流式细胞仪原理及应用ppt课件

致：致：流式细胞术概述流式细胞术概述致：流式细胞术概述BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞术的基本概念流式细胞术的基本概念=流式细胞术（流式细胞术（Flow Cytometry,Flow Cytometry,简称简称FCMFCM）是一种可以快速、是一种可以快速、准确、客观，并且能够同时检测快速直线准确、客观，并且能够同时检测快速直线流动状态流动状态中的中的单单个个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选同时可以对特定群体加以分选=研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等球等=研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量流式细胞术的基本概念流式细胞术（Flow Cytometry2BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪的检测范围流式细胞仪的检测范围 细胞结构细胞结构细胞大小细胞大小细胞颗粒度细胞颗粒度细胞表面积细胞表面积核浆比例核浆比例DNADNA含量与细胞周期含量与细胞周期RNARNA含量含量蛋白质含量蛋白质含量 细胞功能细胞功能细胞表面细胞表面/胞浆胞浆/核的特异性抗原核的特异性抗原细胞活性细胞活性细胞内细胞内/外的细胞因子外的细胞因子激素结合位点、细胞受体激素结合位点、细胞受体蛋白磷酸化蛋白磷酸化pHpH值值钙离子浓度钙离子浓度细胞膜电位、线粒体膜电位细胞膜电位、线粒体膜电位 流式细胞仪的检测范围 细胞结构 细胞功能3流式细胞仪的原理流式细胞仪的原理流式细胞仪的原理BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪原理及应用ppt课件5BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。液流系统：鞘液包绕着单行排列的细胞依次高速通过流动池，液流系统：鞘液包绕着单行排列的细胞依次高速通过流动池，而激光聚焦于流动池中心的样本流上，随后经检测的样本和而激光聚焦于流动池中心的样本流上，随后经检测的样本和鞘液流向废液桶。鞘液流向废液桶。液流系统：鞘液包绕着单行排列的细胞依次高速通过流动池，而激光6BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。光学系统：经荧光染色的细胞在激光的照射下产生散射光学系统：经荧光染色的细胞在激光的照射下产生散射光和荧光信号，同时被前向光电二极管和一组光电倍增光和荧光信号，同时被前向光电二极管和一组光电倍增管（管（PMT）接收，荧光信号经一系列双色性反射镜和带）接收，荧光信号经一系列双色性反射镜和带通或长通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号通或长通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号光学系统：经荧光染色的细胞在激光的照射下产生散射光和荧光信号7BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。电子系统：荧光信号和散射光信号经二极管和电子系统：荧光信号和散射光信号经二极管和PMT接收后接收后可转换为电信号，再通过模可转换为电信号，再通过模/数转换器转换为可被计算机识数转换器转换为可被计算机识别的数字信号，以图形的形式呈现给操作者别的数字信号，以图形的形式呈现给操作者电子系统：荧光信号和散射光信号经二极管和PMT接收后可转换为8BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。散射光信号散射光信号FALS SensorLaser散射光信号FALS SensorLaser9BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。散射光信号散射光信号Right Angle Light Right Angle Light Detector Detector Cell Complexity Cell ComplexitySSCSSCForward Light Detector Forward Light Detector Cell Surface Area Cell Surface Area FSCFSCIncident Incident Light Light SourceSource=前向角散射光（前向角散射光（FSC,Forward ScatterFSC,Forward Scatter）细胞相对大小及其表面积细胞相对大小及其表面积 =侧向角散射光（侧向角散射光（SSC,Side ScatterSSC,Side Scatter）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性散射光信号Right Angle Light Detecto10BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。