红色转变为橙黄色 奋乃静奋乃静 显深红色显深红色;放置后放置后 红色渐褪去红色渐褪去 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 显淡红色显淡红色,温热温热 后变成红褐色后变成红褐色 盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪 生成微带红色的白色沉淀生成微带红色的白色沉淀;放放 置后置后,红色变深红色变深,加热后变黄色加热后变黄色 盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪 显蓝色显蓝色 （二）显色反应35 2.与钯离子络合显色反应与钯离子络合显色反应 利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络 合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。2.与钯离子络合显色反应36（三）分解产物的反应癸氟奋乃静癸氟奋乃静 ChP（2005）含氟药物）含氟药物鉴别鉴别（1）取本品）取本品 15 20mg，加碳酸钠与碳酸钾，加碳酸钠与碳酸钾各约各约0.1g，混匀，在，混匀，在 600 炽灼炽灼 1520分钟，放冷，分钟，放冷，加水加水2ml 使溶解，加盐酸溶液（使溶解，加盐酸溶液（12）酸化，滤过，）酸化，滤过，滤液加茜素锆试液滤液加茜素锆试液 0.5ml，应显黄色。，应显黄色。（三）分解产物的反应37第八章杂环类药物的分析课件38三、有关物质检查三、有关物质检查 1.癸氟奋乃静及其注射液癸氟奋乃静及其注射液 TLC 参比杂质对照品法参比杂质对照品法 以盐酸氟奋乃静为对照品以盐酸氟奋乃静为对照品 2.其他药物其他药物 TLC 高低浓度对比法高低浓度对比法三、有关物质检查39第五节 苯并二氮杂卓类药物的分析 第五节苯并二氮杂卓类药物的分析40第八章杂环类药物的分析课件41硝西泮硝西泮阿普唑仑阿普唑仑硝西泮阿普唑仑42一、结构与性质 1.苯并二氮杂卓母核苯并二氮杂卓母核 弱碱性，弱碱性，UV 2.结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。形成相应的二苯甲酮衍生物。3.不同不同pH条件下离子状态不同，条件下离子状态不同，UV不同不同一、结构与性质1.苯并二氮杂卓母核弱碱性，U43 1.1.沉淀反应沉淀反应 氯氮卓氯氮卓 橙红色橙红色沉淀沉淀 阿普唑仑阿普唑仑 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 KBiIKBiI4 4 也生成也生成橙红色橙红色沉淀沉淀 氯硝西泮氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深，放置后，沉淀颜色变深，因此可以相互区别。因此可以相互区别。鉴别试验鉴别试验阿普唑仑阿普唑仑 +遇硅钨酸遇硅钨酸 白色沉淀，药典中也用于鉴别。白色沉淀，药典中也用于鉴别。(一一)化学鉴别试验化学鉴别试验鉴别试验阿普唑仑+遇硅钨酸白色沉淀，药典442.2.水解后呈芳伯胺反应水解后呈芳伯胺反应2.水解后呈芳伯胺反应453.3.硫酸硫酸-荧光反应荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外光（本类药物溶于硫酸后，在紫外光（本类药物溶于硫酸后，在紫外光（本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm365nm365nm365nm）下，显）下，显）下，显）下，显不同颜色的荧光。例如：不同颜色的荧光。例如：不同颜色的荧光。例如：不同颜色的荧光。例如：地西泮地西泮 黄绿色黄绿色 黄色黄色 氯氮卓氯氮卓 黄色黄色 紫色紫色 艾司唑仑艾司唑仑 +H+H2 2SOSO4 4 亮绿色亮绿色 +稀硫酸稀硫酸 天蓝色天蓝色 硝西泮硝西泮 淡蓝色淡蓝色 蓝绿色蓝绿色 奥沙西泮奥沙西泮 淡黄绿色淡黄绿色4.4.含卤素含卤素3.硫酸-荧光反应地西泮46（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱（三）色谱法（三）色谱法（三）色谱法（三）色谱法 TLC TLC法法法法 酸水解产物的酸水解产物的酸水解产物的酸水解产物的TLCTLC法法法法（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱47一、非水溶液滴定法一、非水溶液滴定法(一一)基本原理：基本原理：在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定。在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定。