质量标准的建立、标准物质研制和药敏试验的规范性

l 兽 药 研 究 开 发 的 重 要 内 容 之 一 化 学 药 品 注 册 分 类 及 注 册 资 料 要 求 第 12条 ： 提 供 质 量 标 准 草 案 及 起 草 说 明l 质 量 标 准 是 控 制 产 品 质 量 的 有 效 措 施 之 一 好 的 质 量 标 准 ： 能 充 分 地 反 映 产 品 的 特 性 、 工 艺 生 产 水 平 、 产 品 特 点 。 *直 接 体 现 申 报 企 业 的 水 平 。 l 复 核 检 验 的 依 据 。 1. 了 解 研 制 兽 药 的 特 性 ： 原 料 药 的 结 构 和 理 化 性 质 ； 制 剂 的 剂 型特 点 、 成 分 控 制 等 。2. 考 虑 制 备 工 艺 对 兽 药 质 量 的 影 响 ： 如 中 间 体 、 溶 剂 和 辅 料 。3. 结 合 兽 药 的 稳 定 性 考 察 结 果 4.充 分 而 全 面 的 质 量 研 究 工 作 -方 法 学 研 究 选 择 合 适 的 测 定 方 法 -参 照 国 内 外 药 典 同 品 种 的 方 法 ； 目 前 药 品 的 测 定 技 术 ， 不 落 伍 。完 全 按 照 药 典 附 录 “ 兽 药 质 量 标 准 分 析 方 法 验 证 指 导 原 则 ” 进 行方 法 学 研 究 。无 菌 、 细 菌 内 毒 素 和 微 生 物 限 度 的 验 证 方 法 参 照 兽 药 典 附 录 相 应测 定 方 法 项 的 要 求 。 兽用化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则 质量标准的前提 5.体 现 质 量 标 准 的 特 点 n 整 体 性n 严 谨 性 各 项 目 、 指 标 即 相 互 补 充 ， 又 相 对 独 立 ； 每 项 检 验 仅 规 定 一 项 方 法 为 法 定 方 法 ； 文 字 严 谨n 科 学 性 限 度 的 合 理 性 方 法 的 可 操 作 性n 简 洁 性检 验 方 法 易 普 及 推 广 项 目 设 定 原 则 ： 既 要 设 置 通 用 性 项 目 ， 又 要 设 置 针 对 性 项 目 。项目原料制剂性状外 观 、 色 泽 等 。本 身 理 化 特 性 ： 溶 解 性 、 熔 点 、 比旋 度 、 吸 收 系 数 、 相 对 密 度 、 熔 点、 凝 点 等 。 外 观 、 色 泽 等 。本 身 理 化 特 性 ： 溶 液 剂 -相 对 密 度 。鉴别（ 1） 有 效 成 分 结 构 的 鉴 定 ： 化 学 反应 、 TLC、 UV、 色 谱 、 IR。（ 2） 盐 基 鉴 定 ： 氯 化 物 、 硫 酸 盐 、氯 化 物 等 。 （ 1） 有 效 成 分 结 构 的 鉴 定 ： 化 学 反应 、 TLC、 UV、 色 谱 、 IR等 。（ 2） 盐 基 鉴 定 ： 氯 化 物 、 硫 酸 盐 、氯 化 物 等 。 检查酸 碱 度 、 溶 液 的 澄 清 度 与 颜 色 、 吸光 度 、 组 分 /异 构 体 、 有 关 物 质 （ 高聚 物 ） 、 晶 型 、 含 盐 量 、 残 留 溶 剂、 水 分 /干 燥 失 重 、 炽 灼 残 渣 、 重 金属 、 砷 盐 、 特 殊 要 求 （ 不 溶 性 微 粒、 细 菌 内 毒 素 /热 原 、 异 常 毒 性 、 无菌 等 ） 等 。 吸 光 度 、 有 关 物 质 （ 高 聚 物 ） 、 水 分/干 燥 失 重 、 装 量 /重 量 。与 剂 型 相 关 的 检 查 项 目 ：片 剂 ： 崩 解 时 限 、 溶 出 度 等 。注 射 剂 ： 可 见 异 物 、 不 溶 性 微 粒 （ 静脉 ） 、 细 菌 内 毒 素 /热 原 、 无 菌 等 。 质量标准项目 项目原料制剂检查胶 囊 剂 ： 崩 解 时 限 、 溶 出 度 等 。溶 液 剂 、 膏 剂 、 糊 剂 ： 粒 度 、 沉 降 体 积比 （ 混 悬 液 ） 、 乳 化 稳 定 性 （ 乳 化 外 用液 体 制 剂 ） 、 微 生 物 限 度 。可 溶 性 粉 ： 溶 解 性 。颗 粒 剂 ： 溶 化 性 。栓 剂 ： 融 变 时 限 。缓 释 、 控 释 制 剂 ： 释 放 度 。含 量 均 匀 度 ： 主 药 含 量 较 低 者 。含量测定容 量 法 、 色 谱 法 （ HPLC、GC、 微 生 物 检 定 法 ） 容 量 法 、 色 谱 法 （ HPLC、 GC、 微 生 物 检定 法 ）1、 项 目 设 定 ： 既 要 设 置 通 用 性 项 目 ， 又 要 设 置 针 对 性 项 目 。 限 度 确 定 原 则 ：l 从 药 物 的 安 全 性 、 有 效 性 出 发 。 杂 质 控 制 （ 结 合 药 理 毒 理 试 验 ） 。 注 射 液 的 pH值 （ 如 恩 诺 沙 星 注 射 液 的 pH值 ： 9.510.5） 。l 药 典 附 录 的 一 般 规 定 。 残 留 溶 剂 的 限 度 规 定 。l 国 内 外 药 典 对 该 药 的 控 制 限 度 。 国 外 已 有 原 料 ： 盐 酸 沃 尼 妙 林 的 限 度 。 l 明 确 成 盐 形 式 和 比 例 ： 亚 甲 基 水 杨 酸 杆 菌 肽l 确 定 水 合 物 的 结 合 形 式 ： 利 用 TG、 DSC综 合 判 断 水 分l 多 晶 型 /有 效 晶 型 的 确 定 ： 同 一 药 物 的 不 同 晶 型 在 外 观 、 溶 解 度 、 熔 点 、 溶 出 度 、 生 物 有 效性 等 方 面 可 能 会 有 显 著 不 同 ， 影 响 了 药 物 的 稳 定 性 、 生 物 利 用 度及 疗 效 。 尤 其 是 难 溶 性 固 体 药 物 。 通 过 对 美 国 药 典 (20 版 )片 剂 样 品 统 计 ， 大 约 有 40 的 药 物 存 在 多 晶型 现 象 。 