hpv主要竞争产品分析

HPV 竞 品 分 析市 场 部 王 飞 雁 HPV 检 测 HPV DNA 检 测HPV E6， E7 mRNA 检 测 分 型不 分 型部 分 分 型 方 法 代 表 厂 家PCR-反 向 点 杂 交 法 亚 能 、 凯 普 、 达 安 、港 龙 、 珠 海 赛 乐 奇流 式 荧 光 杂 交 法 上 海 透 景杂 交 捕 获 （ HC2） QIAGEN(凯 杰 )PCR-荧 光 探 针 法 港 龙 、 凯 普 、 达 安 、科 华PCR-荧 光 探 针 法 罗 氏bDNA 技 术 科 蒂 亚酶 切 信 号 放 大 法（ Cervista） HOLOGIC(英 硕 力 ) 不 分 型 PCR-反 向 点 杂 交 法 原 理 PCR-反 向 点 杂 交 法 技 术 特 点n高 灵 敏 度 -PCRn高 特 异 性 -核 酸 分 子 杂 交n高 通 量 -膜 上 固 定 多 种 探 针n能 实 现 HPV分 型 检 测 亚 能 凯 普技 术 原 理 PCR+反 向 点 杂 交 PCR+膜 杂 交 法 （ 实 质 为 PCR+反 向 点 杂 交 ）标 本 类 型 宫 颈 脱 落 细 胞 ， 疣 体 组 织 ， 病 理 石 蜡 切 片 ，液 基 细 胞 学 标 本 宫 颈 脱 落 细 胞检 测 H PV 种 类 l23型l无 HPV 44， 低 危 型 l21型l无 HPV73， 83， MM4（ 82） 而 73、 82型 为IARC认 定 的 15种 常 见 高 危 型 之 一DNA提 取 l提 取 试 剂 只 含 裂 解 液 一 种 成 分 l提 取 试 剂 分 溶 液 , , ,提 取 步 骤 复 杂PCR PCR反 应 液 已 分 装 PCR反 应 液 未 分 装 ， 需 人 工 配 制 反 应 液杂 交 全 自 动 核 酸 分 子 杂 交 手 工 杂 交结 果判 读 l显 色 斑 点 大 ， 边 界 清 晰l判 读 结 果 方 便 快 捷 l膜 条 小 ， 显 色 斑 点 小l判 读 结 果 时 需 与 对 照 卡 进 行 比 对内 部 质 控 l有 真 正 意 义 的 内 部 质 控 l无 真 正 意 义 的 内 部 质 控 亚 能 和 凯 普 HPV基 因 分 型 产 品 对 比 亚 能 和 凯 普 膜 条 显 色 对 比亚 能凯 普 膜 条 尺 寸 ： 12mm 78mm 膜 条 尺 寸 ： 22mm 22mm 亚 能 产 品 与 凯 普 HPV分 型 产 品 的 比 较 优 势n 有 配 套 的 全 自 动 核 酸 分 子 杂 交 仪n 检 测 HPV 型 别 多 ： 2 3 型n 有 真 正 意 义 的 内 部 质 控n 可 检 测 更 多 类 型 的 标 本 ， 有 文 献 支 持n 灵 敏 度 、 特 异 性 、 重 复 性 好n PCR扩 增 体 系 预 分 装n 显 色 斑 点 大 而 清 晰 ， 易 于 进 行 结 果 判 读 HPV 检 测 HPV DNA 检 测HPV E6， E7 mRNA 检 测 分 型不 分 型部 分 分 型 方 法 代 表 厂 家PCR-反 向 点 杂 交 法 亚 能 、 凯 普 、 达 安 、港 龙 、 珠 海 赛 乐 奇流 式 荧 光 杂 交 法 上 海 透 景杂 交 捕 获 （ HC2） QIAGEN(凯 杰 )PCR-荧 光 探 针 法 港 龙 、 凯 普 、 达 安 、科 华PCR-荧 光 探 针 法 罗 氏bDNA 技 术 科 蒂 亚酶 切 信 号 放 大 法（ Cervista） HOLOGIC(英 硕 力 ) 不 分 型 n代 表 厂 家 ： 上 海 透 景n高 危 型 人 乳 头 瘤 病 毒 核 酸 分 型 检 测 试 剂 盒n检 测 的 基 因 型 ： 19种 高 危 型 （ 16,18,31,33,35,39,45, 