在酸性非水介质中（如在酸性非水介质中（如HAcHAc中），则能显示出较强的碱性，滴定突中），则能显示出较强的碱性，滴定突跃增大，可以顺利地进行中和滴定。跃增大，可以顺利地进行中和滴定。含量测定当当HAHA酸性较强时，反应不能定量酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低完成，必须除去或降低HAHA的酸性，的酸性，使反应顺利地完成。使反应顺利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游离碱类盐游离碱类盐被置换出的弱酸被置换出的弱酸因此，要根据不同情况采用相应测定条件。因此，要根据不同情况采用相应测定条件。一、非水溶液滴定法含量测定当HA酸性较强时，反应不能定量完48(二二)一般方法一般方法供供试试品品+冰冰醋醋酸酸10ml30ml若供试品为氢卤酸盐再若供试品为氢卤酸盐再加加5%5%醋酸汞的冰醋酸液醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml结结果果高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定以空白以空白试验校试验校正正(二)一般方法供试品+冰醋酸10ml30ml若供试品为氢491.1.1.1.适用范围适用范围适用范围适用范围 主要用于主要用于主要用于主要用于K K K Kb b b b10101010-8-8-8-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱 的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使可使可使可使pKpKpKpKb b b b为为为为8 8 8 813131313的弱碱性药物采用本法滴定。的弱碱性药物采用本法滴定。的弱碱性药物采用本法滴定。的弱碱性药物采用本法滴定。一般来说：一般来说：一般来说：一般来说：K K K Kb b b b为为为为10101010-8-8-8-810101010-10-10-10-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；时，宜选冰醋酸作为溶剂；时，宜选冰醋酸作为溶剂；时，宜选冰醋酸作为溶剂；药物的药物的药物的药物的 K K K Kb b b b为为为为10101010-10-10-10-1010101010-12-12-12-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；K K K Kb b b b10101010-12-12-12-12时，应用醋酐作为溶剂。时，应用醋酐作为溶剂。时，应用醋酐作为溶剂。时，应用醋酐作为溶剂。另外，另外，另外，另外，在冰醋酸中加入不同量的在冰醋酸中加入不同量的在冰醋酸中加入不同量的在冰醋酸中加入不同量的甲酸，甲酸，甲酸，甲酸，也能使滴定突跃显著增也能使滴定突跃显著增也能使滴定突跃显著增也能使滴定突跃显著增 大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。(三三)问题讨论问题讨论1.适用范围主要用于Kb10-8的有机碱盐的含量测定。对50 2.2.酸根的影响：酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：排序递减：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸 消除消除HXHX干扰的方法：干扰的方法：加加Hg(Ac)Hg(Ac)2 2 量不足终点不明显，结量不足终点不明显，结果偏低。果偏低。2BHX +Hg(Ac)2BHX +Hg(Ac)2 2 2BHAc +HgX 2BHAc +HgX2 2 过量过量(1(13 3倍倍)不影响测定结果不影响测定结果2.酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递51(四四)应用实例应用实例 1.1.游离弱碱性药物测定游离弱碱性药物测定 异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。点的方法也不尽相同。药物名称药物名称 取样量取样量(g)(g)溶溶 剂剂 指示剂指示剂 终点颜色终点颜色 尼可刹米尼可刹米 0.15 0.15 冰醋酸冰醋酸10ml 10ml 结晶紫结晶紫 蓝绿色蓝绿色 地西泮地西泮 0.2 0.2 冰醋酸、酸酐冰醋酸、酸酐10ml 10ml 结晶紫结晶紫 绿色绿色 氯氮卓氯氮卓 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸10ml 10ml 结晶紫结晶紫 蓝色蓝色(四)应用实例52 2.2.