外周全血细胞散射光双参数点图外周全血细胞散射光双参数点图（红细胞溶解后）（红细胞溶解后）GranulocytesMonocytesLymphocytes外周全血细胞散射光双参数点图（红细胞溶解后）Granulo11BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪的检测信号流式细胞仪的检测信号荧光信号荧光信号使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量流式细胞仪的检测信号荧光信号12BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。荧光信号荧光信号双色直接染色双色直接染色荧光信号双色直接染色13BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。数据存储数据存储FCS2.0格式格式常以列表模式（常以列表模式（LISTMODE)：将每个细胞的每个检测参：将每个细胞的每个检测参量依次排列顺序存储量依次排列顺序存储FITC/PE双染样本双染样本数据存储FCS 2.0格式FITC/PE双染样本14BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪原理及应用ppt课件15BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。数据显示数据显示直方图（直方图（Histogram）二维点图（二维点图（DotPlot）等高线图（等高线图（ContourPlot）密度图（密度图（Density）三维图（三维图（3DPlot）等）等数据显示直方图（Histogram）16BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。单参数直方图分析单参数直方图分析单参数直方图分析17BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。数据分析数据分析=直方图分析直方图分析数据分析直方图分析18BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。多参数散点图分析多参数散点图分析多参数散点图分析19BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。数据分析数据分析=等高图和密度图分析等高图和密度图分析数据分析等高图和密度图分析20BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。数据分析数据分析=三维图分析三维图分析数据分析三维图分析21BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪原理及应用ppt课件22流式细胞仪的应用流式细胞仪的应用流式细胞仪的应用BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪的临床应用流式细胞仪的临床应用=HIVHIV免疫分型，免疫分型，CD4CD4绝对计数绝对计数=淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析=白血病和淋巴瘤的免疫分型白血病和淋巴瘤的免疫分型=肿瘤的细胞周期和倍体分析肿瘤的细胞周期和倍体分析=网织红细胞计数网织红细胞计数=细胞移植的免疫状态监测细胞移植的免疫状态监测=干细胞计数干细胞计数=阵发性血红蛋白尿阵发性血红蛋白尿=HLA-B27HLA-B27检查检查=血小板功能及相关疾病血小板功能及相关疾病流式细胞仪的临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数24BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪的科研应用流式细胞仪的科研应用=免疫功能研究免疫功能研究=血小板分析（心脑血管疾病）血小板分析（心脑血管疾病）=细胞周期和倍体分析细胞周期和倍体分析=细胞凋亡细胞凋亡=干细胞研究干细胞研究=树突细胞研究树突细胞研究=肿瘤相关基因表达的研究肿瘤相关基因表达的研究=抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究=放疗放疗/化疗疗效的研究化疗疗效的研究流式细胞仪的科研应用免疫功能研究25BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析使用经荧光素标记的特异单克隆抗体，进行多色使用经荧光素标记的特异单克隆抗体，进行多色染色，同时分析淋巴细胞膜上多种白细胞分化抗染色，同时分析淋巴细胞膜上多种白细胞分化抗原（原（CDCD分子）的表达，可以将淋巴细胞亚群区分分子）的表达，可以将淋巴细胞亚群区分开，进行定性分析开，进行定性分析各淋巴细胞亚群的百分含量各淋巴细胞亚群的百分含量淋巴细胞亚群的绝对计数，进行定量分析淋巴细胞亚群的绝对计数，进行定量分析淋巴细胞亚群分析使用经荧光素标记的特异单克隆抗体，进行多色染26BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析根据功能，淋巴细胞主要分为根据功能，淋巴细胞主要分为B B淋巴细胞（淋巴细胞（CD19+CD19+），），与体液免疫有关与体液免疫有关T T淋巴细胞（淋巴细胞（CD3+CD3+），），与细胞免疫有关与细胞免疫有关总总T T和总和总B B可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病 NKNK细胞（细胞（CD3-CD16+56+CD3-CD16+56+），），行使免疫监控功能，行使免疫监控功能，能能够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用。