在 进 行 一 般 要 求 的 各 项 测 试 基 础 上 ， 应 以 适 当 方 法 获 得 药 物 晶 型 数 据I. 单 晶 X-衍 射 共 认 的 最 可 靠 的 方 法II. 粉 末 X-衍 射 常 用 方 法III.红 外 吸 收 光 谱IV.熔 点V. 热 分 析VI.光 学 显 微 镜VII.药 物 晶 型 测 定 常 用 方 法 ：VIII.辅 助 性 方 法 通 过 试 验 确 认 有 效 晶 型 确 定 合 适 的 工 艺 保 证 原 料 和 制 剂 产 品 中 为 有 效 晶 形 。 -从 而 确 定 原 料 合 成 、 提 取 和 制 剂 生 产 过 程 中 各 生 产 工 艺 控 制 参 数 。 例 ： XXX企 业 的 “ 蒙 脱 石 粉 ” 主 要 成 分 为 双 四 面 体 氧 化 硅 单 八 面 体 氧 化 铝 组 成 的 多 层 结 构 单 斜 晶 系 l 药 品 组 成 成 分 确 定活 性 组 分 的 控 制 ， 如 庆 大 霉 素 等 多 组 分 控 制例 ： 维 吉 尼 亚 霉 素 组 分 控 制 主 要 由 M和 S两 种 成 分 组 成 ， M-作 用 于 金 黄 色 葡 萄 球 菌 S-作 用 于 枯 草 杆 菌 在 一 定 比 例 下 活 性 作 用 最 强 。申 报 时 要 求 增 加 ： 组 分 控 制 l 重 视 有 关 物 质 的 研 究 确 定 杂 质 来 源 ： 生 产 引 入 的 起 始 物 料 、 中 间 产 物 、 降 解 产 物 和 发酵 /合 成 中 产 生 的 其 他 产 物 等 。 结 构 确 定 兽 药 杂 质 分 析 指 导 原 则 规 定 ： 对 于 表 观 含 量 在 0.1%及 其 以 上 的 杂 质 以 及 表 观 含 量 在 0.1%以 下 的 具强 烈 生 物 作 用 的 杂 质 或 毒 性 杂 质 ， 予 以 定 性 或 确 定 其 结 构 。 限 度 制 定 应 有 依 据 二 类 以 下 新 药 可 参 考 国 际 同 类 药 物 限 度 标 准 ， 原 则 上 不 得 低 一 类 新 药 或 限 度 高 于 同 类 药 物 ， 应 对 杂 质 进 行 安 全 性 评 价 。 ICH Threshholds for degradation productsl maximum Dailly Dose Reporting Thresholds 1 g 0 .0 5 %l maximum Dailly Dose Identification Thresholds 1 0 mg2 g 0 .2 % or 2 mg TDI 2 g 0 .1 0 %l maximum Dailly Dose Qualification Thresholds 1 0 0 mg2 g 0 .2 %or3 mg TDI 2 g 0 .1 5 % TDI: total Dailly Intake 选 择 适 宜 方 法 ： 灵 敏 、 专 一 、 简 便 为 原 则 。 常 用 HPLC法 ， 其 次 TLC、 GC、 容 量 分 析 法 等 。 定 量 方 法 ： 已 知 杂 质 对 照 品 法 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法 不 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法 注 意 ： 新 药 评 审 中 确 定 杂 质 是 主 流 方 向 方 法 学 验 证 有关物质研究常见问题：分 离 度 验 证 不 充 分 ： 破 坏 性 试 验 因 素 不 全 ， 常 忽 略 对 光 和 氧 化 杂 质 的分 离 考 察 。 缺 少 针 对 性 ： 对 工 艺 和 结 构 相 关 的 基 本 分 析 不 足 ， 对 杂 质 的 结 构 分 析极 为 薄 弱 。 简 单 控 制 单 一 未 知 杂 质 和 总 杂 质 。 例 ： 头 孢 噻 呋 注 射 液 -国 内 仿 制 国 外 药 物 ， 有 关 物 质 控 制 问 题 很 多 ， 有 些 申 报 企 业 为 此 补 充 3次 资 料 ， 确 定 有 关 物 质 方 法 。未 结 合 稳 定 性 试 验 ： 对 放 置 后 出 现 的 降 解 产 物 分 析 控 制 不 够 。 方 法 选 择 不 合 适 ： 简 单 选 用 含 量 测 定 项 下 的 色 谱 图 进 行 归 一 化 法 计 算， 无 法 对 杂 质 正 确 定 量 。 杂 质 名 相 对 保 留 时间 响 应 因 子 进 口 质 量 标 准 响应 因 子 进 口 质 量 标 准 限度 规 定2 糠 酸2-Furoic Acid 0.11 2.49 / /内 酯 Lactone 0.3-0.5 1.01 / /头 孢 噻 肟 Cefotaxime 0.68 0.81 / /Unidentified HW=537 0.84 1.00 1.4 不 得 过 0.4%4-酮 基 头 孢 噻 呋 4-keto ceftiofur 0.92 1.00 1.3 不 得 过 0.5% -3-顺 式 肟 Delta-3-syn-oxime 0.95 0.89 0.8 不 得 过 0.3% -3-反 式 肟 Delta-3-anti-oxime 1.08 0.90 0.9 不 得 过 3.0%总 杂 质 / / 以 上 4种 杂 质 总量 ， 不 得 过 3.5% l应充分体现药品的剂型特点与 剂 型 相 关 的 检 查 项 目 ：片 剂 ： 崩 解 时 限 、 溶 出 度 等 。注 射 剂 ： 可 见 异 物 、 不 溶 性 微 粒 （ 静 脉 ） 、 细 菌 内 毒 素 /热 原 、 无 菌 等 。胶 囊 剂 ： 崩 解 时 限 、 溶 出 度 等 。溶 液 剂 、 膏 剂 、 糊 剂 ： 粒 度 、 沉 降 体 积 比 （ 混 悬 液 ） 、 乳 化 稳 定 性 （ 乳 化 外用 液 体 制 剂 ） 、 微 生 物 限 度 。