实验五叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定

一、实验目的 了解也绿色提取分离的原理以及它们的光学特性和在光合作用中的意义 二、实验原理 叶绿体色素室植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。根据它们在有机溶剂中的溶解特性，可用丙酮将它们从叶片中提取出来，并可根据它们在不同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附剂上的吸附能力不同将它们彼此分开。 叶绿素是一种双羧酸的酯，可与碱发生皂化作用，产生的盐能溶于水，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。叶绿素与胡萝卜素都有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光镜检查和用分光光度计精确测定。叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光；叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光破坏，特别是叶绿素与蛋白分离后光破坏更快；叶绿素中的镁可被H+取代，称为褐色的去镁叶绿素；加入铜盐后则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作子午的浸制标本。 三、器材与试剂 仪器：带盖培养皿、台天平、研钵、量筒、烧杯、漏斗、软木塞、新华滤纸、毛细滴管、剪刀、分液漏斗、移液管、分光计。 实验试剂：丙酮、甲酯、醋酸铜、盐酸、氢氧化钾、石英砂、碳酸钙、无水硫酸钠、四氯化碳、乙醚。 材料：菠菜叶片 一、叶绿体色素的提取与分离 1、称取新鲜叶片2 g，放入研钵总加入丙酮5 ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加丙酮1 0 ml，以漏斗过滤，滤液即为色素提取液，放于暗处备用 2、把展层用的驴子中间搞一个圆洞，把新华滤纸剪成2 0 cm的长条卷成圆柱，一端多次滴上色素提取液，插入圆形滤纸中间孔中，上面与圆形滤纸齐平 3、在培养皿中加入展层用的四氯化碳，把上部做成的滤纸下的含色素圆柱下端浸入展层液，盖上培养皿上盖，开始展层。等展层液扩散到培养皿边缘时，取出滤纸，观察同心圆色素带，做好记录。 二、叶绿体色素的理化性质 1、叶绿体的荧光现象：取上述色素提取液少许于试管中，分别观察反射光和透射光，比较观察到的颜色不同并分析原因。 2、光对叶绿素的破坏：取上述色素提取液少许分别加入两个试管中，一支试管放在暗处，一支试管放在强光下照射，2 h后观察颜色变化，分析原因。 3、铜代反应：取上述色素提取液加入试管，逐滴加入浓盐酸，直至溶液呈现褐色，此时叶绿素分子已经遭到破坏，称为去镁叶绿素，然后加入醋酸铜结晶少许，慢慢加入溶液，直至出现鲜亮的绿色，此时即形成了铜代叶绿素。 4、黄色素与绿色素的分离：取上述色素丙酮提取液1 0 ml，加入盛有2 0 ml乙醚的分液漏斗，并沿漏斗边缘加入3 0 ml蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止片刻，溶液分为两层。色素已经全部转入上层乙醚总，弃去丙酮和水，再加入5 ml3 0 %KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静置1 0分钟，再加入蒸馏水1 0 ml，摇动后静置分离， 得到黄色素层和绿色素层，分别保留，分析实验结果和原因。 五、结果与讨论 分析每个实验的结果，注意事项和原因。 六、作业 1、记录每个实验的结果。 2、为什么提取叶绿体色素要加入少许碳酸钙和石英砂？