色谱基本原理ppt课件

我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物色谱基本原理色谱基本原理色谱基本原理1我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物第一节第一节 色谱法概述色谱法概述第一节 色谱法概述2我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物4.1.1 色谱法的特点、分类和作用色谱法的特点、分类和作用俄国植物学家茨维特在俄国植物学家茨维特在19061906年使用的装置：年使用的装置：色谱原型装置，如图。色谱原型装置，如图。1、概述、概述n色谱法色谱法(chromatography)：以试样：以试样组分组分在固定相和流动相间的在固定相和流动相间的溶解、吸附、分配、溶解、吸附、分配、离子交换或其他亲和作用的差异为依据离子交换或其他亲和作用的差异为依据而而建立起来的各种建立起来的各种分离分析方法分离分析方法称色谱法。称色谱法。4.1.1 色谱法的特点、分类和作用俄国植物学家茨维特在193我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物有关名词：有关名词：固定相固定相固定相固定相（stationary phasestationary phase）:色谱法中，填入柱管色谱法中，填入柱管色谱法中，填入柱管色谱法中，填入柱管 内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相。内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相。内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相。内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相。如离子交换树脂法中的树脂相。如离子交换树脂法中的树脂相。如离子交换树脂法中的树脂相。如离子交换树脂法中的树脂相。流动相流动相流动相流动相(mobile phasemobile phase):):携带样品流过固定相的流体携带样品流过固定相的流体携带样品流过固定相的流体携带样品流过固定相的流体（一般是气体或液体）称为流动相（一般是气体或液体）称为流动相（一般是气体或液体）称为流动相（一般是气体或液体）称为流动相。色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱(chromatography columnchromatography column):):装有固定相的管子装有固定相的管子装有固定相的管子装有固定相的管子称为色谱柱称为色谱柱称为色谱柱称为色谱柱。有关名词：固定相（stationary phase）:色谱4我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物色谱法的共同特点：色谱法的共同特点：任何色谱法都存在两个相，即流动相和固定相；流动任何色谱法都存在两个相，即流动相和固定相；流动 相可以是气体或液体，固定相为固体或涂渍在固体表相可以是气体或液体，固定相为固体或涂渍在固体表 面的高沸点液体；面的高沸点液体；流动相对固定相作相对运动，它携带样品通过固定相；流动相对固定相作相对运动，它携带样品通过固定相；被分离样品中各组分与色谱两相间具有不同的作用力，被分离样品中各组分与色谱两相间具有不同的作用力，这种作用力一般表现为吸附力或溶解能力，正是这种这种作用力一般表现为吸附力或溶解能力，正是这种 作用力的差异导致通过各组分通过固定相时达到彼此作用力的差异导致通过各组分通过固定相时达到彼此 分离。分离。色谱法的共同特点：任何色谱法都存在两个相，即流动相和固定相5我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物2、色谱法分类、色谱法分类 （1 1）气相色谱）气相色谱：流动相为气体（称为载气）。流动相为气体（称为载气）。按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱 按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱（2 2）液相色谱）液相色谱：流动相为液体（也称为淋洗液）。流动相为液体（也称为淋洗液）。按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。(3)其他色谱方法：其他色谱方法：薄层色谱和纸色谱、凝胶色谱法、薄层色谱和纸色谱、凝胶色谱法、高效毛细管电泳法等。高效毛细管电泳法等。2、色谱法分类 （1）气相色谱：流动相为气体（称为载气）。6我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物第二节第二节 气相色谱法气相色谱法(GC)Gas Chromatography第二节 气相色谱法(GC)7我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物（1）分离效率高：分离效率高：复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。（2 2）灵敏度高：灵敏度高：可以检测出可以检测出g.gg.g-1-1(10(10-6-6)级甚至级甚至ng.gng.g-1-1(10(10-9-9)级的物质量级的物质量.（3 3）分析速度快：分析速度快：一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。