溶血性链球菌.ppt

Page 1 Page 2 溶 血 性 链 球 菌 又 称 沙 培 林对 热 和 化 学 清 毒 剂 均 敏 感 ,常引 起 扁 桃 体 、 咽 部 、 中 耳 等感 染 。 亦 为 肾 盂 肾 炎 、 产 褥热 、 猩 红 热 的 病 原 体 。 Page 3 一 、 生 物 学 特 性 二 、 流 行 病 学 三 、 致 病 性 五 、 检 验 和 控 制 四 、 抵 抗 力 Page 4 1、 形 态 与 染 色 链 球 菌 呈 球 形 或 椭 圆 形 ， 直 径 0.6-1.0m， 呈 链状 排 列 ， 长 短 不 一 ， 从 4-8个 至 20-30个 菌 细 胞 组 成不 等 ， 链 的 长 短 与 细 菌 的 种 类 及 生 长 环 境 有 关 。 在液 体 培 养 基 中 易 呈 长 链 ， 固 体 培 养 基 中 常 呈 短 链 ，由 于 链 球 菌 能 产 生 脱 链 酶 ， 所 以 正 常 情 况 下 链 球 菌的 链 不 能 无 限 制 的 延 长 。多 数 菌 株 在 血 清 肉 汤 中 培 养 2-4h易 形 成 透 明 质 酸 的 荚 膜 ， 继续 培 养 后 消 失 。 该 菌 不 形 成 芽胞 ， 无 鞭 毛 ， 易 被 普 通 的 碱 性染 料 着 色 ， 革 兰 氏 阳 性 ， 老 龄 培 养 或 被 中 性 粒 细 胞 吞 噬 后 ，转 为 革 兰 氏 阴 性 。 Page 5 2、 培 养 特 征 需 氧 或 兼 性 厌 氧 菌 ， 营 养 要 求 较 高 ， 普 通 培养 基 上 生 长 不 良 ， 需 补 充 血 清 、 血 液 、 腹 水 ， 大多 数 菌 株 需 核 黄 素 、 维 生 素 B6、 烟 酸 等 生 长 因 子 。最 适 生 长 温 度 为 37 ， 在 20-42 能 生 长 ， 最 适pH为 7.4-7.6。在 血 清 肉 汤 中 易 成 长 链 ， 管 底 呈 絮 状 或 颗 粒 状 沉淀 生 长 。在 血 平 板 上 形 成 灰 白 色 、 半 透 明 、 表 面 光 滑 、 边缘 整 齐 、 直 径 0.5-0.75mm的 细 小 菌 落 ， 不 同 菌 株溶 血 不 一 。 Page 6 3、 生 化 反 应 分 解 葡 萄 糖 ， 产 酸 不 产 气 ，对 乳 糖 、 甘 露 醇 、 水 杨 苷 、 山 梨醇 、 棉 子 糖 、 蕈 糖 、 七 叶 苷 的 分解 能 力 因 不 同 菌 株 而 异 。 一 般 不分 解 菊 糖 ， 不 被 胆 汁 溶 解 ， 触 酶阴 性 。 Page 7 4、 抗 原 结 构链 球 菌 的 抗 原 构 造 较 复 杂 ， 主 要 有 三 种 ：（ 1） 核 蛋 白 抗 原 或 称 P抗 原 ， 无 特 异 性 ，各 种 链 球 菌 均 相 同 。（ 2） 多 糖 抗 原 或 称 C抗 原 ， 系 群 特 异 性 抗原 ， 是 细 胞 壁 的 多 糖 组 分 ， 可 用 稀 盐 酸 等 提取 。（ 3） 蛋 白 质 抗 原 或 称 表 面 抗 原 ， 具 有 型 特异 性 ， 位 于 C抗 原 外 层 ， 其 中 可 分 为 M、 T、R、 S四 种 不 同 性 质 的 抗 原 成 分 ， 与 致 病 性有 关 的 是 M抗 原 。 Page 8 5、 分 类 根 据 链 球 菌 在 血 液 培 养 基 上 生 长 繁 殖 后 是 否 溶 血及 其 溶 血 性 质 分 为 三 类 。（ 1） -溶 血 性 链 球 菌 ： 菌 落 周 围 有 1-2mm宽 的 草 绿色 溶 血 环 ， 也 称 甲 型 溶 血 ， 这 类 链 球 菌 多 为 条 件 致 病菌 。