可 溶 性 粉 ： 溶 解 性 。颗 粒 剂 ： 溶 化 性 。栓 剂 ： 融 变 时 限 。缓 释 、 控 释 制 剂 ： 释 放 度 。 溶出度/释放度试验 检 测 ： UV、 HPLC、 衍 生 化 比 色 法 等 取 样 ： 常 释 制 剂 30 45分 钟 单 点 取 样 检 测 肠 溶 制 剂 ： 两 点 取 样 ， 酸 中 2小 时 后 改 用 缓 冲 液 缓 控 释 制 剂 释 放 度 检 查 一 般 不 少 于 三 点 ： 第 一 点 释 药 约 20-30 ， 控 制 药 物 有 无 突 释 ； 第 二 点 释 药 约 50 ， 体 现 制 剂 的 释 药 特 性 ； 第 三 点 释 药 80 以 上 ， 控 制 药 物 释 放 完 全 。 合 理 选 择 方 法 、 设 定 条 件 片 剂 一 般 采 用 浆 法 ； 胶 囊 剂 等 漂 浮 的 制 剂 多 用 篮 法 。 溶 出 介 质 ： 首 选 水 ， 0.1mol/L HCl、 缓 冲 液 （ pH38)， 必 要 时可 加 入 适 量 有 机 溶 剂 （ 醇 ） 或 表 面 活 性 剂 ， 应 经 试 验 筛 选 并 尽 量采 用 较 低 的 浓 度 。 转 速 应 经 筛 选 确 定 ， 不 宜 过 快 。 释 放 度 条 件 应 有 一 定 区 分 能 力 ， 能 区 分 由 于 生 产 中 关 键 参 数 的 改变 而 可 能 影 响 到 生 物 利 用 度 不 同 产 品 ， 又 不 能 过 于 敏 感 ， 以 至 于微 小 的 变 化 均 被 视 为 不 同 。 溶 出 度 /释 放 度 的 验 证 条 件 和 限 度 的 合 理 性 ： 考 察 不 同 处 方 在 不 同 溶 出 /释 放 条 件 下 溶 出/释 放 行 为 的 差 异 进 行 验 证 ， 可 有 效 区 分 不 同 产 品 的 质 量 。 溶 出 /释 放 条 件 的 耐 受 性 ： 溶 出 /释 放 条 件 的 微 小 改 变 测 定 方 法 的 方 法 学 验 证 ： 注 意 还 应 考 虑 主 药 在 溶 出 /释 放 介 质 中 的稳 定 性 、 最 佳 取 样 量 、 滤 器 的 性 质 及 对 有 效 成 分 的 吸 附 。 需 绘 制 完 整 的 溶 出 /释 放 曲 线 ： 包 括 上 升 曲 线 及 达 到 平 台 的 阶 段 。 l 无 菌 /微 生 物 限 度 检 查 供 试 品 处 理 方 法 不 知 。 验 证 是 薄 弱 环 节 。 无 菌 检 查 ： 每 一 供 试 菌 的 验 证 。 细 菌 、 霉 菌 、 酵 母 菌 计 数 方 法 的 验 证 ： 至 少 应 进 行 3次 独 立 的 平行 试 验 ， 分 别 计 算 各 试 验 菌 每 次 试 验 的 回 收 率 。 试 验 分 试 验 组、 菌 液 组 、 稀 释 剂 对 照 组 、 供 试 品 对 照 组 。 控 制 菌 检 查 法 的 验 证 ： 大 肠 菌 群 、 大 肠 埃 希 菌 、 金 黄 色 葡 萄 球 菌、 沙 门 菌 、 铜 绿 假 单 胞 菌 等 。 1、 目 前 评 审 资 料 中 存 在 的 问 题（ 1） 检 测 项 目 不 全 ： 熔 点 、 有 关 物 质 、 沉 降 体 积 比 等 。（ 2） 项 目 下 无 具 体 内 容 表 述 ： 无 菌 、 微 生 物 限 度 ， 无 可 操 作 性 。 如 x注 射 液 （ 无 菌 ） ： 应 符 合 注 射 剂 项 下 有 关 的 各 项 规 定 。 实 际 测 定 方 法 ： 取 样 量 8瓶 、 稀 释 、 加 酶 等 过 程 。 正 确 表 述 ： 取 本 品 8瓶 ， 混 匀 ， 全 部 转 移 至 400ml的 含 6 聚 山 梨酯 80的 pH7.0氯 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 中 ， 摇 匀 ， 加 青 霉 素 酶 800 106单 位， 充 分 振 摇 ， 在 37 倒 置 反 应 4小 时 后 ， 依 法 检 查 （ 附 录 121页 ， 直 接 接种 法 ） ， 应 符 合 规 定 。（ 3） 进 口 注 册 中 ： 企 业 内 控 标 准 与 注 册 标 准 不 一 致 。 1、 目 前 评 审 资 料 中 存 在 的 问 题（ 4） 标 准 内 容 格 式 和 表 述 不 规 范 ！ -以 后 评 审 中 退 回 标 准 。 影 响 复 核 检 验 时 间 。 （ 5） 企 业 标 准 前 后 不 一 致 -核 对 不 仔 细 ！ 如 ： 有 关 物 质 对 照 品 检 验 时 发 现 稀 释 体 积 10 100。 提 交 复 审 的 标 准 竟 然 不 是 复 核 检 验 标 准 。 结 果 ： 重 新 提 供 标 准 再 上 评 审 后 评 审 后 ， 重 新 复 核 检 验 。 2、 标 准 编 写 格 式 ： 现 版 兽 药 典 /中 国 药 典 格 式 参 考 书 ： 中 国 兽 药 典 工 作 手 册 、 中 国 兽 药 典 、 中 国 药 典 要 求 ： 从 检 测 项 目 的 排 序 、 到 内 容 的 完 整 性 、 语 言 表 述 的 规 范 性 均 需 跟 药 典 一 致 。 1、 正 文 的 构 成 及 编 排 顺 序 （ 1） 兽 药 名 称 中 文 名 -四号黑体、 汉 语 拼 音 名 /英 文 名 -小 四 Times New Roman （ 2） 化 学 结 构 式 （ 3） 分 子 式 及 分 子 量 -五 号l 凡 组 成 明 确 的 单 一 化 合 物 及 主 成 分 明 确 的 多 组 分 抗 生 素 ， 均应 列 出 分 子 式 。 混 合 物 或 组 成 不 固 定 者 ， 一 般 不 列 分 子 式 和 分子 量 。