（4 4）应用范围广：应用范围广：适用于沸点低于适用于沸点低于400400的各种有机或无机试样的分析。的各种有机或无机试样的分析。不足之处：不足之处：不适用于高沸点、难挥发、热不稳定物质的分析。不适用于高沸点、难挥发、热不稳定物质的分析。被分离组分的被分离组分的定性定性较为困难。较为困难。1、气相色谱法的特点、气相色谱法的特点4.2.1 概述概述（1）分离效率高：1、气相色谱法的特点4.2.1 概述8我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物2、气相色谱分离过程、气相色谱分离过程当当试试样样由由载载气气携携带带进进入入色色谱谱柱柱与与固固定定相相接接触触时时，被被固固定定相相溶解或吸附。溶解或吸附。随随着着载载气气的的不不断断通通入入，被被溶溶解解或或吸吸附附的的组组分分又又从从固固定定相相中中挥发或脱附，挥发或脱附，挥挥发发或或脱脱附附下下的的组组分分随随着着载载气气向向前前移移动动时时又又再再次次被被固固定定相相溶解或吸附。溶解或吸附。随随着着载载气气的的流流动动，溶溶解解、挥挥发发，或或吸吸附附、脱脱附附的的过过程程反反复复地进行。地进行。2、气相色谱分离过程当试样由载气携带进入色谱柱与固定相接触时9我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物3、分配系数、分配系数 K 组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度（单位：分配达到平衡时的浓度（单位：g/mL）比，称为分配系数，）比，称为分配系数，用用K 表示，即：表示，即：3、分配系数 K 组分在固定相和流动相间发生的吸10我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物分配系数分配系数 K的讨论的讨论 一定温度下，组分的分配系数一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢；越大，出峰越慢；试样一定时，试样一定时，K主要取决于固定相性质；主要取决于固定相性质；每个组份在各种固定相上的分配系数每个组份在各种固定相上的分配系数K不同；不同；选择适宜的固定相可改善分离效果；选择适宜的固定相可改善分离效果；试样中的各组分具有不同的试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础；值是分离的基础；某组分的某组分的K=0时，即不被固定相保留，最先流出。时，即不被固定相保留，最先流出。分配系数 K的讨论 一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越11我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物4.2.2 气相色谱仪气相色谱仪4.2.2 气相色谱仪12我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物HP5890HP5890色谱仪色谱仪色谱仪色谱仪HP5890色谱仪13我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物福立福立福立福立GC9790GC9790色谱仪色谱仪色谱仪色谱仪福立GC9790色谱仪14我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 气相色谱仪通常由五部分组成：载气系统：气源、气体净化器、供气控载气系统：气源、气体净化器、供气控 制阀门和仪表。制阀门和仪表。进样系统：进样器、汽化室。进样系统：进样器、汽化室。分离系统：色谱柱、控温柱箱。分离系统：色谱柱、控温柱箱。检测系统：检测器、检测室。检测系统：检测器、检测室。记录系统：放大器、记录仪、记录系统：放大器、记录仪、色谱工作站。色谱工作站。15我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 16我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物气路系统气路系统载气载气:气相色谱中常用的载气有氮气，氦气气相色谱中常用的载气有氮气，氦气和氩气。和氩气。气路结构气路结构:主要有两种气路形式主要有两种气路形式 单柱单气路，适用于恒温分析单柱单气路，适用于恒温分析 双柱双气路，适用于程序升温，并能补偿固双柱双气路，适用于程序升温，并能补偿固定液的流失使其基线稳定。定液的流失使其基线稳定。净化器净化器:主要用来提高载气纯度。主要用来提高载气纯度。稳压恒流装置稳压恒流装置:稳定载气流速。稳定载气流速。气路系统载气:气相色谱中常用的载气有氮气，氦气和氩气。17我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物进样系统进样系统Dissolved in an organic solvent.Injected into the carrier gas flow by syringe or valve.包括进样装置和气化室包括进样装置和气化室进样系统Dissolved in an organic so18我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物分离系统分离系统气相色谱的分离系统是气相色谱的分离系统是色谱柱色谱柱，常用的色谱柱有，常用的色谱柱有填充填充柱柱和和毛细管柱毛细管柱两种：两种：填充柱填充柱是以固体吸附剂或涂渍了是以固体吸附剂或涂渍了固定液的载体颗粒填充到柱管内形成的柱子；固定液的载体颗粒填充到柱管内形成的柱子；毛细管毛细管柱柱内没有填充颗粒，是将固定相涂渍或者以化学键合内没有填充颗粒，是将固定相涂渍或者以化学键合方式附着到管内壁上。