（ 2） -溶 血 性 链 球 菌 ： 菌 落 周 围 形 成 一 个 2-4mm宽 、界 限 分 明 、 完 全 透 明 的 无 色 溶 血 环 ， 也 称 乙 型 溶 血 ，因 而 这 类 菌 亦 称 为 溶 血 性 链 球 菌 ， 该 菌 的 致 病 力 强 ，常 引 起 人 类 和 动 物 的 多 种 疾 病 。 （ 3） -链 球 菌 ： 不 产 生 溶 血 素 ， 菌 落 周 围 无 溶 血环 ， 也 称 为 丙 型 或 不 溶 血 性 链 球 菌 ， 该 菌 无 致 病 性 ，常 存 在 于 乳 类 和 粪 便 中 ， 偶 尔 也 引 起 感 染 。 Page 9 溶 血 性 链 球 菌 在 自 然 界 中 分 布 较 广 ， 存 在 于 水 、 空 气 、 尘 埃 、粪 便 及 健 康 人 和 动 物 的 口 腔 、 鼻 腔 、 咽 喉 中 ， 可 通 过 直 接 接触 、 空 气 飞 沫 传 播 或 通 过 皮 肤 、 粘 膜 伤 口 感 染 ， 被 污 染 的 食品 如 奶 、 肉 、 蛋 及 其 制 品 也 会 对 人 类 进 行 感 染 。 上 呼 吸 道 感染 患 者 、 人 畜 化 脓 性 感 染 部 位 常 成 为 食 品 污 染 的 污 染 源 。 一般 来 说 ， 溶 血 性 链 球 菌 常 通 过 以 下 途 径 污 染 食 品 ： 1、 食 品 加 工 或 销 售 人 员 口 腔 、 鼻 腔 、 手 、 面 部 有 化 脓 性炎 症 时 造 成 食 品 的 污 染 ； 2、 食 品 在 加 工 前 就 已 带 菌 、 奶 牛 患 化 脓 性 乳 腺 炎 或 畜 禽局 部 化 脓 时 ， 其 奶 和 肉 尸 某 些 部 位 污 染 ； 3、 熟 食 制 品 因 包 装 不 善 而 使 食 品 受 到 污 染 。流 行 病 学 Page 10 溶 血 性 链 球 菌 常 可 引 起 皮 肤 、 皮 下 组 织 的化 脓 性 炎 症 、 呼 吸 道 感 染 、 流 行 性 咽 炎 的 爆 发性 流 行 以 及 新 生 儿 败 血 症 、 细 菌 性 心 内 膜 炎 、猩 红 热 、 肾 小 球 肾 炎 。溶 血 性 链 球 菌 的 致 病 性 与 其 产 生 的 毒 素 及 其 侵袭 性 酶 有 关 ， 主 要 有 以 下 几 种 ： 1、 链 球 菌 溶 血 素 ： 溶 血 素 有 O和 S两 种 ，O为 含 有 -SH的 蛋 白 质 ， 具 有 抗 原 性 ， S为 小 分子 多 肽 ， 分 子 量 较 小 ， 故 无 抗 原 性 。 2、 致 热 外 毒 素 ： 曾 称 红 疹 毒 素 或 猩 红 热毒 素 ， 是 人 类 猩 红 热 的 主 要 毒 性 物 质 ， 会 引 起局 部 或 全 身 红 疹 、 发 热 、 疼 痛 、 恶 心 、 呕 吐 、周 身 不 适 。 致病性 Page 11 3、 透 明 质 酸 酶 ： 又 称 扩 散 因 子 ， 能 分 解细 胞 间 质 的 透 明 质 酸 ， 故 能 增 加 细 菌 的 侵袭 力 ， 使 病 菌 易 在 组 织 中 扩 散 。4、 链 激 酶 ： 又 称 链 球 菌 纤 维 蛋 白 溶 酶 ，能 使 血 液 中 纤 维 蛋 白 酶 原 变 成 纤 维 蛋 白 酶 ，具 有 增 强 细 菌 在 组 织 中 的 扩 散 作 用 ， 该 酶耐 热 ， 100 50分 钟 仍 可 保 持 活 性 。5、 链 道 酶 ： 又 称 链 球 菌 DNA酶 ， 能 使 脓液 稀 薄 ， 促 进 病 菌 扩 散 。6、 杀 白 细 胞 素 ： 能 使 白 细 胞 失 去 动 力 ，变 成 球 形 ， 最 后 膨 胀 破 裂 。 