51,52, 56,58, 59, 68,73,83， 26, 55, 61,66 ） ， 种 低 危 型 （ 6,11,40,42,44,53,54 ） (无 注 册 证 )n进 口 专 用 仪 器 (美 国 Luminex多 功 能 流 式 点 阵 分 析 仪 ）流 式 荧 光 杂 交 法 流 式 荧 光 杂 交 法 流 式 荧 光 杂 交 法 是 将 PCR产 物 和 微 球 杂交 液 进 行 混 合 ， 并 经 过 杂 交 ， 荧 光 素 标记 ， Luminex流 式 分 析 仪 阅 读 得 到 相 应的 检 测 结 果 。 微 球 杂 交 液 中 包 含 多 种 荧 光 编 码 微 球 ，每 种 编 码 微 球 的 表 面 都 共 价 交 联 有 与HPV 型 别 对 应 的 探 针 ， 在 杂 交 过 程 中 ，探 针 特 异 性 识 别 并 结 合 相 应 的 靶 序 列 ，经 过 荧 光 素 反 应 后 形 成 微 球 -探 针 -PCR产 物 -荧 光 素 的 复 合 物 ， 经 Luminex流 式分 析 仪 阅 读 ， 可 以 获 得 每 种 复 合 物 的 微球 编 码 及 对 应 的 荧 光 信 号 强 弱 ， 得 出 检 测 结 果 流 式 荧 光 杂 交 法 操 作 流 程 PCR 扩 增DNA提 取向 微 孔 杂 交 板 中 加 入 微 球 杂 交 液 ，加 入 PCR产 物PCR产 物 变 性杂 交 ， 48 ， 30 min加 入 荧 光 素 SA-PE(链 霉 亲 和 素 标 记 的 藻 红 蛋 白 )， 15 min Luminex 流 式 分 析 仪 检 测 Luminex 100TM多 功 能 流 式 点 阵 仪 流 式 荧 光 杂 交 法 -HPV 不 定 量 流 式 荧 光 杂 交 法 技 术 总 结 原 理 ： 普 通 PCR技 术 ， 核 酸 分 子 杂 交 技 术 和 荧 光 标 记 技 术 尚 不 成 熟 ， 灵 敏 度 和 特 异 性 有 待 提 高 只 分 型 ， 不 定 量 需 价 格 昂 贵 的 流 式 荧 光 检 测 仪 项 目 亚 能 透 景技 术 原 理 基 因 芯 片 法 流 式 荧 光 杂 交 法操 作 步 骤 DNA提 取 PCR杂 交 化 学 显 色 判 读结 果 DNA提 取 -PCR 杂 交 荧 光 标 记 激 光 判读 检 测 通 量 检 测 23种 HPV基 因 型（ 18种 高 危 型 和 5种 低 危 型 ) 检 测 26种 HPV基 因 型（ 19种 高 危 型 和 7种 低 危 型 ， 注 册 证 只 批 检19高 危 ）基 本 设 备 离 心 机 、 PCR仪 、 普 通 杂 交 仪 离 心 机 、 PCR仪 、 Luminex多 功 能 流 式 点 阵分 析 仪标 本 类 型 宫 颈 脱 落 细 胞 、 疣 体 组 织 、 石 蜡 切 片 、 液基 细 胞 学 标 本 宫 颈 脱 落 细 胞灵 敏 度 高 较 低 特 异 性 高 较 低理 论 耗 时 6小 时 5小 时标 本 保 存 时间 室 温 下 放 置 时 间 长 （ 12小 时 ） 室 温 下 放 置 时 间 短 （ 1小 时 ） PCR反 应 液 已 配 制 并 预 分 装 分 成 引 物 混 合 液 ， PCR预 混 液 ， 聚 合 酶 三 部分 ， 需 人 工 配 制 亚 能 与 流 式 荧 光 杂 交 法 对 比 亚 能 产 品 与 上 海 透 景 产 品 的 比 较 优 势n 灵 敏 度 ， 特 异 度 更 高n 通 用 仪 器 设 备n 可 检 测 更 多 来 源 的 标 本n 标 本 保 存 时 间 更 长n PCR 反 应 液 预 分 装 亚 能 生 物 港 龙技 术 原 理 基 因 芯 片 技 术 基 因 芯 片 技 术检 测 H