氢卤酸盐类药物测定氢卤酸盐类药物测定 当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强，当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强，对测定有干扰，必须先加入过量的对测定有干扰，必须先加入过量的醋酸汞冰醋酸汞冰醋酸醋酸溶液，使其形成难溶液，使其形成难以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下：后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下：药物名称药物名称 取样量取样量(g)(g)溶溶 剂剂 加入醋酸汞试液加入醋酸汞试液(ml)(ml)指示剂指示剂 终点颜色终点颜色 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 0.2 0.2 醋酐醋酐10ml 5 10ml 5 橙黄橙黄 玫瑰红色玫瑰红色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸10ml 4 10ml 4 结晶紫结晶紫 蓝色蓝色 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸20ml 5 20ml 5 结晶紫结晶紫 蓝绿色蓝绿色 盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星 0.2 0.2 冰醋酸冰醋酸25ml 5 25ml 5 橙黄橙黄 粉红色粉红色 氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸20ml 5 20ml 5 结晶紫结晶紫 纯蓝色纯蓝色 2.氢卤酸盐类药物测定533.3.硫酸盐类药物测定硫酸盐类药物测定 硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成成成成SOSOSOSO4 4 4 42-2-2-2-，但在，但在，但在，但在非水介质中非水介质中非水介质中非水介质中，只显示一元酸解离为，只显示一元酸解离为，只显示一元酸解离为，只显示一元酸解离为HSOHSOHSOHSO4 4 4 4，即只供给一个即只供给一个即只供给一个即只供给一个H H H H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。定。定。定。3.硫酸盐类药物测定54（1 1）硫酸阿托品测定：）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的阿托品为碱性较强的阿托品为碱性较强的阿托品为碱性较强的 一元碱一元碱一元碱一元碱药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以 简写为简写为简写为简写为(BH(BH(BH(BH+)2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 42-2-2-2-，用高氯酸直接滴定时的反，用高氯酸直接滴定时的反，用高氯酸直接滴定时的反，用高氯酸直接滴定时的反 应式为：应式为：应式为：应式为：(BH(BH+)2 2SOSO4 42-2-+HClO +HClO4 4 (BH (BH+)ClO)ClO4 4-+(BH +(BH+)HSO)HSO4 4-可根据可根据1mol1mol的硫酸阿托品消耗的硫酸阿托品消耗1mol1mol高氯酸的高氯酸的关系计算其含量关系计算其含量。（1）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的(BH+)2SO455（2 2 2 2）硫酸奎宁测定：）硫酸奎宁测定：）硫酸奎宁测定：）硫酸奎宁测定：奎宁为奎宁为奎宁为奎宁为二元碱二元碱二元碱二元碱，其中喹核碱的碱性较，其中喹核碱的碱性较，其中喹核碱的碱性较，其中喹核碱的碱性较强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，1mol1mol1mol1mol的硫酸的硫酸的硫酸的硫酸 奎宁消耗奎宁消耗奎宁消耗奎宁消耗3mol3mol3mol3mol的高氯酸的高氯酸的高氯酸的高氯酸。其反应式如下：。其反应式如下：。其反应式如下：。