用。淋巴细胞亚群分析根据功能，淋巴细胞主要分为27BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析根据根据CD4CD4、CD8CD8表达，表达，T T淋巴细胞又分为淋巴细胞又分为T T辅助辅助/诱导细胞（诱导细胞（CD3+CD4+CD3+CD4+）T T抑制抑制/细胞毒性细胞（细胞毒性细胞（CD3+CD8+CD3+CD8+）Th/Ts Th/Ts 评价那些自身免疫失调、被怀疑是免疫失调评价那些自身免疫失调、被怀疑是免疫失调或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态淋巴细胞亚群分析根据CD4、CD8表达，T淋巴细胞又分为28BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。诊断原发性免疫缺陷病（如先天性无诊断原发性免疫缺陷病（如先天性无r球蛋白血症）或继发性球蛋白血症）或继发性免疫缺陷病（如免疫缺陷病（如AIDS）造血干细胞移植后免疫重建（造血干细胞移植后免疫重建（6个月个月NK；9个月个月T、B）Th/TsTh/Ts：机体免疫功能亢进机体免疫功能亢进：自身免疫性疾病，如：自身免疫性疾病，如SLESLE、类风、类风湿性关节炎等（治疗有效恢复正常）湿性关节炎等（治疗有效恢复正常）Th/TsTh/Ts：机体免疫功能低下机体免疫功能低下：AIDSAIDS、病毒感染、慢性活动性、病毒感染、慢性活动性肝炎和活动性肝硬化、再障、结核、肿瘤等肝炎和活动性肝硬化、再障、结核、肿瘤等移植后动态免疫监测：移植后动态免疫监测：急排临床症状出现前急排临床症状出现前1-51-5天，活化天，活化T T和和Th/TsTh/Ts持续持续，1.21.2预示急排；预示急排；Th/TsTh/Ts持续持续 表明可能感染，比值表明可能感染，比值1.081.08，可能性大，可能性大，0.20.2应停用免疫抑应停用免疫抑制剂；制剂；实体肿瘤疗效和病人免疫状态观察实体肿瘤疗效和病人免疫状态观察治疗前常伴治疗前常伴T T 、Th/TsTh/Ts，放，放/化疗有效可恢复；化疗有效可恢复；淋巴细胞免疫表型正常或治疗后能恢复正常者预后常较好；淋巴细胞免疫表型正常或治疗后能恢复正常者预后常较好；探索疾病发病机理、进程和预后（炎症、肿瘤）探索疾病发病机理、进程和预后（炎症、肿瘤）临床意义临床意义判断病人的机体免疫状态判断病人的机体免疫状态诊断原发性免疫缺陷病（如先天性无 r 球蛋白血症）或继发性免29BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。常见疾病的常见疾病的T 淋巴细胞的变化淋巴细胞的变化：CD4+CD8+CD4+/CD8+类风湿性关类风湿性关节炎节炎 （活动期）（活动期）系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮 -或或 （活动期）（活动期）多发性硬化症多发性硬化症 重症肌无力重症肌无力 膜型肾小球肾炎膜型肾小球肾炎 胰岛素依赖性糖尿病胰岛素依赖性糖尿病 乙型肝炎乙型肝炎 自身溶血性贫血自身溶血性贫血 上呼吸道感染上呼吸道感染 常见疾病的T 淋巴细胞的变化：30BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。常见疾病的常见疾病的T 淋巴细胞的变化淋巴细胞的变化 CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+肿瘤肿瘤 再障及粒细胞减少症再障及粒细胞减少症 巨细胞病毒感染巨细胞病毒感染 血小板减少血小板减少 活动性特应性皮炎活动性特应性皮炎 过敏性皮炎过敏性皮炎 常见疾病的T 淋巴细胞的变化 31BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。淋巴细胞亚群双色分析淋巴细胞亚群双色分析12%76%49%26%11%淋巴细胞亚群双色分析12%76%49%26%11%32BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。AIDS 病人病人T亚群分析亚群分析27-51%15-44%50-84%AIDS 病人T亚群分析27-51%15-44%50-84%33BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。先天性无先天性无 r 球蛋白血症球蛋白血症5-18%先天性无 r 球蛋白血症5-18%34BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。乳腺癌患者乳腺癌患者T淋巴细胞亚群变化淋巴细胞亚群变化乳腺癌患者T淋巴细胞亚群变化35BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。