基因工程的基本操作程序

1.21.2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序湖南醴陵四中湖南醴陵四中 金婷金婷cDNA合成合作探究合作探究“剪切剪切”拼接拼接导入导入检测检测基因文库mRNA降解降解mRNAcDNA合成过程合成过程cDNA一、获取目的基因一、获取目的基因答案基因组文库基因组文库部分基因文库部分基因文库P9P9寻根问底寻根问底:为什么要建基因文库？直接为什么要建基因文库？直接从含目的基因的生物体内提取不行吗？从含目的基因的生物体内提取不行吗？从生物体中提取基因是一个很复杂的过程，如果每次提取目的从生物体中提取基因是一个很复杂的过程，如果每次提取目的基因都这样操作的话，会使工作很繁杂。建立基因组文库的一基因都这样操作的话，会使工作很繁杂。建立基因组文库的一个最大的好处就是随时可以从中得到我们想要的目的基因。个最大的好处就是随时可以从中得到我们想要的目的基因。（1）所需要的目的基因的序列完全不知道）所需要的目的基因的序列完全不知道（2）只知道目的基因序列的一段）只知道目的基因序列的一段（3）想从一种生物体内获得许多基因）想从一种生物体内获得许多基因（4）想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同）想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同（5）想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什）想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同么不同（6）想得到一种生物的全基因组序列）想得到一种生物的全基因组序列P9P9寻根问底寻根问底:为什么要建基因文库？直接为什么要建基因文库？直接从含目的基因的生物体内提取不行吗？从含目的基因的生物体内提取不行吗？PCR原理原理:DNA双链复制双链复制前提前提:已知目的基因的脱氧已知目的基因的脱氧核苷酸序列核苷酸序列指数增长（参看选修1）归纳从基因文库中获取从基因文库中获取以以mRNA为模板，反转录合成为模板，反转录合成cDNA利用化学方法人工合成利用化学方法人工合成然后通过然后通过PCR特异性地扩增所需要的目特异性地扩增所需要的目的基因片段的基因片段一、获取目的基因一、获取目的基因2构建载体二、构建表达载体二、构建表达载体v目的基因目的基因v启动子启动子v终止子终止子v标记基因标记基因各个作用,能否将整个DNA直接导入3导入三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞v导入植物细胞补充归纳导入方法1、将目的基因导入植物细胞、将目的基因导入植物细胞v农杆菌转化法农杆菌转化法v基因枪法基因枪法v花粉管通道法花粉管通道法导入动物的方法v显微注射显微注射法法导入微生物2、将目的基因导入动物细胞、将目的基因导入动物细胞3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞v阅读课本阅读课本P13倒数倒数v完成学案（检查）完成学案（检查）4检测和鉴定四、目的基因的检测与鉴定v检测检测:是否插入目的基因是否插入目的基因是否转录是否转录是否翻译是否翻译v鉴定鉴定:抗性鉴定抗性鉴定功能活性鉴定功能活性鉴定分别提取什么进行检测归纳步骤归纳归纳:基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1.获取目的基因获取目的基因u从基因文库从基因文库u利用利用mRNA反转录出反转录出cDNAu化学方法人工合成化学方法人工合成2.构建基因表达载体构建基因表达载体u目的基因、启动子、终止子、标记基因目的基因、启动子、终止子、标记基因3.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞u农杆菌转化法、显微注射法、农杆菌转化法、显微注射法、Ca2+处理法处理法4.目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定u检测：是否插入、转录、翻译检测：是否插入、转录、翻译利用利用PCR扩增扩增