l 如 吉 他 霉 素 有 A 1、 A3、 A4、 A5、 A6、 A7、 A8、 A9和 A13。 原料质量标准的制订 （ 4） 来 源 或 化 学 名 称 ， 含 量 /效 价 的 限 度 规 定 （ 正 文 五 号 宋 体 ， 检 测 项 目 为 黑 体 ， 1.5倍 行 距 ） 。l 药 物 是 由 某 种 动 、 植 物 提 取 得 到 的 某 一 物 质 ， 应 说 明 来 源 。 胃 蛋 白 酶 ： 本 品 系 自 猪 、 羊 或 牛 的 胃 黏 膜 中 提 取 制 得 的 胃 蛋 白 酶 。 l 化 学 结 构 确 定 而 名 称 不 很 复 杂 的 药 品 均 应 写 出 化 学 命 名 。 根 据 中 国 化 学 会 编 化 学 命 名 原 则 最 新 版 本 命 名 。l 含 量 限 度 列 在 来 源 或 化 学 命 名 后 面 ， 为 了 正 确 反 映 药 品 的 含 量 ， 一般 按 干 燥 品 /无 水 物 ， 有 时 还 按 无 残 留 溶 剂 计 算 。 原料质量标准的制订 （ 5） 性 状l -药 品 的 外 观 、 臭 、 味 和 一 般 稳 定 情 况 的 表 述 。 色 ： 白 类 白 微 黄 淡 黄 浅 黄 黄 ， 无 明 显 界 定 的 两 色 间 用 “ 至 ” （ to)表 示 范 围 ； 呋 塞 米 ： 本 品 为 白 色 或 类 白 色 的 结 晶 性 粉 末 ； 无 臭 ， 几 乎无 味 。l -溶 解 度 ： 不 列 小 标 题 ， 在 性 状 之 下 作 为 第 二 个 自 然 段 。 溶 剂 品 种 的 选 择 ： 应 尽 量 选 用 与 该 药 品 溶 解 特 性 密 切 相 关， 配 制 制 剂 、 制 备 溶 液 或 精 制 操 作 所 需 用 的 常 用 溶 剂 。 顺 序 ： 按 溶 解 度 大 小 依 次 排 列 ； 溶 解 度 相 似 的 按 溶 剂 的 极 性 大 小 ； 在 酸 或 碱 中 的 溶 解 度 放 在 最 后 ， 最 好 注 明 浓 度 。原料质量标准的制订 （ 5） 性 状 阿 苯 达 唑 ： 在 丙 酮 或 三 氯 甲 烷 中 微 溶 ， 在 乙 醇 中 几 乎 不 溶 ， 在 水 中不 溶 ； 在 冰 醋 酸 中 分 解 。 土 霉 素 ： 本 品 在 乙 醇 中 微 溶 ， 在 水 中 极 微 溶 解 ； 在 氢 氧 化 钠 试 液 和稀 盐 酸 中 溶 解 。l -物 理 常 数 ： 相 对 密 度 ： 本 品 相 对 密 度 为 0.845 0.890（ 附 录 页 ） 。 熔 点 ： 本 品 的 熔 点 （ 附 录 页 ） 为 168 172 。 比 旋 度 ： 附 录 的 计 算 公 式 下 已 注 明 “ 按 干 燥 品 或 无 水 物 计 算 ” ， 正文 中 可 不 必 写 出 。 阿 莫 西 林 ： 取 本 品 ， 精 密 称 定 ， 加 水 溶 解 并 定 量 稀 释 制 成 每 1ml中 约含 2mg的 溶 液 ， 依 法 测 定 （ 附 录 页 ） ， 比 旋 度 为 +290 至 315 。原料质量标准的制订 （ 6） 鉴 别鉴 别 试 验 是 指 用 理 化 方 法 或 生 物 学 方 法 来 证 明 已 知 药 品 真 实 性的 方 法 。要 求 ： 专 属 性 强 、 重 现 性 好 、 灵 敏 度 高 . 注 意 操 作 简 便 、 快 速 等 。 一 般 用 2-4条 ， 能 证 明 其 真 实 性 即 可 。原料质量标准的制订 6.1测 定 生 成 物 的 熔 点 ： 操 作 繁 琐 ， 尽 量 少 用 。 标 准 中 具 体 叙 述 取 样 量 、 试 剂 用 量 和 操 作 方 法 ， 熔 点 /熔 距 。6.2特 征 反 应 ： 包 括 药 品 的 显 色 、 沉 淀 反 应 或 其 他 化 学 反 应 等 。 应 选 用 反 应 明 显 、 专 属 性 较 强 的 方 法 ， 并 对 方 法 的 取 用 量 、 操作 注 意 事 项 和 应 观 察 到 的 现 象 有 明 确 的 叙 述 。 例 ： 取 本 品 约 0.5mg， 加 硫 酸 2ml， 即 显 朱 红 色 。 取 本 品 适 量 （ 约 相 当 于 磺 胺 甲 噁 唑 0.1g） ， 加 稀 盐 酸 5 7ml使 成酸 性 ， 缓 缓 加 热 数 分 钟 ， 冷 却 ， 滤 过 ， 滤 液 加 0.1mol/L亚 硝 酸 钠 溶液 4ml， 用 水 稀 释 成 10ml， 加 碱 性 -萘 酚 试 液 2ml， 即 生 成 橙 红 色 沉淀 。原料质量标准的制订 6.3色 谱 法 ： 一 般 采 用 与 对 照 品 （ 或 标 准 品 ） 在 相 同 条 件 下 进 行 色 谱 分 离 并 进 行比 较 ， 要 求 其 保 留 行 为 和 检 测 结 果 都 相 互 一 致 ， 作 为 鉴 别 药 品 真 伪 的 验 证 。薄 层 色 谱 法 ： 取 本 品 与 XXX对 照 品 ， 分 别 加 水 溶 解 并 稀 释 制 成 每 1ml中 含 4mg的溶 液 ， 照 薄 层 色 谱 法 （ 附 录 页 ） 试 验 ， 吸 取 上 述 两 种 溶 液 各 5l， 分 别 点 于 同 一硅 胶 G薄 层 板 上 ， 展 开 后 ， 以 甲 醇 -三 氯 甲 烷 -水 -吡 啶 （ 90:80:30:10） 为 展 开 剂 ，展 开 后 ， 取 出 ， 晾 干 ， 置 碘 蒸 气 中 显 色 ， 供 试 品 溶 液 所 显 主 斑 点 的 位 置 和 颜 色应 与 对 照 品 溶 液 主 斑 点 的 位 置 和 颜 色 相 同 。 HPLC/GC法 ： 以 其 主 峰 的 保 留 时 间 与 对 照 品 比 较 作 为 鉴 别 ， 此 类 品 种 一 般 在 含量 测 定 项 下 已 采 用 了 该 方 法 。 