方式附着到管内壁上。由于混合物各组分的分由于混合物各组分的分离在这里完成，所以它离在这里完成，所以它是色谱仪中最重要的部件之一。是色谱仪中最重要的部件之一。分离系统气相色谱的分离系统是色谱柱，常用的色谱柱有填充柱和毛19我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物气液色谱填充柱的固定相通常由一种惰性多孔固体（称为气液色谱填充柱的固定相通常由一种惰性多孔固体（称为担担体体）及在其表面上涂渍一层较薄的高沸点有机物（称为）及在其表面上涂渍一层较薄的高沸点有机物（称为固定固定液液）液膜构成。）液膜构成。1、担体、担体提供一个大的惰性表面，以便使涂渍的固定液膜有足够的容量。提供一个大的惰性表面，以便使涂渍的固定液膜有足够的容量。担体应具有化学稳定性好、热稳定性好、有一定的机械强度、担体应具有化学稳定性好、热稳定性好、有一定的机械强度、合适的颗粒及均匀的粒径。常用的有硅藻土类。合适的颗粒及均匀的粒径。常用的有硅藻土类。2、固定液、固定液对色谱分离起着决定性作用。应具有化学稳定性、热稳定性好、对色谱分离起着决定性作用。应具有化学稳定性、热稳定性好、蒸汽压低、对分析样品有适合的溶解能力，并有高的选择性。蒸汽压低、对分析样品有适合的溶解能力，并有高的选择性。固定液在操作温度下是一种液体，柱温不能超过固定液的最高固定液在操作温度下是一种液体，柱温不能超过固定液的最高使用温度，否则会使它大量随载气流失。使用温度，否则会使它大量随载气流失。气液色谱填充柱的固定相通常由一种惰性多孔固体（称为担1、担体20我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物温控系统温控系统温控系统是用来设定，控制，测量色谱柱炉、气温控系统是用来设定，控制，测量色谱柱炉、气化室、检测室三处的温度。化室、检测室三处的温度。气化室的温度应使试样瞬时气化而又不分解。在气化室的温度应使试样瞬时气化而又不分解。在一般情况下，气化室的温度一般应比试样中最高一般情况下，气化室的温度一般应比试样中最高组分沸点高组分沸点高20-30 C左右，左右，比柱温高比柱温高10 50 C。温控系统温控系统是用来设定，控制，测量色谱柱炉、气化室、检测21我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物热导池检测器热导池检测器 thermal conductivity detector,TCD 氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器 flame ionization detector,FID电子捕获检测器电子捕获检测器 electron-capture detector,ECD热离子化检测器热离子化检测器 thermionic detector,TID火焰光度检测器火焰光度检测器 flame photometric detector,FPD检测器检测器热导池检测器 检测器22我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物热导池检测器热导池检测器 TCD 工作原理：工作原理：被分离的组分具有与被分离的组分具有与载气不同的热导系数，当检测器载气不同的热导系数，当检测器的金属丝被加热并温度达到恒定的金属丝被加热并温度达到恒定后，通过热导池的载气组成若发后，通过热导池的载气组成若发生变化就会带走与载气不同的热量，生变化就会带走与载气不同的热量，从而引起热敏元件阻值的变化。从而引起热敏元件阻值的变化。热导池检测器 TCD 工作原理：被分离的组分具有与23我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器 FID 工作原理：工作原理：以氢气和空气的混合物燃烧火焰为能源，将进入检测以氢气和空气的混合物燃烧火焰为能源，将进入检测器的有机物离子化，生成许多离子对，带电离子被安装在检测器器的有机物离子化，生成许多离子对，带电离子被安装在检测器上的电极吸引产生微弱的电流，经放大被记录仪记录。对含碳物上的电极吸引产生微弱的电流，经放大被记录仪记录。对含碳物质检测灵敏度高，而对不含碳物质无响应。质检测灵敏度高，而对不含碳物质无响应。氢火焰离子化检测器 FID工作原理：以氢气和空气的混合24我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物4.2.3 色谱理论基础色谱理论基础1 1、气相色谱流出曲线气相色谱流出曲线气相色谱流出曲线气相色谱流出曲线流动相带着组分通过色谱柱到达监测器时，由记录仪流动相带着组分通过色谱柱到达监测器时，由记录仪流动相带着组分通过色谱柱到达监测器时，由记录仪流动相带着组分通过色谱柱到达监测器时，由记录仪得到的信号时间曲线。得到的信号时间曲线。得到的信号时间曲线。得到的信号时间曲线。4.2.3 色谱理论基础1、气相色谱流出曲线流动相带着组分通25我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物基线：基线：无试样通过检测器时，检测到的信号即无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线为基线。基线漂移基线漂移：基线随时间定向缓慢地变化。：基线随时间定向缓慢地变化。