PV型别 18种 高 危 ， 5种 低 危 16种 高 危 ， 10种 低 危主 要 仪 器 设 备 离 心 机 、 普 通 PCR仪 、 普 通杂 交 仪 离 心 机 、 普 通 PCR仪 、 HPV分 型 基 因 芯 片 检 测 阅 读 系 统标 本 类 型 宫 颈 脱 落 细 胞 、 液 基 细 胞学 标 本 、 疣 体 组 织 、 石 蜡切 片 标 本 宫 颈 脱 落 细 胞灵 敏 度 高 （ 1 103拷 贝 /毫 升 ） 低 （ 1 105拷 贝 /毫 升 ）PCR 扩 增 PCR反 应 液 已 分 装 ， 减 少 操作 人 员 工 作 量 ， 避 免 污 染 PCR反 应 液 未 分 装 ， 增 加 操作 人 员 工 作 量 ， 带 来 污 染 风险杂 交 方 式 单 管 密 封 杂 交 ， 避 免 污 染 在 96微 孔 板 中 杂 交 ， 敞 开 环境 ， 易 污 染 。结 果 判 读 可 直 接 用 肉 眼 判 读 结 果 ，无 需 专 用 设 备 必 须 用 配 套 的 基 因 芯 片 检 测阅 读 系 统 来 判 读 结 果 亚 能 生 物 与 港 龙 HPV 基 因 分 型 对 比 HPV 检 测 HPV DNA 检 测HPV E6， E7 mRNA 检 测 分 型不 分 型部 分 分 型 方 法 代 表 厂 家PCR-反 向 点 杂 交 法 亚 能 、 凯 普 、 达 安 、港 龙 、 珠 海 赛 乐 奇流 式 荧 光 杂 交 法 上 海 透 景杂 交 捕 获 （ HC2） QIAGEN(凯 杰 )PCR-荧 光 探 针 法 港 龙 、 凯 普 、 达 安 、科 华PCR-荧 光 探 针 法 罗 氏bDNA 技 术 科 蒂 亚酶 切 信 号 放 大 法（ Cervista） HOLOGIC(英 硕 力 ) 不 分 型 杂 交 捕 获 二 代 （ Hybrid Capture 2 , HC2 ）nHC2基 本 原 理 ： 利 用 对 抗 体 捕 获 信 号 的 放 大 和 化 学 发 光 信 号 的 检 测n13种 高 危 HPV基 因 型 ,不 能 提 示 具 体 的 基 因 型 计 算 机判 读15 min杂 交60 min 抗 体捕 获60 min 第 二 抗 体结 合 ，化 学 发 光30 minDNA变 性45 minHC2 实 验 步 骤 图 示 吸 取 变 性 剂 于 对 照 和 样 本 管 中旋 涡 振 荡 10秒65 孵 育 45分 钟 ， 采 用 Microplate heater I HC2 操 作 步 骤 -DNA 变 性 将 已 变 性 的 样 本 混 匀 ， 吸 取 75 ul 于 “ 杂 交 微 孔 板 ” 中20-25 孵 育 10分 钟加 入 25 ul 高 危 HPV探 针 于 微 孔 板 中65 孵 育 60分 钟置 于 Rotary Shaker I中 ， 1100 rpm， 3 2分 钟准 备 HPV 探 针 混 合 物HC2 操 作 步 骤 -杂 交 将 杂 交 产 物 转 移 至 “ 捕 获 微 孔 板 ” 相 应 的 小 孔 中20-25 孵 育 30-45分 钟20-25 孵 育 60分 钟 ， 1100 rpm加 入 75 ul Detection Reagent 1（ 碱 性 磷 酸 酶 偶 联 的 抗 体 ）于 “ 捕 获 ” 微 孔 板 相 应 的 小 孔 中HC2 操 作 步 骤 -抗 体 捕 获 及 酶 标 洗 涤 微 孔 板 ： 采 用 Automated Plate Washer I或 进 行 手 动 洗 板 ， 重 复 洗 6次加 入 75 ul Detection Reagent 2 （ 化 学 显 色 底 物 ）于 “ 捕 获 ” 微 孔 板 相 应 的 小 孔 中20-25 孵 育 15-30分 钟采 用 Digene microplate luminometer (DML2000)读 数HC2 操 作 步 骤 -洗 板 及 化 学 显 色 HC2 如 何 进 行 结 果 判 读 ?l 1 .