TriTEST/MultiTestTriTEST/MultiTest与与T T淋巴细胞绝对计数淋巴细胞绝对计数使用三色试剂或四色免洗试剂使用三色试剂或四色免洗试剂样本使用样本使用EDTAEDTA抗凝全血，用血量抗凝全血，用血量5050uLuL免洗操作，减少细胞丢失免洗操作，减少细胞丢失绝对计数绝对计数TruCOUNTTruCOUNT管预先加有已知数量微球，在流式细管预先加有已知数量微球，在流式细胞仪上直接得到胞仪上直接得到T T淋巴细胞亚群的绝对含量，提高工作效淋巴细胞亚群的绝对含量，提高工作效率和计数的精确度率和计数的精确度单平台计数单平台计数报告报告T T淋巴细胞及淋巴细胞及THTH、TSTS百分含量、绝对含量和百分含量、绝对含量和H/SH/S比值比值TriTEST/MultiTest与T淋巴细胞绝对计数使用三36BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。TriTEST CD4/CD8/CD3TriTEST CD4/CD8/CD3分析分析与与T T淋巴细胞绝对计数淋巴细胞绝对计数%T LymphCD3+Abs CntCD3+CD4+%T LymphCD3+CD4+Abs CntCD3+CD8+%T LymphCD3+CD8+Abs CntT H/S RatioTriTEST CD4/CD8/CD3分析与T淋巴细胞绝对37BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。MultiTEST CD3/CD8/CD45/CD4MultiTEST CD3/CD15+56/CD45/CD19MultiTEST CD3/CD8/CD45/CD4Mult38淋巴细胞淋巴细胞活化功能研究活化功能研究淋巴细胞活化功能研究BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。T淋巴细胞活化淋巴细胞活化细胞数目增殖细胞数目增殖细胞表面表达细胞表面表达活化标记活化标记分泌细胞因子分泌细胞因子T淋巴细胞活化细胞数目增殖40BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。CFSE示踪原理羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料，CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。体内、体外实验均可以应用CFSE示踪原理羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是41BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。Dilution of CFSE with cell divisionLyons and Parish,1994JIM,171;131Divisions:3 2 1 0CFSEFL-1(Log)Divisions:3 2 1 0Dilution of CFSE with cell div42BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。葡萄球菌肠毒素刺激牛时间变化示意图，流式细胞仪原理及应用ppt课件43BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。T淋巴细胞活化淋巴细胞活化细胞数目增殖细胞数目增殖细胞表面表达细胞表面表达活化标记活化标记分泌细胞因子分泌细胞因子T淋巴细胞活化细胞数目增殖44BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。T细胞激活抗原表达的动力学曲线细胞激活抗原表达的动力学曲线T细胞激活抗原表达的动力学曲线45FastImmune Assay System快速全面检测淋巴细胞功能快速全面检测淋巴细胞功能 FastImmune Assay System快速全面检BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。BDFastImmuneActivationSystem快速免疫活化检测系统快速免疫活化检测系统lymphocyte Activation4hStain15minLyse/Fix15minAcqusitionerythrocytestimulusBD FastImmune Activation Syste47BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。优点优点快速快速全程全程5h简便简便全血分析全血分析（肝素钠抗凝血肝素钠抗凝血）无需分离无需分离PBMCs无需组织培养无需组织培养免洗试剂，无需洗涤离心免洗试剂，无需洗涤离心高效高效多参数分析加速研究进程多参数分析加速研究进程功能活性检测同时报告单个细胞亚型功能活性检测同时报告单个细胞亚型可外延可外延T细胞分析可进行亚群分析细胞分析可进行亚群分析可外延于可外延于B、NK、单核细胞、单核细胞接近生物体接近生物体自身分析条件自身分析条件应用全血保留了细胞与生化微环境应用全血保留了细胞与生化微环境更能代表体内状态更能代表体内状态BDFastImmuneActivationSystem快速免疫活化检测系统快速免疫活化检测系统优点快速全程单单核核细细胞胞成成熟熟粒粒细细胞胞原原幼幼细细胞胞，在在红红细细胞胞中中不不表表达达；SSC是是侧侧向向角角参参数数，反反应应细细胞胞的的颗颗粒粒度度（成成熟熟粒粒细细胞胞单单核核细细胞胞原原幼幼细细胞胞淋淋巴巴细细胞胞）。