基线基线基线漂基线漂移移2、色谱术语、色谱术语基线：无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。基线基线漂移26我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物峰高峰高 h（peak hight）：峰的顶点到峰底之间的垂直距离。：峰的顶点到峰底之间的垂直距离。峰面积峰面积A（peak area）：峰与峰底之间的面积。：峰与峰底之间的面积。峰高 h（peak hight）：峰的顶点到峰底之间的垂27我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物保留值保留值 A、时间表示的保留值、时间表示的保留值 保留时间（保留时间（tR）：）：组分从进样到柱后出现浓度极大值时组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间所需的时间 死时间（死时间（tM）：）：不与固定相作用的气体（如空气）的保不与固定相作用的气体（如空气）的保留时间。留时间。调整保留时间（调整保留时间（tR）：）：tR=tRtM A、时间表示的保留值28我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物B、用体积表示的保留值、用体积表示的保留值 保留体积（保留体积（VR）：VR =tRF0 （F0为色谱柱出口处的载气流量，为色谱柱出口处的载气流量，单位：单位：m L /min。）。）死体积（死体积（VM）：VM=tM F0 调整保留体积（调整保留体积（VR）：V R=VR VM B、用体积表示的保留值 保留体积（VR）：VR =29我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 组分组分2与组分与组分1调整保留值之比：调整保留值之比：r21=tR2 /tR1=VR2/V R1 相相对对保保留留值值只只与与柱柱温温和和固固定定相相性性质质有有关关，与与其其他他色色谱谱操操作作条条件件无无关关，它它表表示示了了固固定定相相对对这这两两种种组组分的选择性。分的选择性。C.相对保留值相对保留值r21 组分2与组分1调整保留值之比：C.相对保留30我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 色谱分析的实验依据：色谱分析的实验依据：、根据色谱峰的位置（保留时间）可以进、根据色谱峰的位置（保留时间）可以进行定性分析。行定性分析。2、根据色谱峰的面积或峰高可以进行定量、根据色谱峰的面积或峰高可以进行定量分析。分析。3、根据色谱峰的展宽程度，可以对某物质、根据色谱峰的展宽程度，可以对某物质在实验条件下的分离特性进行评价。在实验条件下的分离特性进行评价。色谱分析的实验依据：31我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物3、色谱分析的基本理论、色谱分析的基本理论(1)(1)热力学理论热力学理论热力学理论热力学理论：塔板理论：塔板理论：塔板理论：塔板理论平衡理论平衡理论平衡理论平衡理论 把把把把色色色色谱谱谱谱分分分分离离离离的的的的过过过过程程程程模模模模拟拟拟拟为为为为精精精精馏馏馏馏塔塔塔塔的的的的分分分分离离离离过过过过程程程程，把色谱柱比作一个精馏塔。把色谱柱比作一个精馏塔。把色谱柱比作一个精馏塔。把色谱柱比作一个精馏塔。（2 2）动力学理论）动力学理论）动力学理论）动力学理论：速率理论：速率理论：速率理论：速率理论3、色谱分析的基本理论(1)热力学理论：塔板理论平衡理论32我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物4、色谱操作条件的选择、色谱操作条件的选择(1)、固定相的选择固定相的选择 气液色谱，应根据“相似相溶”的原则分离非极性组分时，通常选用非极性固定相。各组分按沸点顺序出峰，低沸点组分先出峰。分离极性组分时，一般选用极性固定液。各组分按极性大小顺序流出色谱柱，极性小的先出峰。分离非极性和极性的（或易被极化的）混合物，一般选用极性固定液。此时，非极性组分先出峰，极性的（或易被极化的）组分后出峰。醇、胺、水等强极性和能形成氢键的化合物的分离，通常选择极性或氢键性的固定液。组成复杂、较难分离的试样，通常使用特殊固定液，或混合固定相。4、色谱操作条件的选择(1)、固定相的选择33我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(2)、柱长和柱内径的选择、柱长和柱内径的选择 增加柱长对提高分离度有利，但组分的保留时间tR ，且柱阻力，不便操作。柱长的选用原则是在能满足分离目的的前提下，柱长的选用原则是在能满足分离目的的前提下，尽可能选用较短的柱，有利于缩短分析时间。尽可能选用较短的柱，有利于缩短分析时间。填充色谱柱的柱长通常为13米，内径34厘米。(2)、柱长和柱内径的选择34我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(3)、柱温的确定、柱温的确定 首先应使柱温控制在固定液的最高使用温度（超过该温度固定液易流失）和最低使用温度（低于此温度固定液以固体形式存在）范围之内。柱温升高，分离度下降，色谱峰变窄变高。柱温，被测组分的挥发度，即被测组分在气相中的浓度，K，tR，低沸点组份峰易产生重叠。柱温，分离度，分析时间。对于难分离物质对，降低柱温虽然可在一定程度内使分离得到改善，但是不可能使之完全分离，这是由于两组分的相对保留值增大的同时，两组分的峰宽也在增加，当后者的增加速度大于前者时，两峰的交叠更为严重。