阴 性 对 照 每 次 实 验 必 须 同 时 做 3 份 阴 性 对 照 。 阴 性 对 照 的 结 果 必 须 为 1 0 -2 5 0 RLU（ 相 对光 单 位 ） 。 变 异 系 数 （ %CV） 应 该 2 5 %， 如 果 2 5 %， 那 么 去 掉 偏 离 平 均 值最 远 的 一 个 阴 性 对 照 ， 用 剩 下 的 两 个 阴 性 对 照 计 算 平 均 值 以 及 变 异 系 数 。 %CV必 须 2 5 %， 否 则 ， 本 次 实 验 结 果 无 效 ， 必 须 重 做 ， 无 法 给 病 人 出 报 告l 2 .标 准 品 每 次 实 验 必 须 同 时 做 3 份 高 危 HPV标 准 品 。 %CV应 该 1 5 %， 如 果 1 5 %， 那 么去 掉 偏 离 平 均 值 最 远 的 一 个 标 准 品 ， 用 剩 下 的 两 个 标 准 品 计 算 平 均 值 以 及 变异 系 数 。 %CV必 须 1 5 %， 否 则 ， 本 次 实 验 结 果 无 效 ， 必 须 重 做 ， 无 法 给 病 人出 报 告l 3 . 用 标 准 品 平 均 值 （ M HRC） 以 及 阴 性 对 照 平 均 值 MNC计 算 MHRC/ MNC比 值.2 .0 MHRC/ MNC 1 5 。 如 果 2 .0 或 1 5 ， 本 次 实 验 结 果 无 效 ， 必 须 重 做 。l 4 . 如 果 符 合 以 上 的 标 准 ， 检 测 结 果 是 可 靠 的 。 此 时 的 Cutoff值 （ 阳 性 标 本 评 判的 标 准 ） 就 是 MHRC 阴 性 对 照 （ NC） 高 危 HPV标准 品 (HRC)97 312101 33591 307平 均 值 96 318%CV 4.9 4.7HRC/ NC 3.31Cutoff 值 =318，所 有 标 本 的 相 对 光 单 位 （ RLU） 应 该 转 换 为 与 Cutoff值 的 比 值 ， 比 值 大 于 1为 阳 性 ， 比 值 小 于 1则 为 阴 性 结 果 的 判 定 质 控 对 照 HPV 基 因 型 预 期 的 结 果 （ RLU/Cutoff值 ）最 小 值 最 大 值QC1-LR HPV 6 0.001 0.999QC2-HR HPV 16 2 8 3份 阴 性 对 照 ， 3份 高 危 HPV标 准 品 ， 2份 质 控 ， 共 需 额 外 消 耗 8人 份 试 剂 ！ HC2 -定 性 检 测以 上 为 FDA 批 准 的 说 明 书 中 内 容 截 图 HC2 技 术 总 结n 原 理 ： 采 用 核 酸 分 子 杂 交 ， 抗 体 捕 获 （ 吸 附 杂 交 体 ） ， 化 学 显 色n 不 分 型n 不 能 检 测 HPV多 重 感 染n 不 定 量n 有 交 叉 杂 交 反 应n 手 动 操 作 很 多 ， 步 骤 繁 琐n 每 次 实 验 要 额 外 消 耗 8 人 份 试 剂 ， 试 剂 成 本 高n 需 基 因 杂 交 信 号 放 大 系 统 ， 设 备 成 本 高 项 目 基 因 芯 片 （ 亚 能 ） H C2技 术 原 理 PCR+反 向 点 杂 交 +化 学 显 色 分 子 杂 交 抗 体 捕 获 +化 学 显 色是 否 分 型 分 型 ， 确 定 具 体 的 基 因 型 不 能 分 型 ， 仅 提 示 是 否 有 HPV感 染检 测 HPV种 类 检 测 23种 HPV基 因 型 ， 18种 高 危 ，5种 低 危 检 测 13种 高 危 型标 本 类 型 宫 颈 脱 落 细 胞 、 疣 体 组 织 、 病 