目前，国际上采用CD45SSC设设门门（Gating），可非常轻松地将白血病细胞与正常细胞分开，增加白血病免疫分型的准确性CD45的临床应用 CD45是白细胞的共同86BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。CD45的临床应用的临床应用用用CD45-SSC设设门门寻寻找找异异常常细细胞胞，将将细细胞胞分分为为5个个群群体体，当幼稚细胞达70-80%时，即可大致估计AL的类型。骨髓成分复杂，各种大小和分化程度的细胞均有，若不用CD45-SSC设门，我们检测到的阳性细胞的百分率是以总细胞为分母来计算，当时以阳性细胞大于20%为界线，现在以CD45-SSC设门，排除了正常细胞的干扰，阳性细胞的百分率是以幼稚细胞为分母，因此再以阳性细胞20%作界线则不太合适了，所以，用CD45-SSC设门寻找异常细胞时，以定性比定量更重要。CD45的临床应用用CD45-SSC设门寻找异常细胞，将细胞87BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。正常人血液白细胞免疫表型散点图正常人血液白细胞免疫表型散点图正常人血液白细胞免疫表型散点图88BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。正常人血液细胞免疫表型正常人血液细胞免疫表型T淋淋 巴巴 细细 胞胞：CD45+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+、CD5+/CD7+，部部分分细细胞胞CD（16+56）+，无无CD4+CD8+双双阳性细胞阳性细胞B淋淋巴巴细细胞胞：CD45+、CD10-/CD19+、CD20+/CD22+、HLA-DR+/CD13-NK细胞：细胞：CD45+、CD（16+56）+/CD3-单核细胞：单核细胞：CD45+、HLA-DR+/CD13+、CD14+/CD33+中中性性粒粒细细胞胞：CD45+、HLA-DR-/CD13+、CD14-/CD33+，CD13比比CD33表达更高表达更高嗜嗜 酸酸 性性 粒粒 细细 胞胞：CD45+、HLA-DR-/CD13+、CD14-/CD33+，CD13比比CD33表达更高表达更高正常人血液细胞免疫表型T淋巴细胞：CD45+、CD3+89BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。正常人骨髓有核细胞免疫表型散点图正常人骨髓有核细胞免疫表型散点图正常人骨髓有核细胞免疫表型散点图90BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。正常人骨髓细胞免疫表型正常人骨髓细胞免疫表型淋巴细胞:CD45+、CD34-/CD38+、CD5+/CD7+（T淋巴细胞）；CD10-/CD19（B淋巴细胞）单核细胞:CD45+,CD34-/CD38+、HLA-DR+/CD13+、CD14+/CD33+、CD36+/GlyA-粒系细胞:原粒细胞CD45+、CD34+/CD38+、CD14-/CD33+、HLA-DR+/CD13+早幼粒细胞及其以下各阶段中性粒细胞：CD45+、CD34-/CD38+、CD14-/CD33+、HLA-DR-/CD13+，与原粒细胞或更幼稚细胞的表型有明显差异巨核细胞：CD45+、CD41+/CD61+幼红细胞：CD45-、CD36+/GlyA+正常人骨髓细胞免疫表型淋巴细胞:CD45+、CD34-91BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪原理及应用ppt课件92BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪原理及应用ppt课件93BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪原理及应用ppt课件94BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪原理及应用ppt课件95BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。流式细胞仪原理及应用ppt课件96BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。B-ALLB-ALL免疫表型免疫表型 HLHLA A-DRDR CD19CD19 CD10CD10 CD20CD20 CD22CD22 CD79CD79a a 其它其它 早期前早期前B B-ALLALL +-C C+/M M-+34/3834/38+普通型普通型ALLALL +-C C-/M M +34/3834/38 前前 B B-ALLALL +B B-ALLALL +-+KappaKappa+/LambdaLambda+*CD10CD10+的的 ALLALL 疗效好，有疗效好，有 CD34CD34+病人往往合并病人往往合并 t(9,22),t(9,22),需强化治疗需强化治疗 成熟成熟B-ALL免疫表型 HLA-DR CD19 CD10 CD98BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。