柱温一般选择在接近或略低于组分平均沸点时的温度。组分复杂，沸程宽的试样，采用程序升温。(3)、柱温的确定 首先应使柱温控制在固定液的最高使用温35我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物程序升温程序升温36我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(1)(1)、色谱定性鉴定方法、色谱定性鉴定方法A.A.利用纯物质定性的方法利用纯物质定性的方法 利利用用保保留留值值定定性性：通通过过对对比比试试样样中中具具有有与与纯纯物物质质相相同同保保留留值值的的色色谱谱峰峰，来来确确定定试试样样中中是是否否含含有有该该物物质质及及在在色色谱谱图图中的位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比中的位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。利利用用加加入入法法定定性性：将将纯纯物物质质加加入入到到试试样样中中，观观察察各各组组分分色谱峰的相对变化。色谱峰的相对变化。B.B.利用文献保留值定性利用文献保留值定性 相相对对保保留留值值r r2121：相相对对保保留留值值r r2121仅仅与与柱柱温温和和固固定定液液性性质质有有关关。在在色色谱谱手手册册中中都都列列有有各各种种物物质质在在不不同同固固定定液液上上的的保保留留数据，可以用来进行定性鉴定。数据，可以用来进行定性鉴定。5、色谱定性、定量分析方法、色谱定性、定量分析方法(1)、色谱定性鉴定方法A.利用纯物质定性的方法5、色谱定性37我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物C.C.与其他分析仪器联用的定性方法与其他分析仪器联用的定性方法小型化的台式色质谱联用仪（GC-MS）色谱-红外光谱仪联用仪；组分的结构鉴定SamplSample eSamplSample e 589058901.0 1.0 DEG/MIDEG/MIN NHEWLETTHEWLETTPACKARDPACKARDHEWLETHEWLETT T PACKARPACKARD D5972A5972AMass Mass SelectivSelective e DetectoDetector rD DC CB BA A A AB BC CD DGas Chromatograph(GC)Gas Chromatograph(GC)Mass Spectrometer(MS)Mass Spectrometer(MS)SeparatioSeparation nIdentificatioIdentification nB BA AC CD DC.与其他分析仪器联用的定性方法小型化的台式色质谱联用仪（G38我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物A.外标法外标法将待测组分的纯物质配成将待测组分的纯物质配成不同浓度不同浓度的标准溶液，使的标准溶液，使浓度与待测组分接近，然后取固定量的上述溶液进浓度与待测组分接近，然后取固定量的上述溶液进行色谱分析，得到各标准样品的对应色谱图。行色谱分析，得到各标准样品的对应色谱图。图图 某组分的标准物质的色谱图某组分的标准物质的色谱图(2)、色谱定量分析方法色谱定量分析方法A.外标法将待测组分的纯物质配成不同浓度的标准溶液，使浓度与39我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物外标法（续）外标法（续）再在同样的条件下（同样的色谱操作条件和进再在同样的条件下（同样的色谱操作条件和进同样的体积），分析待测试样，得到色谱图。同样的体积），分析待测试样，得到色谱图。图图 某样品的色谱图某样品的色谱图外标法（续）再在同样的条件下（同样的色谱操作条件和进同样的体40我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物外标法（续）外标法（续）以标准样品的色谱峰面积作图，得到一条标准以标准样品的色谱峰面积作图，得到一条标准曲线，再在标准曲线上根据待测样品的峰面积曲线，再在标准曲线上根据待测样品的峰面积查出待测组分的浓度。查出待测组分的浓度。图图 标准（工作）曲线图标准（工作）曲线图外标法的特点：外标法的特点：外标法的特点：外标法的特点：操作简单，因而适用于工厂的控制分析和自动分析，但结操作简单，因而适用于工厂的控制分析和自动分析，但结操作简单，因而适用于工厂的控制分析和自动分析，但结操作简单，因而适用于工厂的控制分析和自动分析，但结果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。外标法（续）以标准样品的色谱峰面积作图，得到一条标准曲线，再41我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物B.内标法内标法内标物要满足以下要求：内标物要满足以下要求：（1）试样中不含有该物质；）试样中不含有该物质；（2）与被测组分性质比较接近；）与被测组分性质比较接近；（3）不与试样发生化学反应；）不与试样发生化学反应；（4）出峰位置应位于被测组分附近，且无组分峰影响。）出峰位置应位于被测组分附近，且无组分峰影响。试样配制：试样配制：准确称取一定量的试样准确称取一定量的试样W，加入一定量内标物，加入一定量内标物mS计算式：计算式：B.内标法内标物要满足以下要求：42我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物内标法内标法特点1.