其反应式如下：(C(C(C(C20202020H H H H24242424N N N N2 2 2 2 H H H H+)2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4+3HClO+3HClO+3HClO+3HClO4 4 4 4 (C (C (C (C20202020H H H H24242424N N N N2 2 2 2 2H 2H 2H 2H+)2ClO)2ClO)2ClO)2ClO4 4 4 4-+(C +(C +(C +(C20202020H H H H24242424N N N N2 2 2 2 2H 2H 2H 2H+)HSO)HSO)HSO)HSO4 4 4 4-ClOClOClOClO4 4 4 4-Ch.PCh.PCh.PCh.P和和和和USP(24)USP(24)USP(24)USP(24)都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。（2）硫酸奎宁测定：奎宁为二元碱，其中喹核碱的碱性较56滴定反应如下：+3HClO4+l用HClO4直接滴定硫酸喹宁时，摩尔比是13滴定反应如下：+3HClO4+用HClO4直接滴定硫酸喹宁时57硫酸奎宁片的测定硫酸奎宁片的测定首先经过碱化处理，生成奎宁的游离碱，再用高氯首先经过碱化处理，生成奎宁的游离碱，再用高氯酸直接滴定。酸直接滴定。摩尔比为摩尔比为1 1：4 4B2H2SO42NaOH2B+Na2SO4+2H2OB+2HClO4B2HClO4硫酸奎宁片的测定584.4.硝酸盐的测定硝酸盐的测定 硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般不用指示剂法而不用指示剂法而不用指示剂法而不用指示剂法而用电位法指示终点。用电位法指示终点。用电位法指示终点。用电位法指示终点。4.硝酸盐的测定595.5.磷酸盐及有机酸盐的测定磷酸盐及有机酸盐的测定磷酸、有机酸为弱酸，不干扰滴定。磷酸、有机酸为弱酸，不干扰滴定。磷酸、有机酸为弱酸，不干扰滴定。磷酸、有机酸为弱酸，不干扰滴定。5.磷酸盐及有机酸盐的测定磷酸、有机酸为弱酸，不干扰滴定。60终点指示方法终点指示方法最常用的指示剂是结晶紫，少量电位法紫蓝蓝绿黄绿黄（碱性区）（酸性区）终点的颜色应用电位法校准。终点指示方法紫蓝蓝绿黄绿黄61（一）硝苯地平的测定（一）硝苯地平的测定 基本原理基本原理 硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示：硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示：终点时终点时:微过量的微过量的CeCe4+4+将指示剂邻二氮菲亚铁中的将指示剂邻二氮菲亚铁中的FeFe2+2+氧氧 化成化成FeFe3+3+，使橙红色配合物离子呈淡蓝色或无，使橙红色配合物离子呈淡蓝色或无 色，以指示终点的到达。色，以指示终点的到达。二、铈量法二、铈量法（一）硝苯地平的测定二、铈量法62（二）吩噻嗪类药物的测定（二）吩噻嗪类药物的测定药物药物Ce(SO4),-e红色红色Ce(SO4),-2e红色消退红色消退自身指示终点或电位法、永停法指示终点自身指示终点或电位法、永停法指示终点（二）吩噻嗪类药物的测定药物Ce(SO4),-e红色Ce(63优点：（1 1）赋赋形形剂剂不不干干扰扰,复复方方制制剂剂中中咖咖啡啡因因、苯苯丙丙胺胺、可可待待因、巴比妥类药物等不干扰；因、巴比妥类药物等不干扰；（2 2）反反应应为为一一价价还还原原（CeCe4+4+CeCe3+3+）,对对环环上上取取代代基基无无作用；作用；（3 3）用于原料药，也可用于制剂分析。）用于原料药，也可用于制剂分析。优点：64（二）溴酸钾法（二）溴酸钾法异烟肼具有较强的还原性，在酸性溶液中可以用溴异烟肼具有较强的还原性，在酸性溶液中可以用溴酸钾滴定，异烟肼及其片剂均可用此法测定，方法酸钾滴定，异烟肼及其片剂均可用此法测定，方法简便准确。简便准确。取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，置，精密称定，置100ml100ml量瓶中，加量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取水溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取25ml25ml，加水，加水50ml50ml，盐酸，盐酸20ml20ml与甲基橙指示剂与甲基橙指示剂1 1滴，用溴酸钾滴定滴，用溴酸钾滴定液（液（0.01667mol/L0.01667mol/L）缓缓滴定（温度保持在）缓缓滴定（温度保持在18251825）至红色消失。）至红色消失。（二）溴酸钾法65讨论：讨论：1 1、甲基橙是不可逆氧化还原指示剂，为防止溶液中、甲基橙是不可逆氧化还原指示剂，为防止溶液中局部过浓的溴酸钾破坏指示剂提前到达终点，应在局部过浓的溴酸钾破坏指示剂提前到达终点，应在18251825温度下，于充分搅拌的条件下缓缓滴定。温度下，于充分搅拌的条件下缓缓滴定。2 2、加水量的多少对指示剂的褪色影响较大。