在 含 量 测 定 项 下 记 录 的 色 谱 图 中 ， 供 试 品 溶 液 主 峰 的 保 留 时 间 应 与 对 照 品 溶 液主 峰 的 保 留 时 间 一 致 。原料质量标准的制订 6.4 UV吸 收 光 谱 特 征 ： 采 用 在 指 定 的 溶 剂 （ 常 用 的 为 0.1mol/L盐 酸 溶 液 、 0.1mol/L氢 氧 化 钠 溶 液 、 水 、 乙 醇 或 无 水 乙 醇 ） 中 ， 测 定 2 3个 特 定 波 长（ 排 列 顺 序 由 小 到 大 ） 处 的 吸 收 度 值 ； 为 使 方 法 更 为 严 谨 ， 最 好在 文 字 叙 述 中 明 确 测 定 波 长 的 范 围 。 测 定 最 大 吸 收 波 长 或 同 时 测 定 最 小 吸 收 波 长 ； 有 肩 峰 ， 也 可加 以 描 述 ： 取 本 品 ， 加 水 制 成 每 1ml中 约 含 0.1mg的 溶 液 ， 照 紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 （ 附 录 页 ） 测 定 ， 在 268nm与 275nm的 波 长 处 有最 大 吸 收 。原料质量标准的制订 规 定 一 定 浓 度 时 供 试 溶 液 在 最 大 吸 收 波 长 处 的 吸 光 度 。 规 定 两 个 或 两 个 以 上 波 长 处 吸 光 度 比 值 ： 如 峰 值 与 峰 值 比 或 峰值 与 谷 值 比 。 氯 羟 吡 啶 ： 取 含 量 测 定 项 下 的 溶 液 ， 照 紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 （附 录 23页 ） 测 定 ， 在 249nm的 波 长 处 有 最 大 吸 收 ， 在 235nm的 波 长 处有 最 小 吸 收 ， 在 249nm与 235nm波 长 处 的 吸 光 度 比 值 应 为 1.50 1.58。原料质量标准的制订 6.5 IR吸 收 光 谱 ： 采 用 与 对 照 图 谱 进 行 比 较 的 方 法 用 于 鉴 别 组 分 单一 、 结 构 明 确 的 原 料 药 。 对 于 具 有 同 质 异 晶 现 象 的 药 品 ， 应 选 用有 效 晶 型 的 图 谱 ， 晶 型 不 一 致 需 要 转 晶 的 ， 应 规 定 转 晶 条 件 。例 ： 本 品 的 红 外 光 吸 收 图 谱 应 与 对 照 品 的 图 谱 一 致 。6.6 离 子 反 应 ： 常 用 的 酸 根 和 盐 基 的 鉴 别 方 法 已 收 载 于 CVP附 录 “一 般 鉴 别 试 验 ” 中 ， 可 以 直 接 引 用 附 录 ， 不 必 重 复 叙 述 操 作 方 法； 仅 选 用 某 一 试 验 方 法 时 ， 应 在 叙 述 中 加 以 明 确 ； 供 试 品 如 需 处理 ， 应 先 叙 述 处 理 方 法 ， 而 后 引 用 附 录 。例 ： 本 品 的 水 溶 液 显 氯 化 物 的 鉴 别 反 应 （ 附 录 页 ） 。 本 品 显 钠 盐 鉴 别 （ 1） 的 反 应 （ 附 录 页 ） 。原料质量标准的制订 （ 7） 检 查该 项 的 目 的 是 检 查 某 药 品 按 既 定 工 艺 进 行 生 产 和 正 常 贮 藏 过 程 中 可 能含 有 或 产 生 并 需 要 控 制 的 杂 质 ； 其 项 目 的 确 定 既 要 考 虑 影 响 药 品 有 效性 、 安 全 性 等 因 素 ， 又 要 根 据 生 产 方 式 及 贮 藏 中 可 能 生 成 的 副 产 物 、引 入 的 杂 质 和 分 解 产 物 等 因 素 有 针 对 性 的 预 以 规 定 。所 有 检 查 项 目 均 要 列 了 小 标 题 ， 采 用 黑 体 字 ， 并 扼 要 反 映 检 查 内 容 。7.1 酸 度 、 碱 度 或 酸 碱 度 标 题 名 称 ： pH值 7.0， 用 “ 酸 度 ” 表 示 ； 7.0上 下 ， 用 酸 碱 度 表 示 。 注 意 概 念原料质量标准的制订 供 试 品 取 量 （ 或 供 试 品 的 浓 度 ） 、 pH值 均 应 保 留 2位 有 效 数 字 。溶 解 供 试 品 的 水 ， 在 凡 例 或 附 录 中 已 有 明 确 规 定 ， 正 文 中 可 不 再叙 述 。例 ： 酸 度 取 本 品 0.1g， 加 水 10ml溶 解 后 ， 依 法 测 定 （ 附 录 页 ） ,pH值 应 为 4.0 5.0。7.2 溶 液 的 澄 清 度 与 颜 色溶 液 的 澄 清 度 是 指 以 水 为 溶 剂 ， 制 成 一 定 浓 度 的 溶 液 后 ， 与 浊 度标 准 液 比 较 。 如 用 酸 性 溶 液 、 碱 性 溶 液 或 有 机 溶 剂 制 备 供 试 液 进行 检 查 的 ， 称 为 XX溶 液 的 澄 清 度 。原料质量标准的制订 溶 液 的 颜 色 是 指 以 水 为 溶 剂 ， 并 与 标 准 比 色 液 比 较 或 在 可 见 光 波长 范 围 内 测 定 吸 光 度 ； 液 体 药 品 直 接 检 查 的 称 “ 颜 色 ” ； 如 用 酸性 溶 液 、 碱 性 溶 液 或 有 机 溶 剂 制 备 供 试 液 ， 称 为 XX溶 液 的 澄 清 度与 颜 色 。溶液的澄清度与颜色与产品的纯度与工艺有关。例 ： 溶 液 的 澄 清 度 与 颜 色 取 本 品 0.5g， 加 水 20ml与 氢 氧 化 钠 试 液3ml溶 解 ， 溶 液 应 澄 清 无 色 ； 如 显 浑 浊 ， 与 1号 浊 度 标 准 液 （ 附 录 页 ） 比 较 ， 不 得 更 浓 ； 如 显 色 ， 与 黄 色 3号 标 准 比 色 液 （ 附 录 页） 比 较 ， 不 得 更 深 。原料质量标准的制订 7.3 无 机 阴 离 子 ： 氯 化 物 、 硫 酸 盐 、 硫 化 物 等 。 