内内标标法法的的准准确确性性较较高高，操操作作条条件件和和进进样样量量的的稍稍许许变变动动对对定定量结果的影响不大。量结果的影响不大。2.每每个个试试样样的的分分析析，都都要要进进行行两两次次称称量量，不不适适合合大大批批量量试试样样的快速分析。的快速分析。3.若将内标法中的试样取样量和内标物加入量固定，则：若将内标法中的试样取样量和内标物加入量固定，则：内标法特点1.内标法的准确性较高，操作条件和进样量的稍许变43我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物第三节第三节 高效液相色谱（高效液相色谱（HPLC）第三节 高效液相色谱（HPLC）44我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物液相色谱仪液相色谱仪液相色谱仪45我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物4.3.1 高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。4.3.1 高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、46我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 高效液相色谱法：高效液相色谱法：高效液相色谱法：高效液相色谱法：特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学 键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实 验技术建立的一种液相色谱分析法。验技术建立的一种液相色谱分析法。验技术建立的一种液相色谱分析法。验技术建立的一种液相色谱分析法。高压：高压：高压：高压：150-350*10150-350*105 5 PaPa 高效：大于高效：大于高效：大于高效：大于3000030000塔板塔板塔板塔板/米米米米 高灵敏：高灵敏：高灵敏：高灵敏：1010-9-9g g（紫外检测）、（紫外检测）、（紫外检测）、（紫外检测）、1010-11-11g g（荧光检测）（荧光检测）（荧光检测）（荧光检测）高效液相色谱法：47我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物一、一、HPLCHPLC与与GCGC差别差别 1分析对象的区别分析对象的区别 GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较：适于能气化、热稳定性好、且沸点较 低的样品；但对高沸点、挥发性差、低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样热稳定性差、离子型及高聚物的样 品，尤其对大多数生化样品不可检测品，尤其对大多数生化样品不可检测 占有机物的占有机物的20%HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括：适于溶解后能制成溶液的样品（包括 有机介质溶液），不受样品挥发性和有机介质溶液），不受样品挥发性和 热稳定性的限制，对分子量大、难热稳定性的限制，对分子量大、难 气化、热稳定性差的生化样品及高分气化、热稳定性差的生化样品及高分 子和离子型样品均可检测子和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的用途广泛，占有机物的80%一、HPLC与GC差别 1分析对象的区别48我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物2流动相差别的区别流动相差别的区别GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用 力，只与固定相有相互作用。力，只与固定相有相互作用。HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用 力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起 正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改 变流动相极性和变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当值也对分离起到调控作用，当 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 也可以增大分离选择性。也可以增大分离选择性。3操作条件差别操作条件差别GC：加温操作：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）2流动相差别的区别49我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物1 1贮液罐（滤棒，可滤贮液罐（滤棒，可滤贮液罐（滤棒，可滤贮液罐（滤棒，可滤 去颗粒状物质）去颗粒状物质）去颗粒状物质）去颗粒状物质）2 2高压泵（输液泵）高压泵（输液泵）高压泵（输液泵）高压泵（输液泵）3 3进样装置进样装置进样装置进样装置4 4色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱分离分离分离分离5 5检测器检测器检测器检测器分析分析分析分析6 6废液出口或组分收集器废液出口或组分收集器废液出口或组分收集器废液出口或组分收集器 7 7记录装置记录装置记录装置记录装置4.3.2 流程及主要部件流程及主要部件1.1.