Page 12 抵 抗 力 该 菌 抵 抗 力 一 般 不 强 ， 60 30min即被 杀 死 ， 对 常 用 消 毒 剂 敏 感 ， 在 干 燥尘 埃 中 生 存 数 月 。 乙 型 链 球 菌 对 青 霉素 、 红 霉 素 、 氯 霉 素 、 四 环 素 、 磺 胺均 敏 感 。 青 霉 素 是 链 球 菌 感 染 的 首 选药 物 ， 很 少 有 耐 药 性 。 Page 13 Page 14 设 备 和 材 料1冰 箱 ： O 4 。2恒 温 培 养 箱 ： 36 士 1 。3恒 温 水 浴 锅 ： 36 土 1 。4显 微 镜 ： 10* l00*。5均 质 器 或 灭 菌 乳 钵 。6离 心 机 ： 4000r/min。7架 盘 药 物 天 平 ： 0g5009， 精 确 至 0.5g。8灭 菌 试 管 ： 10mm*100mm、 l6mm*160mm。9灭 菌 吸 管 ： 1mL（ 具 0.01mL刻 度 ） 、 5mL、 10mL（ 具 1mL刻 度 ） 。10灭 菌 锥 形 瓶 ： 100mL。11灭 菌 培 养 皿 ： 直 径 90mm。12灭 菌 棉 签 、 镊 子 等 。 Page 15 培 养 基 和 试 剂1葡 萄 糖 肉 浸 液 肉 汤 ： 按 GB/T4789.28一 2003中 4.1规 定 。 在 肉 浸 液 肉 汤 内 加 人 1 葡 萄 糖 。2肉 浸 液 肉 汤 ： 按 GB/T4789.28一 2003中 4.1规 定 。3匹 克 氏 肉 汤 ： 按 GB/T4789.28一 2003中 4.62规 定 。4血 琼 脂 平 板 ： 按 GB/T4789.28一 2003中 4.6规 定 。5人 血 浆 。6 0.25%氯 化 钙 。7 0.85 灭 菌 生 理 盐 水 。8杆 菌 肤 药 敏 纸 片 （ 含 0.04单 位 ） 。 Page 16 Page 17 Page 18 匹 克 氏 肉 汤 含 1%胰 蛋 白 胨 的 牛 心 浸 液 200mL 1： 25000结 晶 紫 盐 水 溶 液 10mL 1： 800三 氮 化 钠 溶 液 10mL 脱 纤 维 兔 血 (或 羊 血 ) 10mL 制 法 ： 将 上 述 已 灭 菌 的 各 种 成 分 ， 用 无 菌手 续 依 次 混 合 ， 分 装 于 无 菌 试 管 内 ， 每管 约 2mL， 保 存 于 冰 箱 内 备 用 Page 19 血 平 板 ： 菌 落 为 灰 白 色 ， 半 透 明 或 不 透 明 ，表 面 光 滑 ， 有 乳 光 ， 直 径 约 0.50.75mm， 为 圆 形 突 起 的 细 小 菌 落 ， 乙 型溶 血 性 链 球 菌 周 围 有 24mm界 限 分 明 、无 色 透 明 的 溶 血 圈 。 Page 20 制 法 ： 取 营 养 琼 脂 （ PH7 6） ， 加 热 使其 溶 解 待 冷 至 45-50 ， 以 灭 菌 操 作 于 每100毫 升 营 养 琼 脂 加 灭 菌 脱 纤 维 羊 血 或 兔血 5-10毫 升 ,轻 轻 摇 匀 ， 立 即 倾 注 于 平 板或 分 装 试 管 ， 制 成 斜 面 备 用 。 配 方 ： pH7.4-7.6豆 粉 琼 脂 100ml 脱 纤 维 羊 血 510ml 血 琼 脂 平 板 （ BA）亦 可 用 其 它 营 养 丰 富 的 基 础 培 养 基 配 制 血 琼 脂 。 Page 21 1、 样 品 处 理 ： 取 25g固 体 （ 或 25mL液 体 ）检 样 加 入 225mL灭 菌 生 理 盐 水 ， 制 成 混 悬 液 。