除 另 有 规 定 外 ， 应 尽 可 能 采 用 附 录 中 的 方 法 ， 并 注 明 是 第 几 法， 需 要 进 行 预 处 理 的 ， 要 详 述 其 方 法 并 与 附 录 衔 接 。 在 附 录 中 没 有无 机 阴 离 子 的 检 查 方 法 ， 需 在 正 文 中 详 述 。 原料质量标准的制订 7.4 有 机 杂 质命 名 ： 检 查 对 象 为 明 确 的 某 一 物 质 时 ， 即 以 该 杂 质 的 名 称 为 标 题。 如 “ 林 可 霉 素 B” ； 不 能 明 确 为 某 一 单 一 物 质 ， 仅 知 为 某 一 类 物质 时 ， 标 题 可 定 为 “ 有 关 物 质 ” 、 “ 芳 香 第 一 胺 ” “ 杂 质 吸 光 度” 。 注 意 ： 该 项 目 写 法 与 含 量 测 定 项 下 的 写 法 不 同 ； 顺 序 ： 供 试 品 溶 液 和 对 照 溶 液 或 对 照 品 溶 液 的 制 备 方 法 、 色 谱条 件 、 记 录 色 谱 图 时 间 、 色 谱 要 求 、 进 样 和 计 算 。原料质量标准的制订 有关物质 取 本 品 约 0.2g， 精 密 称 定 ， 置 50ml量 瓶 中 ， 加 乙 腈 10ml超 声 处 理 使 溶 解 ， 用 稀释 液 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 作 为 供 试 品 溶 液 ； 取 替 米 考 星 对 照 品 适 量 ， 精 密 称 定 ， 加 乙 腈 制 成每 1ml中 含 0.25mg的 溶 液 ， 精 密 量 取 5ml， 置 25ml量 瓶 中 ， 用 稀 释 液 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 作 为 对照 品 溶 液 。 照 高 效 液 相 色 谱 法 （ 附 录 页 ） 试 验 ， 用 十 八 烷 基 硅 烷 键 合 硅 胶 为 填 充 剂 ； 以 水 -磷 酸 二 丁 胺 缓 冲 液 （ 975:25） 为 流 动 相 A， 以 乙 腈 为 流 动 相 B； 按 下 表 进 行 梯 度 洗 脱 ； 检 测 波长 为 280nm。 流 速 为 每 分 钟 1.1ml。 替 米 考 星 反 式 异 构 体 （ 两 个 不 完 全 分 开 的 峰 ） 的 相 对 保 留 时间 为 0.8， 替 米 考 星 顺 式 异 构 体 的 相 对 保 留 时 间 为 1.0， 替 米 考 星 顺 式 -8-差 向 异 构 体 的 相 对 保留 时 间 为 1.2。 （ 梯 度 洗 脱 程 序 可 根 据 替 米 考 星 主 峰 的 保 留 时 间 进 行 调 整 ， 使 色 谱 图 记 录 时 间为 替 米 考 星 顺 式 异 构 体 峰 保 留 时 间 的 2倍 ） ； 理 论 板 数 按 替 米 考 星 顺 式 峰 计 算 应 不 低 于 3000，替 米 考 星 的 顺 式 和 反 式 异 构 体 峰 之 间 的 分 离 度 应 符 合 要 求 。 精 密 量 取 供 试 品 溶 液 溶 液 与 对 照 品溶 液 各 10l分 别 注 入 液 相 色 谱 仪 ， 记 录 色 谱 图 。 供 试 品 溶 液 的 色 谱 图 中 （ 除 顺 式 、 反 式 和 顺 - 8-差 向 异 构 体 外 ） 如 有 杂 质 峰 ， 按 下 式 以 无 水 物 计 算 ， 单 个 杂 质 不 得 过 3.0%， 各 杂 质 的 和 不 得过 10.0% 。 供 试 品 溶 液 色 谱 图 中 任 何 小 于 对 照 品 溶 液 顺 式 异 构 体 峰 面 积 0.01倍 的 峰 可 忽 略 不 计 。 原料质量标准的制订 7.6 干 燥 失 重 与 水 分 两 者 不 同 “ 干 燥 失 重 ” 指 按 照 附 录 方 法 ， 在 规 定 的 条 件 下 ， 测 定 药 品 中 所 能 被 驱出 的 挥 发 性 物 质 、 既 包 括 水 ， 也 包 括 其 他 挥 发 性 物 质 。 取 样 量 ， 附 录 规 定 为 1g， 标 准 中 不 再 作 规 定 。 “ 水 分 ” 指 用 附 录 方 法 （ 主 要 是 第 一 法 ） 测 得 药 品 中 的 残 留 水 和 结 晶 水的 总 和 ， 但 不 包 括 挥 发 性 物 质 。 一 般 不 必 写 出 取 样 量 （ 需 处 理 时 例 外 ） 。 方 法 选 择 ， 根 据 药 品 的 热 稳 定 性 及 其 物 理 性 质 而 定 。 限 度 范 围 ： 根 据 样 品 情 况 ， 保 证 样 品 的 稳 定 性 。 一 般 仅 规 定 高 限 ， 如 含有 结 晶 水 ， 并 因 风 化 失 水 过 多 会 影 响 用 药 剂 量 时 ， 应 制 订 高 低 限 度 范 围 。 标 准 中 应 说 明 测 定 条 件 ， 如 温 度 、 干 燥 剂 、 干 燥 时 间 等 。原料质量标准的制订 7.7 炽 灼 残 渣 、 重 金 属 、 砷 盐 一 般 采 用 附 录 中 规 定 的 方 法 。 一 般 取 样 量 为 1g， 限 量 为 0.1%。 残 渣 测 定 常 与 重 金 属 和 砷 盐 相 联 系 ， 此 时 可 根 据 情 况 定 量 。 重 金 属 和 砷 盐 检 查 项 目 可 根 据 工 艺 来 确 定 ， 工 艺 中 如 有 可 能 引 入 此 物 质， 可 进 行 规 定 。 例 ： 炽 灼 残 渣 取 本 品 1g， 依 法 检 查 （ 附 录 页 ） ， 遗 留 残 渣 不 得 过 0.1%。 重 金 属 取 炽 灼 残 渣 项 下 遗 留 的 残 渣 ， 依 法 检 查 （ 附 录 页 第 法 ） ， 含 重金 属 不 得 过 百 万 分 之 二 十 。 有 机 药 物 的 砷 检 查 要 求 在 引 用 附 录 前 叙 述 供 试 液 的 制 备 方 法 ， 根 据 限 度提 供 取 样 量 及 供 试 液 的 制 备 方 法 。 