流程流程1贮液罐（滤棒，可滤4.3.2 流程及主要部件1.流程50我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物2.主要部件主要部件(1)高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：150350105 Pa。为为了了获获得得高高柱柱效效而而使使用用粒粒度度很很小小的的固固定定相相（10m），液液体体的的流流动动相相高高速速通通过过时时，将将产产生生很很高高的的压压力力，因因此此高高压压、高高速是高效液相色谱的特点之一。速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性2.主要部件(1)高压输液泵51我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(2)梯度淋洗装置梯度淋洗装置外梯度外梯度:利用两台高压输液泵，利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。室，混合后进入色谱柱。内梯度内梯度:一台高压泵一台高压泵,通过比通过比例调节阀例调节阀,将两种或多种将两种或多种不同极性的溶剂按一定的不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。比例抽入高压泵中混合。(2)梯度淋洗装置外梯度:内梯度:52我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(3)进样装置进样装置 流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：(3)进样装置 流路中为高压力工作状态，53我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(4)高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长，柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。(4)高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内54我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(5)高效液相色谱检测器高效液相色谱检测器 紫外光度检测器（紫外光度检测器（UV）：）：最小检测量最小检测量10-9gmL-1，对流，对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。最常用的检测器。最常用的检测器。(5)高效液相色谱检测器 紫外光度检测器（U55我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物HPLC的特点和实际应用的特点和实际应用1 1、利用其高柱效（、利用其高柱效（、利用其高柱效（、利用其高柱效（n=10n=104 4片片片片/米），有效分离极复杂米），有效分离极复杂米），有效分离极复杂米），有效分离极复杂 体系中的痕量组分。体系中的痕量组分。体系中的痕量组分。体系中的痕量组分。正相色谱分离有机溶剂中的物质正相色谱分离有机溶剂中的物质正相色谱分离有机溶剂中的物质正相色谱分离有机溶剂中的物质 反相色谱分离水溶液中的物质反相色谱分离水溶液中的物质反相色谱分离水溶液中的物质反相色谱分离水溶液中的物质-生化物质。生化物质。生化物质。生化物质。2 2、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对 色谱法分析离子型体的含量。（蛋白质、氨色谱法分析离子型体的含量。（蛋白质、氨色谱法分析离子型体的含量。（蛋白质、氨色谱法分析离子型体的含量。（蛋白质、氨 基酸、常见阴阳离子等）基酸、常见阴阳离子等）基酸、常见阴阳离子等）基酸、常见阴阳离子等）3 3、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分 离高分子化合物。离高分子化合物。离高分子化合物。离高分子化合物。4 4 4 4、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化 合物。合物。合物。合物。HPLC的特点和实际应用1、利用其高柱效（n=104片/米）56我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物1.1.固定相与装柱方法的选择：固定相与装柱方法的选择：选粒径小的、分布均匀的球形固定相选粒径小的、分布均匀的球形固定相 （dp10mdp10m）首选化学键合相，匀浆法装柱首选化学键合相，匀浆法装柱2.2.流动相及其流速的选择：流动相及其流速的选择：选粘度小、低流速的流动相选粘度小、低流速的流动相甲醇，甲醇，约约1ml/min 1ml/min 3.3.柱温的选择：选室温柱温的选择：选室温25250 0C C左右左右HPLC法中分离条件的选择法中分离条件的选择1.固定相与装柱方法的选择：HPLC法中分离条件的选择57我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物2.固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。选用原则与气相色谱一样。