2、 吸 取 5mL混 悬 液 接 种 至 50mL葡 萄 糖 肉 浸液 肉 汤 ， 或 直 接 划 线 于 血 平 板 （ 如 检 样 污 染严 重 ， 可 同 时 接 种 5mL至 匹 克 氏 肉 汤 ） ，36 培 养 24h， 接 种 血 平 板 ， 36 培 养 24h,挑 起 乙 型 溶 血 圆 形 突 起 的 细 小 菌 落 ， 在 血 平板 上 分 纯 ， 观 察 在 液 体 和 固 体 中 的 培 养 特 征 、溶 血 情 况 及 革 兰 氏 染 色 、 形 态 ， 并 进 行 链 激酶 试 验 和 杆 菌 肽 敏 感 试 验 。 （ 一 ） 检 验 Page 22 葡 萄 糖 肉 浸 液 肉 汤 原 理 ： 蛋 白 胨 、 牛 肉 浸 出 粉 提 供 氮源 、 维 生 素 和 生 长 因 子 ； 氯 化 钠维 持 均 衡 的 渗 透 压 ； 磷 酸 氢 二 钾为 缓 冲 剂 ； 葡 萄 糖 提 供 碳 源 。配 方 （ 每 升 ） ： 牛肉(提取浸出粉) 500g氯化钠 5g蛋白胨 10g磷酸氢二钾 2g葡萄糖 10g 最 终 pH 7.5 0.2 将 绞 碎 之 去 筋 膜 无 油 脂 牛 肉 500g加 蒸 馏 水 1000mL， 混 合后 放 冰 箱 过 夜 ， 除 去 液 面 之 浮 油 ， 隔 水 煮 沸 半 小 时 ， 使 肉渣 完 全 凝 结 成 块 ， 用 绒 布 过 滤 ， 并 挤 压 收 集 全 部 滤 液 ， 加水 补 足 原 量 。 加 入 蛋 白 胨 、 氯 化 钠 和 磷 酸 盐 ， 溶 解 后 校 正pH7.4 7.6煮 沸 并 过 滤 ， 分 装 烧 瓶 ， 121 高 压 灭 菌 30min。 Page 23 4、 杆 菌 肽 敏 感 试 验 ： 取 典 型 菌 落 的 菌 液 涂 布于 血 平 板 上 ， 用 灭 菌 镊 子 夹 取 每 片 含 有 0.04单 位 的 杆 菌 肽 纸 片 置 于 上 述 平 板 上 ， 36 培养 18-24h， 如 有 抑 菌 圈 出 现 即 为 阳 性 。 用 已知 的 阳 性 菌 株 做 对 照 。 Page 24 3、 链 激 酶 试 验 ： 吸 取 草 酸 钾 血 浆 0.2mL，加 0.8mL灭 菌 生 理 盐 水 ， 混 匀 ， 再 加 入 链球 菌 18-24h36 肉 浸 液 肉 汤 培 养 物 0.5mL及 0.25%氯 化 钙 0.25mL， 混 匀 ， 置 于 36水 浴 10min,血 浆 混 合 物 自 行 凝 固 ， 观 察 凝块 重 新 完 全 溶 解 的 时 间 ， 完 全 溶 解 为 阳 性 ，如 24h后 不 溶 解 即 为 阴 性 。 同 时 用 肉 浸 液肉 汤 做 阴 性 对 照 ， 用 已 知 的 链 激 酶 阳 性 的菌 株 做 阳 性 对 照 。 Page 25 （ 二 ） 控 制 1、 防 止 带 菌 人 群 对 各 种 食 物 的 污 染 ， 患 局部 化 脓 性 感 染 、 上 呼 吸 道 感 染 的 人 员 要 暂 停 与 食品 接 触 的 工 作 。 2、 防 止 对 奶 及 其 制 品 的 污 染 ， 牛 奶 场 要 定期 对 生 产 中 的 奶 牛 进 行 体 检 ， 坚 持 挤 奶 前 消 毒 ，一 旦 发 现 患 化 脓 性 乳 腺 炎 的 奶 牛 要 立 即 隔 离 ， 奶制 品 要 用 消 毒 过 的 原 料 ， 并 注 意 低 温 保 存 。 3、 在 动 物 屠 宰 过 程 中 ， 应 严 格 执 行 检 验 法规 ， 割 除 病 灶 并 以 流 水 冲 洗 ； 在 肉 制 品 加 工 过 程中 发 现 化 脓 性 病 灶 应 整 块 剔 除 。 报 告 Page 35 Page 36 Page 37 Page 38 Page 40 Page 41 Page 42 Page 44 Page 45 Page 46 Page 48