需 有 机 破 坏 后 进 行 砷 检 查 的 ， 应 在 正 文 中 注 明 方 法 。 原料质量标准的制订 （ 8） 含 量 测 定 方 法 选 择 ： HPLC法 是 主 导 测 定 方 法 ,多 组 分 抗 生 素 和 激 素 等 采 用 效 价 法 , 容 量 分 析 法 、 重 量 分 析 法 、 紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 、 气 相 色 谱 法 等 。 【 含 量 测 定 】 照 高 效 液 相 色 谱 法 （ 附 录 页 ） 测 定 。 色 谱 条 件 与 系 统 适 用 性 试 验 用 十 八 烷 基 硅 烷 键 合 硅 胶 为 填 充 剂 ； 以 醋 酸铵 溶 液 （ 取 醋 酸 铵 3.85g， 加 10%四 丁 基 氢 氧 化 铵 13.5ml， 加 水 至 700ml， 用 冰 醋酸 调 节 pH值 至 6.6 6.8） 甲 醇 四 氢 呋 喃 （ 700:200:110） 为 流 动 相 ； 检 测 波长 为 254nm。 理 论 板 数 按 头 孢 噻 呋 峰 计 算 ， 应 不 低 于 1500。 测 定 法 取 本 品 适 量 ， 精 密 称 定 ， 加 流 动 相 溶 解 并 稀 释 至 每 1ml中 约 含 头 孢噻 呋 0.1mg的 溶 液 ， 立 即 精 密 量 取 20l， 注 入 液 相 色 谱 仪 ， 记 录 色 谱 图 ； 另 取对 照 品 适 量 ， 同 法 测 定 。 按 外 标 法 以 峰 面 积 计 算 ， 即 得 。 基 本 同 原 料 ， 但 又 有 所 不 同 。l 命 名 ： 单 方 制 剂 原 料 名 +剂 型 名 长 效 头 孢 噻 呋 注 射 液 复 方 制 剂 药 名 全 称 +剂 型 名 （ 中 间 不 加 、 ） 复 方 +主 药 名 +剂 型 名 或 几 个 药 名 减 缩 +剂 型 名 （ 安 钠 咖 注 射 液 ）制剂质量标准的制订 l 来 源 /含 量 限 度 注 射 剂 、 预 混 剂 、 粉 剂 等 主 要 写 明 来 源 ， 说 明 所 用 辅 料 。 片 剂 、 复 方 制 剂 必 要 时 简 述 制 法 。 -注 意 灭 菌 和 无 菌 的 区 别 标 准 中 有 “ 规 格 ” 项 的 ， 含 量 限 度 按 标 示 量 计 算 ； 有 “ 处 方 ” 或 无 “ 规 格 ” 项 的 ， 规 定 实 际 含 有 量 或 其 百 分 浓 度 范 围 ； 粉 针 按 平 均 装 量 计 算 。 含 量 限 度 范 围 主 要 根 据 剂 型 、 主 药 含 量 、 原 料 药 的 含 量 限 度 、 制 剂 的稳 定 性 、 测 定 方 法 的 误 差 综 合 考 虑 。制剂质量标准的制订 制剂质量标准的制订 l 规 格 每 一 制 剂 单 位 中 含 有 主 药 的 量（ 1） 按 有 效 成 分 计 算 时 ， 以 分 子 式 表 示 ， 应 与 其 含 量 限 度 项 相 呼 应抗 生 素 若 按 效 价 计 ， 以 效 价 重 量 表 示 ， 并 在 括 号 内 注 明 单 位 。 0.25g（25万 单 位 ） （ 2） 规 格 在 0.1g以 下 的 用 mg为 单 位 表 示 ； 0.1g以 上 的 用 g为 单 位 表 示； 如 ： 50mg； 0.1g; （ 3） 多 种 规 格 的 单 位 统 一 用 小 的 表 示 ； 规 格 应 从 小 到 大 顺 序 排 列 。如 ： （ 1） 50mg (2) 100mg 制剂质量标准的制订 l 贮 藏 密 闭 ： 防 止 尘 土 及 异 物 进 入 。密 封 ： 防 止 风 化 、 吸 潮 、 挥 发 或 异 物 进 入 。冷 处 ： 2 10度 。阴 凉 处 ： 不 超 过 20度 。凉 暗 处 ： 避 光 并 不 超 过 20度 。应 根 据 药 品 性 状 并 结 合 稳 定 性 情 况 确 定 贮 藏 条 件 。 1. 检 测 项 目 放 置 位 置 和 顺 序 需 合 理 。2. 计 量 单 位 要 规 范 ： 如 ml、 L、 mg、 mg、 mol/L、 nm、 分 钟 、 每1ml中 约 含 1mg的 溶 液3. 术 语 要 规 范 ： 氢 氧 化 钠 试 液 、 稀 盐 酸 、 浓 氨 溶 液 、 三 氯 甲 烷、 乙 酸 乙 酯 、 醋 酸 铵 、 水 合 化 合 物 的 表 示 等 。4. 表 达 方 式 要 规 范 ： 规 范 写 法 ： 加 水 XXml 错 误 写 法 ： 加 入 XXml水 超 声 /振 摇 使 溶 解 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 定 容 以 水 -乙 腈 （ 5:8） 为 展 开 剂 滤 过 过 滤质量标准规范性小结 质量标准规范性小结 5 .供 试 品 取 样 量 ： 应 具 代 表 性 并 满 足 精 密 度 的 要 求 ； 制 剂 取 样 量 宜 按 规 格 所 用 成 分 来 表 达 ， 如 ： 取 本 品 细 粉 适 量 （ 约 相当 于 XXXX 25mg)， 精 密 称 定 。 该 表 述 方 法 可 适 用 于 多 规 格 的 产 品 。 标 准 规 范 性 的 关 键 ： 每 写 一 个 检 测 项 目 ， 都 可 在 药 典 上 找 到 相 应 的 范例 ， 逐 句 逐 字 （ 包 括 标 点 符 号 的 表 示 ） 都 应 一 致 。 质 量 标 准 的 语 言 表 达 方 式 是 有 固 定 格 式 的 ， 而 不 是 通 俗 化 写 法 。 l 简 述 该 产 品 的 生 产 工 艺 、 制 剂 处 方 ， 国 内 外 同 品 种 产 品 质 量 标 准 的 情况 和 参 考 依 据 。