AMLAML免疫表型免疫表型AML免疫表型99BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。急性急性T T淋巴细胞白血病（淋巴细胞白血病（T-ALLT-ALL）骨髓细胞免疫分型散点图骨髓细胞免疫分型散点图急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）骨髓细胞免疫分型散点图100BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。急性早幼粒细胞白血病（急性早幼粒细胞白血病（AML-M3AML-M3）骨髓细胞免疫分型散点图骨髓细胞免疫分型散点图急性早幼粒细胞白血病（AML-M3）骨髓细胞免疫分型散点图101BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。FCMFCM在临床血液学中的应用在临床血液学中的应用能正确区别AML和ALL，并能进一步区别ALL中的T系和B系及亚型能正确鉴别AML中难于鉴别的M0、M6、M7诊断双系或双表型白血病发现仅表达个别次要非本系列相关抗原的白血病诊断少见疑难白血病（如HCL）FCM在临床血液学中的应用能正确区别AML和ALL，并能进102BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。免疫分型免疫分型 对下列情况具有重要意义对下列情况具有重要意义 用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。形形态态学学为为急急性性淋淋巴巴细细胞胞白白血血病病（ALLALL）或或急急性性未未分分化化白白血病（血病（AULAUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。混合性白血病。混合性白血病。部部分分髓髓系系白白血血病病。目目前前，免免疫疫分分型型对对粒粒-单单核核细细胞胞和和单单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。慢性淋巴细胞白血病。慢性淋巴细胞白血病。微小残留白血病。微小残留白血病。免疫分型 对下列情况具有重要意义 用形态学、细胞化学染色不能103BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。阵发性血红蛋白尿阵发性血红蛋白尿PNH=阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性缺陷，对激活阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性缺陷，对激活补体异常敏感的一种慢性血管内溶血补体异常敏感的一种慢性血管内溶血=患者体内红细胞呈不均一性患者体内红细胞呈不均一性=利用流式细胞术和利用流式细胞术和CD55CD55和和CD59CD59单克隆抗体，对单克隆抗体，对PNHPNH患者红细患者红细胞、粒细胞和血小板进行分析，证实存在膜蛋白表达缺陷胞、粒细胞和血小板进行分析，证实存在膜蛋白表达缺陷的血细胞，并计算缺陷细胞在全血中所占比例的血细胞，并计算缺陷细胞在全血中所占比例阵发性血红蛋白尿PNH阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性104BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。阵发性血红蛋白尿阵发性血红蛋白尿PNH=正常人红细胞、粒细胞和血小板正常人红细胞、粒细胞和血小板CD59表达完全阳性表达完全阳性=PNH患者血细胞分为三型：患者血细胞分为三型：型：型：CD59表达完全阳性，荧光强度与正常人阳性峰荧光表达完全阳性，荧光强度与正常人阳性峰荧光强度接近强度接近型：型：CD59表达部分阳性，荧光强度介于表达部分阳性，荧光强度介于型与型与型之间型之间 型：型：CD59表达完全阴性表达完全阴性=分析分析PNH患者各型细胞所占百分比，评估疾病的严重程度患者各型细胞所占百分比，评估疾病的严重程度阵发性血红蛋白尿PNH正常人红细胞、粒细胞和血小板CD59表105BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。红细胞红细胞 PNH分析分析 A 正常人正常人B D 病人病人红细胞 PNH分析 A 正常人106BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。网织红细胞计数网织红细胞计数Retic-COUNT=操作快速、简便操作快速、简便=计数精确计数精确=低水平网织红细胞检测低水平网织红细胞检测=网织红细胞成熟指数网织红细胞成熟指数IRF临床应用：临床应用：=预测骨髓移植效果预测骨髓移植效果=判断贫血发病原因判断贫血发病原因=评价生物制剂的疗效评价生物制剂的疗效网织红细胞计数Retic-COUNT操作快速、简便临床应107BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。网织血小板的检测人们最先于1969年指出网织血小板是一类能被新亚甲蓝深染的血小板。如网织红细胞一样它们是代表了新生的血小板。