当盐酸、加水量的多少对指示剂的褪色影响较大。当盐酸用量用量20ml20ml，加水，加水25ml25ml，颜色，颜色5 5分钟未褪，加水分钟未褪，加水30ml30ml，褪色时间，褪色时间4545秒，当加水秒，当加水70ml70ml以上，褪色时间在以上，褪色时间在2 2秒以内。秒以内。讨论：66三、比色法三、比色法（一）酸性染料比色法（一）酸性染料比色法原理原理:在适当pH溶液中,有机碱（B）可以与氢离子成盐,酸性染料（HIn）可解离成阴离子,阴离子可与有机碱盐阳离子定量地结合成有色离子对，而进入到有机相。通过测定有机溶剂提取液的吸收度;或将有机溶剂提取液酸化或碱化，使与有机碱结合的酸性染料释放出来，测定染料的吸收度来测得有机碱的含量。三、比色法原理:67第八章杂环类药物的分析课件68主要条件主要条件1 1 1 1、最主要条件是水相的、最主要条件是水相的、最主要条件是水相的、最主要条件是水相的pHpHpHpH要求：要求：能能使使有有机机碱碱全全部部以以盐盐的的形形式式存存在在，酸酸性性染染料料能能够够解解离离成成离离子子，以以便便它它们们定定量量地地结结合合成成离离子子对对而而转转溶溶于于有机相，且又能将剩余的染料完全保留在水相。有机相，且又能将剩余的染料完全保留在水相。主要条件69pH（酸性）BH+，InBH+In-，有机溶剂提取的是HInpH（碱性）In-，BH+BH+In-，有机溶剂提取的是BpH（酸性）BH+，InpH（碱性）702 2 2 2、酸性染料的选择、酸性染料的选择、酸性染料的选择、酸性染料的选择要求：常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚要求：常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即可。可。n n（1 1）能与有机碱定量的结合能与有机碱定量的结合n n（2 2）生成的络合物（离子对）在有机相中溶解度大）生成的络合物（离子对）在有机相中溶解度大 n n（3 3）染料自身在有机溶剂中不溶或很少溶解）染料自身在有机溶剂中不溶或很少溶解n n（4 4）在最大波长处有较高的吸收度。）在最大波长处有较高的吸收度。2、酸性染料的选择71(3)(3)(3)(3)有机溶剂的选择有机溶剂的选择有机溶剂的选择有机溶剂的选择 有机碱药物应对离子对提取率高，不与有机碱药物应对离子对提取率高，不与有机碱药物应对离子对提取率高，不与有机碱药物应对离子对提取率高，不与 水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶 剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、四氯化碳等。剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、四氯化碳等。剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、四氯化碳等。剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、四氯化碳等。(4)(4)(4)(4)水分的影响：水分的影响：水分的影响：水分的影响：严防水分混入有机溶剂中，水相中有色酸性严防水分混入有机溶剂中，水相中有色酸性严防水分混入有机溶剂中，水相中有色酸性严防水分混入有机溶剂中，水相中有色酸性 染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影响比色染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影响比色染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影响比色染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影响比色测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混入的水分。测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混入的水分。测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混入的水分。测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混入的水分。(3)有机溶剂的选择有机碱药物应对离子对提取率高，不与72（二）钯离子比色法：（二）钯离子比色法：原理：吩噻嗪类药物可与一些金属离子（如Pd2+）在适当pH值的溶液中形成有色的络合物，借以进行比色测定。