理石 蜡 切 片 ， 液 基 细 胞 学 标 本 宫 颈 脱 落 细 胞 ， 液 基 细 胞 学 标 本灵 敏 度 高 （ 1000 copies/m L） 低 （ 100000 copies /m L）交 叉 杂 交 无 有基 本 设 备 离 心 机 、 普 通 PCR仪 、 普 通 杂 交 仪 （ 价 格 低 廉 ） 基 因 杂 交 信 号 放 大 系 统（ 价 格 昂 贵 ）检 测 成 本 可 单 人 份 使 用 ， 一 次 可 检 测 标 本量 96个 或 更 多 每 次 实 验 需 额 外 消 耗 8人 份 试 剂 ，试 剂 成 本 高 亚 能 HPV产 品 与 HC2 的 比 较 优 势n 能 分 型n 检 测 2 3 种 HPV 基 因 型n 可 检 测 更 多 来 源 的 标 本n 无 交 叉 杂 交 反 应 ， 特 异 性 高n 通 用 仪 器 设 备 ， 如 PCR仪 和 杂 交 仪n 检 测 成 本 低 careHPV Test定 性 检 测 14种 高 危 型 HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68产 品 名 称 ： 高 危 型 人 乳 头 瘤 病 毒 （ HPV） 核 酸 检 测 试 剂 盒方 法 ： 杂 交 捕 获 -化 学 发 光 法商 品 名 ： careHPV Test该 检 测 技 术 专 为 缺 少 水 、 电 或 现 代 化 实 验 室 等 基 础 设 施 落 后 的 临 床 环 境 设 计 ，便 于 携 带 、 易 于 使 用 ， 当 日 可 出 检 查 结 果 careHPV识 别 宫 颈 癌 与 高 度 病 变 的 敏 感 度 和 特 异 度 ， 都 大 大 优 于 醋 酸 染 色 后 观 察 法 HPV 检 测 HPV DNA 检 测HPV E6， E7 mRNA 检 测 分 型不 分 型部 分 分 型 方 法 代 表 厂 家PCR-反 向 点 杂 交 法 亚 能 、 凯 普 、 达 安 、港 龙 、 珠 海 赛 乐 奇流 式 荧 光 杂 交 法 上 海 透 景杂 交 捕 获 （ HC2） QIAGEN(凯 杰 )PCR-荧 光 探 针 法 港 龙 、 凯 普 、 达 安 、科 华PCR-荧 光 探 针 法 罗 氏bDNA 技 术 科 蒂 亚酶 切 信 号 放 大 法（ Cervista） HOLOGIC(英 硕 力 ) 不 分 型 PCR-荧 光 探 针 法 化 学 原 理n 原 理 ： 在 PCR反 应 体 系 中 加 入 荧 光 基 团 ,利 用 荧 光 信 号 的 积 累 ,实 时 监 控整 个 PCR过 程 。n 基 于 Taqman探 针 PCR-荧 光 探 针 法 总 结 灵 敏 度 高 不 分 型 ， 或 部 分 分 型 不 能 检 测 HPV多 重 感 染 检 测 HPV 种 类 有 限 ， 目 前 最 多 检 测 1 4 种 高 危 型 自 动 化 程 度 高 需 价 格 昂 贵 的 荧 光 定 量 PCR仪 项 目 亚 能 生 物 基 因 分 型 PCR-荧 光 探 针 法技 术 原 理 PCR+反 向 点 杂 交 +化 学 显 色 PCR+荧 光 标 记 +发 光 、 读 数理 论 耗 时 6小 时 3小 时标 本 类 型 宫 颈 脱 落 细 胞 、 疣 体 组 织 、 病 理 石蜡 切 片 ， 液 基 细 胞 学 标 本 宫 颈 脱 落 细 胞 ， 液 基 细 胞 学标 本基 本 设 备 普 通 PCR仪 、 普 通 杂 交 仪（ 价 格 低 廉 ） 荧 光 定 量 PCR仪（ 价 格 昂 贵 ）检 测 通 量 23型 2/8/10/13型 等是 否 分 型 分 型 ， 确 定 具 体 的 基 因 型 不 分 型 ， 仅 提 示 是 否 有 HPV感 染 多 重 感 染 