选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效，选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效，但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。高的工作，一般很少自行制备。选择短柱、细内径提高分析速度；选择短柱、细内径提高分析速度；研制高效柱填料是一活跃领域。研制高效柱填料是一活跃领域。2.固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上58我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物3.流动相及流动相的极性流动相及流动相的极性 （1）可可显显著著改改变变组组分分分分离离状状况况的的流流动动相相选选择择在在液液相相色色谱谱中中显显得得特特别别重重要要。液液相相色色谱谱的的流流动动相相又又称称为为：淋淋洗洗液液，洗洗脱脱剂。剂。（2）亲亲水水性性固固定定液液常常采采用用疏疏水水性性流流动动相相，即即流流动动相相的的极极性性小小于于固固定定相相的的极极性性，称称为为正正相相液液液液色色谱谱法法，极极性性柱柱也也称称正正相柱。相柱。（3）若若流流动动相相的的极极性性大大于于固固定定液液的的极极性性，则则称称为为反反相相液液液液色色谱谱，非非极极性性柱柱也也称称为为反反相相柱柱。组组分分在在两两种种类类型型分分离离柱柱上上的出峰顺序相反。的出峰顺序相反。3.流动相及流动相的极性 （1）可显著改变组分分离59我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物选择流动相时应注意的几个问题：选择流动相时应注意的几个问题：（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。检测器时，流动相不应有紫外吸收。选择流动相时应注意的几个问题：（1）尽量使用高纯度试剂作流动60我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物第四节第四节 凝胶渗透色谱凝胶渗透色谱(GPC)Gel Permeation Chromatography第四节 凝胶渗透色谱(GPC)Gel Permeatio61我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物一种新型的液体色谱，一种新型的液体色谱，1964年，年，J.C.Moore首首先研究成功。先研究成功。不仅可用于小分子物质的分离与鉴定，而且可不仅可用于小分子物质的分离与鉴定，而且可作为用来分析化学性质相同但分子体积不同的作为用来分析化学性质相同但分子体积不同的高分子同系物。高分子同系物。现阶段，现阶段，已经成为最为重要的测定聚合物的分已经成为最为重要的测定聚合物的分子量与分子量分布的方法。子量与分子量分布的方法。介绍介绍一种新型的液体色谱，1964年，J.C.Moore首先研62我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物GPC以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶；聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶；聚合物在分离柱上按聚合物在分离柱上按分子流体力学体积大小被分离开分子流体力学体积大小被分离开.GPC以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、63我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物浓度检测器浓度检测器solventsolution体积大的分子先体积大的分子先被淋洗出来被淋洗出来体积小的分子后体积小的分子后被淋洗出来被淋洗出来浓度检测器solventsolution体积大的分子先被淋洗64我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(1)测定原理测定原理淋出体积：自试样进入色谱柱到淋洗出来，所接收淋出体积：自试样进入色谱柱到淋洗出来，所接收到的淋出液的体积，称为该试样的到的淋出液的体积，称为该试样的淋出体积淋出体积Ve。当仪器与实验条件确定后，溶质的淋出体积与其分当仪器与实验条件确定后，溶质的淋出体积与其分子量有关，分子量越大，其淋出体积越小。子量有关，分子量越大，其淋出体积越小。分子量越小，分子的体积越小，在流动过程中，不仅分子量越小，分子的体积越小，在流动过程中，不仅会从载体间较大空隙通过，还会从载体内部的小孔通会从载体间较大空隙通过，还会从载体内部的小孔通过，经过的路程长；而体积大的大分子量的分子只能过，经过的路程长；而体积大的大分子量的分子只能从载体间的空隙通过，经过的路程短，所以最大的分从载体间的空隙通过，经过的路程短，所以最大的分子会最先被淋洗出来。子会最先被淋洗出来。(1)测定原理淋出体积：自试样进入色谱柱到淋洗出来，所接收65我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物(2)体积排除机理体积排除机理溶质分子的体积越小溶质分子的体积越小,其淋出体积越大其淋出体积越大.这种这种解释不考虑溶质与载体间的吸附效应以及溶解释不考虑溶质与载体间的吸附效应以及溶质在流动相和固定相中的分配效应质在流动相和固定相中的分配效应,其淋出体其淋出体积仅仅由溶质分子的尺寸和载体的孔径尺寸积仅仅由溶质分子的