（二）钯离子比色法：73 反应在反应在 pH20.1 的缓冲液中进行的缓冲液中进行优点：优点：钯离子比色法可选择性地用于未被氧化钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定。的吩噻嗪类药物的测定。反应在pH20.1的缓冲液中进行优点：74（一）直接分光光度法（一）直接分光光度法 供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。1.1.奥沙西泮原料的测定奥沙西泮原料的测定 在在229nm229nm，采用标准对照法测定。，采用标准对照法测定。2.2.盐酸异丙嗪片的测定盐酸异丙嗪片的测定 在在249nm249nm，采用，采用E E1cm1cm1%1%910910测定。测定。3.3.盐酸异丙嗪注射液的测定盐酸异丙嗪注射液的测定 测定波长的选择：测定波长的选择：注射液处方加注射液处方加V VC C作抗氧剂，防止异丙嗪氧化作抗氧剂，防止异丙嗪氧化 变色。变色。V VC C在盐酸异丙嗪最大吸收波长在盐酸异丙嗪最大吸收波长249nm249nm处有吸收，干扰测处有吸收，干扰测 定。因此选用定。因此选用299nm299nm波长测定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生波长测定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生 素素C C在此波长处则不产生干扰在此波长处则不产生干扰,但但E E1cm1cm1%1%108108 。四、紫外分光光度法（一）直接分光光度法四、紫外分光光度法75（二）（二）萃取后分光光度法萃取后分光光度法 盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪注射液（二）萃取后分光光度法76（三）（三）萃取萃取双波长分光光度法双波长分光光度法原理原理 在在待待测测组组分分（a）的的最最大大吸吸收收波波长长（测测定定波波长长，1）处处测测定定待待测测组组分分和和干干扰扰组组分分（b）吸吸收收度度的的总总和和；另另选选一一适适当当波波长长（参参比比波波长长，2）测测定定吸吸收收度度，并并使使干干扰扰组组分分在在测测定定波波长长和和参参比比波波长长处处的的吸吸收收度度相相等等，而而待待测测组组分分在在这这两个波长处吸收度的差值足够大。两个波长处吸收度的差值足够大。必要条件必要条件 干扰组分在两个波长处吸收度相等干扰组分在两个波长处吸收度相等 待测组分在两个波长处吸收度相差足够大待测组分在两个波长处吸收度相差足够大（三）萃取双波长分光光度法必要条件77定量依据定量依据 样品在二波长下吸收度差值（样品在二波长下吸收度差值（A A）：）：即，吸收度差值（A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除。定量依据样品在二波长下吸收度差值（A）：即，吸收度差78（四）（四）二阶导数分光光度法二阶导数分光光度法 盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪注射液 抗氧剂维生素抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定 因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰66nm66nm谷谷254nm254nm距离，标准曲线法定量距离，标准曲线法定量（四）二阶导数分光光度法因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量79五、气相色谱法五、气相色谱法一、托烷类药物制剂的含量测定一、托烷类药物制剂的含量测定二、血浆中二氢吡啶类药物的测定二、血浆中二氢吡啶类药物的测定五、气相色谱法一、托烷类药物制剂的含量测定80六高效液相色谱法：六高效液相色谱法：1 1特点：特点：8090%8090%反反相相色色谱谱分分离离，最最常常用用十十八八烷烷基基硅硅烷烷键合硅胶（键合硅胶（ODSODS）。）。硅硅胶胶表表面面仅仅有有2550%2550%硅硅醇醇基基可可与与硅硅烷烷化化试试剂剂作作用用，在在分分离离极极性性化化合合物物特特别别是是碱碱性性药药物物和和生生物物碱碱时时，裸裸露露的的硅硅醇醇基基和和碱碱性性药药物物发发生生吸吸附附或或离离子子交交换换作作用用，而而使使色色谱谱峰峰拖拖尾尾，保保留留时时间间过过长长，甚甚至至长长期期保留在色谱柱上。保留在色谱柱上。六高效液相色谱法：1特点：812几种主要方法：（1 1）加加扫扫尾尾剂剂法法：以以十十八八烷烷基基硅硅烷烷（ODSODS）键键合合的的硅硅胶胶为为固固定定相相，在在流流动动相相中中加加入入扫扫尾尾剂剂，以以抑抑制制或或掩掩蔽蔽固固定定相相表表面面的的游游离离硅硅醇醇基基的的活活性性。