以后的二十年中，人们发现网织血小板为骨髓新释放的未成熟成分，含有大量的RNA，因此，外周血中网织血小板的多少，可以间接反映骨髓巨核系造血的活跃程度。并能用常规的检测网织红细胞的噻唑橙（TO）等核酸染料染色。在流式细胞仪上方便、准确地检测。网织血小板的检测人们最先于1969年指出网织血小板是一类能被108BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。临床应用临床应用正常人网织红细胞正常人网织红细胞1.07%1.07%缺铁性贫血（缺铁性贫血（IDA)4.78%IDA)4.78%临床应用正常人网织红细胞1.07%缺铁性贫血（I109BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。临床应用临床应用再障（再障（AA)0.03%AA)0.03%溶血性贫血（溶血性贫血（HA)29.33%HA)29.33%临床应用再障（AA)0.03%溶血性贫血（HA110BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。造血干细胞计数造血干细胞计数 造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血细造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血细胞。胞。造血干细胞的特征是：造血干细胞的特征是：大小（大小（FSCFSC）和颗粒度（和颗粒度（SSCSSC）介于成熟淋巴细胞、大淋巴介于成熟淋巴细胞、大淋巴细胞相似细胞相似 细胞内含有较多核酸物质细胞内含有较多核酸物质 CD34 CD34表达弱阳性或强阳性表达弱阳性或强阳性 CD45 CD45表达弱阳性表达弱阳性 在干细胞移植时需要做造血干细胞绝对计数在干细胞移植时需要做造血干细胞绝对计数造血干细胞计数造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分化111BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。造血干细胞计数造血干细胞计数造血干细胞计数112BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。干细胞移植应用干细胞移植应用血液系统病症血液系统病症:L&L,L&L,再生障碍想贫血再生障碍想贫血恶性肿瘤恶性肿瘤:乳腺癌、儿童神经母细胞瘤、卵巢癌乳腺癌、儿童神经母细胞瘤、卵巢癌遗传性异常病变遗传性异常病变免疫缺陷免疫缺陷:血红蛋白病血红蛋白病干细胞移植应用血液系统病症:L&L,再生障碍想贫血113BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。血小板检测血小板检测=血小板膜糖蛋白复合物诊断血小板缺陷性疾病血小板膜糖蛋白复合物诊断血小板缺陷性疾病CD41-CD61复合物：血小板无力症复合物：血小板无力症CD42a-CD42b 复合物：巨大血小板症复合物：巨大血小板症=血小板活化的相关检查血小板活化的相关检查血小板颗粒膜糖蛋白，如血小板颗粒膜糖蛋白，如CD62，CD63血小板膜糖蛋白活化表位，如血小板膜糖蛋白活化表位，如PAC-1=血小板减少性疾病血小板减少性疾病血小板自身抗体检测血小板自身抗体检测网织血小板的检测网织血小板的检测=血小板脱落微粒的检测血小板脱落微粒的检测血小板检测血小板膜糖蛋白复合物诊断血小板缺陷性疾病114BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。血小板活化血小板活化IIb/IIIa复合物（复合物（CD41/CD61）在所有静止和在所有静止和活化的血小板上都有表达活化的血小板上都有表达血小板活化时发生的改变血小板活化时发生的改变IIb/IIIa复合物发生变构，表达复合物发生变构，表达PAC-1血小板内颗粒释放，分泌促进凝血反应的物质，这血小板内颗粒释放，分泌促进凝血反应的物质，这时表达时表达CD62P血小板活化IIb/IIIa复合物（CD41/CD61）在所有115BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。CD61CD61圈血小板门圈血小板门PAC-1/PAC-1/1 1：阴性对照，阴性对照，静止的血小板静止的血小板PAC-1/CD62PPAC-1/CD62P：试验管，试验管，ADPADP刺激下活化的血小刺激下活化的血小板，报告血小板活化板，报告血小板活化百分含量百分含量血小板活化血小板活化CD61圈血小板门血小板活化116BD BiosciencesImmune Function“雪亮工程是以区（县）、乡（镇）、村（社区）三级综治中心为指挥平台、以综治信息化为支撑、以网格化管理为基础、以公共安全视频监控联网应用为重点的“群众性治安防控工程”。血小板活化血小板活化直接测量循环血小板活化状态与反应性直接测量循环血小板活化状态与反应性可直接测定凝血酶等诱导剂活化的血小板可直接测定凝血酶等诱导剂活化的血小板血小板活化与临床的关系：监测血小板活化相关疾病过程，血小板活化与临床的关系：监测血小板活化相关疾病过程，抗血小板药物疗效或治疗药物的影响，预测血栓形成抗血小板药物疗效或治疗药物的影响，预测血栓形成心肌缺血（心绞痛、心肌梗塞）与血小板活化有关心肌缺血（心绞痛、心肌梗塞）与血小板活化有关预测冠状动脉成形术后发生急性缺血事件的危险性预测冠状动脉成形术后