l 按 质 量 标 准 的 检 测 项 目 逐 项 说 明 标 准 制 订 的 理 由 ， 内 容 包 括 ： 说 明 测 定 方 法 的 原 理 ， 必 要 时 列 出 化 学 反 应 式 ； 方 法 学 验 证 内 容 和 结 果 ； 限 度 制 订 依 据 （ 结 合 工 艺 、 其 他 标 准 、 有 关 规 定 和 本 品 实 际 测 定结 果 综 合 说 明 ） 。l 可 列 出 参 考 文 献 总 的 来 说 ， 大 部 分 申 报 资 料 的 内 容 都 太 简 单 ： 对 参 考 的 国 内 外 同 品 种 产 品 质 量 标 准 的 情 况 无 任 何 交 代 。 不 说 明 测 定 方 法 （ 尤 其 是 化 学 反 应 鉴 别 ） 的 原 理 。 无 方 法 学 验 证 内 容 和 结 果 （ 包 括 图 谱 ） ； 无 限 度 制 订 依 据 （ 结 合 工 艺 、 其 他 标 准 、 有 关 规 定 和 本 品 实 际 测定 结 果 综 合 说 明 ） 。起 草 说 明 不 能 说 明 标 准 制 订 情 况 -评 审 要 求 重 新 提 供 起 草 说 明 。 标 准 品 、 对 照 品 系 指 用 于 鉴 别 、 检 查 、 含 量 或 效 价 测 定 的 标 准 物 质 。 标 准 品 -又 名 生 物 标 准 物 质 :系 指 用 于 生 物 检 定 、 抗 生 素 或 生 化 药 品 中 含 效 价测 定 的 标 准 物 质 ， 按 效 价 单 位 (或 g)计 ， 以 国 际 标 准 品 进 行 标 定 。 对 照 品 -又 名 化 学 对 照 物 质 :用 于 化 学 法 ， 如 滴 定 、 液 相 、 气 相 和 紫 外 等 方 法测 定 的 标 准 物 质 。l均 由 国 务 院 兽 医 行 政 管 理 部 门 指 定 的 单 位 制 备 、 标 定 和 供 应 。 组 成 分 析 理 论 值 分 析元 素 测 定 根 据 已 知 分 子 式 计 算 理 论 含量根 据 N,S元 素 测 定 结 果 ，推 测 纯 度有 机 成 分无 机 成 分 挥 发 性 物 质无 机 杂 质盐 、 酸 根 的 量 费 休 氏 法 ， 干 燥 失 重 ， TGA炽 灼 残 渣 ， TGA离 子 电 位 滴 定 法 纯 度 分 析 直 接 测 定 法间 接 测 定 法 DSC、 NMR、 HPLC ELSD归 一 化 法 、HPLC IR归 一 化 法有 机 杂 质 的 分 析与 测 定纯 度 的 测 定 TLC、 HPLC 不 同 的 检 测 器 联 用 、HPCEHPLC ELSD自 身 对 照 法质 量 平 衡 原 理 效 价 （ u/mg） (1 水 分 或 挥 发 性 物 质 残 留 溶 剂 残 渣 ) 纯 度 1000(u/mg) 含 量 （ ） =(1 水 分 或 挥 发 性 物 质 残 留 溶 剂 残 渣 ) 纯 度 HPLC、 GC外 标 法 含 量 确 定 薄 层 色 谱 法 其 他 方 法 ： 含 量 （ ） =(1 水 分 或 挥 发 性 物 质 残 留 溶 剂 残 渣 ) 纯 度 多个实验室合作定值 每 个 实 验 室 可 以 采 用 统 一 的 测 量 方 法 ， 也 可 以 选 该 实 验 室 确认 为 最 好 的 方 法 。 合 作 实 验 室 的 数 目 或 独 立 定 值 组 数 应 符 合 统 计 学 的 要 求 。 应有 3个 实 验 室 共 同 协 作 标 定 ， 每 个 实 验 室 提 供 2组 实 验 数 据 ，每 组 数 据 不 少 于 5个 。 定 值 负 责 单 位 必 须 对 参 加 实 验 室 进 行 质 量 控 制 和 制 订 明 确 的指 导 原 则 。 评 审 中 存 在 问 题 ：l 提 供 的 溯 源 标 准 物 质 不 是 正 式 药 品 标 准 物 质 。l 无 标 准 物 质 精 制 资 料 。l 标 定 方 法 含 糊 ： 外 标 ？ 质 量 平 衡 法 ？l 纯 度 测 定 方 法 只 有 一 种 。l 质 量 平 衡 方 法 计 算 公 式 错 误 。l 无 标 定 详 细 记 录 和 相 应 图 谱 。l 对 照 品 的 批 号 与 结 构 确 证 资 料 中 的 批 号 不 一 致 。 l Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; fifteenth Informational Supplement. Clinical and Laboratory Standards Institute.l Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animals； Approved Standard-Second Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute.l Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard-sixth Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute. 生 长 法直 接 制 备 菌 液 法 较 生 长 法 简 便 ， 用 接 种 环 挑 取 琼 脂 平 板 上 培 养 16 18小 时 的3 5个 单 菌 落 ， 用 无 菌 生 理 盐 水 或 M-H肉 汤 稀 释 至 0.5麦 氏 单位 。 用 M-H肉 汤 稀 释 至 约 5 105CFU/ml。 加 入 一 定 量 的 溶 剂 稀 释 至 一 定 浓 度 。 贮 备 液 的 浓 度 至 少 应为 1280g/ml， 或 最 高 测 试 浓 度 的 10倍 以 上 。 将 抗 菌 药 物 贮 备 液 用 M H肉 汤 稀 释 至 一 定 的 工 作 浓 度 后， 按 倍 比 稀 释 法 进 一 步 稀 释 至 一 系 列 所 需 浓 度 。 棋 盘 稀 释 法 包 括 微 量 棋