最最常常用的扫尾剂是三乙胺（用的扫尾剂是三乙胺（TEATEA）。）。（2 2）离子对）离子对HPLCHPLC法法2几种主要方法：82离子对离子对离子对离子对HPLCHPLC法测定氢溴酸东莨菪碱注射液的含量和降解产法测定氢溴酸东莨菪碱注射液的含量和降解产法测定氢溴酸东莨菪碱注射液的含量和降解产法测定氢溴酸东莨菪碱注射液的含量和降解产物的测定物的测定物的测定物的测定n n色谱条件色谱柱色谱条件色谱柱:DiamonsilTM(:DiamonsilTM(钻石钻石)C18(150mm4.6)C18(150mm4.6mm,5m);mm,5m);流动相流动相:0.004%:0.004%磷酸溶液磷酸溶液(pH3.0)-(pH3.0)-乙腈乙腈(50(50 50)50)配制的配制的8mmolL8mmolL-1-1十二烷基硫酸钠溶液十二烷基硫酸钠溶液;流速流速:1.0:1.0mLminmLmin-1-1;检测波长检测波长:210nm;:210nm;进样量进样量:10L:10L。氢溴酸东莨菪碱分离色谱图2.氢溴酸东莨菪碱;3.硫酸阿托品离子对HPLC法测定氢溴酸东莨菪碱注射液的含量和降解产物的测83（3 3）用用硅硅胶胶作作固固定定相相法法：在在不不改改性性的的普普通通硅硅胶胶柱柱上上，利利用用碱碱性性成成分分与与硅硅醇醇基基相相互互作作用用，以以高高浓浓度度极极性性有有机溶剂，碱性水相缓冲液为流动相分离碱性药物。机溶剂，碱性水相缓冲液为流动相分离碱性药物。（4 4）用用金金刚刚烷烷基基硅硅烷烷化化硅硅胶胶作作固固定定相相法法：这这种种固固定定相相表表面面被被一一根根根根短短的的烃烃链链（乙乙基基）连连着着的的烃烃球球（金金刚刚烷烷）将将硅硅胶胶表表面面上上未未反反应应的的硅硅醇醇基基全全部部覆覆盖盖，使使其不能与极性物质作用。其不能与极性物质作用。（3）用硅胶作固定相法：在不改性的普通硅胶柱上，利用碱性成分84七、液七、液-质联用法质联用法 液液-质联用仪由以下几部分组成质联用仪由以下几部分组成 数据及供电系统数据及供电系统 进样系统进样系统离子源离子源质量分析器质量分析器检测接收器检测接收器 真空系统真空系统 七、液-质联用法液-质联用仪由以下几部分组成85色色-质联用特点质联用特点n n适用于多组分混合物的定性鉴定，克服色谱适用于多组分混合物的定性鉴定，克服色谱法在无纯物质作对照时难于定性的缺点。法在无纯物质作对照时难于定性的缺点。n n利用选择性离子检测，可鉴定出部分分离、利用选择性离子检测，可鉴定出部分分离、甚至未分离的峰。甚至未分离的峰。n n利用选择性离子检测定量。利用选择性离子检测定量。色-质联用特点适用于多组分混合物的定性鉴定，克服色谱法在无纯86LC/MS系统构成+样品与溶剂脱样品与溶剂脱离及电离离及电离 EIEIESIESIAPCIAPCILC/MSLC/MS接口接口离子源离子源质量分析器质量分析器检测离子检测离子HPLCHPLC数据系统数据系统质谱质谱离子识别离子识别 QuadrapoleQuadrapoleTimeofFlightTimeofFlightFourierTransformFourierTransform+离子检测离子检测+-+-+LC/MS系统构成+样品与溶剂脱LC/MS离子87EI:EI:EI:EI:电子轰击电离电子轰击电离硬电离。硬电离。CI:CI:CI:CI:化学电离化学电离核心是质子转移。核心是质子转移。ESI:ESI:ESI:ESI:电喷雾电离电喷雾电离适宜极性分子的分析，能分析小适宜极性分子的分析，能分析小分子及大分子分子及大分子(如蛋白质分子多肽等如蛋白质分子多肽等)APCI:APCI:APCI:APCI:大大气气压压化化学学电电离离属属较较软软的的电电离离方方式式，更更适适宜做弱极性小分子。宜做弱极性小分子。n其中其中ESIESI，APCIAPCI统称大气压电离统称大气压电离(API)(API)EI:电子轰击电离硬电离。其中ESI，APCI统称大气压88硝苯地平缓释片在健康志愿者体内的生物等效性硝苯地平缓释片在健康志愿者体内的生物等效性硝苯地平缓释片在健康志愿者体内的生物等效性89第八章杂环类药物的分析课件90n n硝苯地平遇光不稳定硝苯地平遇光不稳定,所有操作均在避光条件下进所有操作均在避光条件下进行。考察了乙醚、乙酸乙醋、正己烷、正己烷一行。考察了乙醚、乙酸乙醋、正己烷、正己烷一二氯甲烷等有机试剂对硝苯地平的提取效率。结二氯甲烷等有机试剂对硝苯地平的提取效率。结果表明果表明,经乙醚提取的样品硝苯地平及内标地西伴经乙醚提取的样品硝苯地平及内标地西伴的提取回收率较高的提取回收率较高,且对测定没有干扰且对测定没有干扰,故选择乙故选择乙醚为提取试剂。提取过程中氢氧化钠溶液的加人醚为提取试剂。提取过程中氢氧化钠溶液的加人可以减少内源性杂质的干扰。可以减少内源性杂质的干扰。硝苯地平遇光不稳定,所有操作均在避光条件下进行。考察了乙醚91