能 检 测 多 重 感 染 检 测 不 能 检 测 多 重 感 染 检 测 亚 能 与 PCR-荧 光 探 针 法 对 比 亚 能 产 品 与 PCR-荧 光 探 针 法 的 比 较 优 势n 能 分 型n 检 测 2 3 种 HPV 基 因 型n 能 检 测 HPV多 重 感 染n 可 检 测 更 多 来 源 的 标 本n 使 用 普 通 PCR仪n 特 异 性 更 高 亚 能 生 物 HPV基 因 分 型 与 罗 氏 对 比亚 能 生 物 罗 氏原 理 PCR-反 向 点 杂 交 法 PCR-荧 光 探 针 法仪 器 设 备 离 心 机 、 PCR仪 、 杂 交 仪 。价 格 低 廉 ， 适 合 各 级 实 验室 使 用 Com bas 4800。价 格 昂 贵检 测 H PV型 别数 量 23种 14种能 否 分 型 能 仅 能 区 分 HPV 16,18型标 本 类 型 宫 颈 脱 落 细 胞 、 疣 体 组 织 、 石 蜡 切 片 宫 颈 脱 落 细 胞 HPV 检 测 HPV DNA 检 测HPV E6， E7 mRNA 检 测 分 型不 分 型部 分 分 型 方 法 代 表 厂 家PCR-反 向 点 杂 交 法 亚 能 、 凯 普 、 达 安 、港 龙 、 珠 海 赛 乐 奇流 式 荧 光 杂 交 法 上 海 透 景杂 交 捕 获 （ HC2） QIAGEN(凯 杰 )PCR-荧 光 探 针 法 港 龙 、 凯 普 、 达 安 、科 华PCR-荧 光 探 针 法 罗 氏bDNA 技 术 科 蒂 亚酶 切 信 号 放 大 法（ Cervista） HOLOGIC(英 硕 力 ) 不 分 型 酶 切 信 号 放 大 法n代 表 厂 家 ： 美 国 Hologic， 中 国 子 公 司 -英 硕 力n产 品 名 称 （ 中 文 ） ： 高 危 型 人 乳 头 瘤 状 病 毒 DNA 检 测 试 剂 盒 （ 酶 切 信 号 放 大 法 ）n产 品 名 称 （ 英 文 ） ： Cervista HPV HR 亚 能 生 物 H PV 基 因 分 型 英 硕 力 Cervista 技 术 原 理 PCR-反 向 点 杂 交 法 酶 切 信 号 放 大 法检 测HPV种 类 1 8 种 高 危 （ HPV1 6 ， 1 8 ， 3 1 ， 3 3 ， 3 5 ，3 9 ， 4 5 ， 5 1 ， 5 2 ， 5 3 ， 5 6 ， 5 8 ， 5 9 ，6 6 ， 6 8 ， 7 3 ， 8 2 ， 8 3 ） ， 5 种 低 危（ HPV6 ， 1 1 ， 4 2 ， 4 3 ， 8 1 ） 1 4 种 高 危 型 （ HPV1 6 , 1 8 , 3 1 , 3 3 , 3 5 , 3 9 , 4 5 , 5 1 , 5 2 , 5 6 , 5 8 , 5 9 , 6 6 , 6 8 ）能 否 分 型 能 精 确 分 型 不 能 分 型每 批 实 验 标本 数 量 1 -9 6 个 ， 每 个 样 本 检 测 只 需 1 管 1 -2 8 个 ， 每 个 样 本 检 测 需 分 3 管 操作标 本 类 型 宫 颈 脱 落 细 胞 、 疣 体 组 织 、 石 蜡 切 片 标 本 宫 颈 脱 落 细 胞DNA 提 取 时间 3 0 分 钟 /2 8 个 标 本 ， 操 作 简 便 1 2 0 分 钟 /2 8 个 标 本 ， 操 作 繁 琐交 叉 反 应 无 对 HPV 6 7 、 HPV 7 0 有 交 叉 反 应 亚 能 生 物 与 Cervista 的 比 较 优 势n能 对 HPV进 行 精 确 分 型n检 测 HPV 种 类 多 ： 能 检 测 23种 HPVn兼 容 标 本 类 型 多n单 次 检 测 标 本 量 多 ： 最 多 可 做 96个 标 本n无 交 叉 反 应n标 本 处 理 简 便 快 速