病原生物学实验二ppt课件

病 原 生 物 学 教 研 室病 原 生 物 学 实 验 （ 二 ） 细 菌 接 种 技 术 实 验 目 的 1 掌 握 常 用 的 细 菌 接 种 方 法 2 熟 悉 细 菌 生 长 现 象 的 观 察 方 法 （ 一 ） 细 菌 的 分 离 培 养 和 接 种 技 术接 种 工 具 接 种 针 和 接 种 环 L型 涂 布 棒接 种 环 境 接 种 罩 、 超 净 工 作 台 或 无 菌 室 内 进 行 。 接 种 方 法1. 平 板 划 线 接 种 法 ： 目 的 ： 使 混 合 的 细 菌 呈 单 个 分散 生 长 ， 形 成 单 个 菌 落 ， 以 便获 得 纯 菌 。 方 法 ： 分 区 划 线 法 ： 适 用 于 含 菌 量较 多 的 标 本 。 连 续 划 线 法 ： 适 用 于 含 菌 量较 少 的 标 本 。 分 区 划 线 划 线 时 接 种 环 与 平 皿 约 成 30-40度 角 ,轻 轻 接 触 ,以 腕 力在 琼 脂 表 面 轻 快 滑 动 ,不 能 划 破 琼 脂 . 第 一 次 划 线 应 占 平 皿 面 积 的 1/10,以 后 每 次 划 线 约 占 面积 的 1/41/5. 划 线 为 连 续 划 线 ,不 能 间 断 .应 占 满 平 皿 .划 线 不 能 交 叉 重复 . 每 次 划 完 后 应 灭 菌 . 2.斜 面 接 种 法 ： 用 于 菌 种 移 种 ， 以 进 一 步 鉴 定 和 保 存 菌 种 。 3.半 固 体 穿 刺 接 种 法 ： 保 存 菌 种 或 观 察 细 菌 的 动 力 和 生化 反 应 。4.液 体 接 种 法 ： 用 于 肉 汤 、 蛋 白 胨 水 、 糖 发 酵 管 等 液 体培 养 基 的 接 种 。 四种接种方法 将 上 述 已 接 种 细 菌 的 培 养 基 置 37 恒 温培 养 箱 中 孵 育 18 24h， 观 察 细 菌 的 生长 现 象 。 （ 二 ） 细 菌 在 培 养 基 上 的 生 长 现 象 1 . 细 菌 在 固 体 培 养 基 中 的 生 长 现 象菌 落 定 义 ： 指 单 个 细 菌 在 平 板 培 养 基 上 生 长 繁 殖 ，形 成 单 一 肉 眼 可 见 的 细 菌 集 团 。 菌 落 特 征 ： 大 小 、 形 状 、 边 缘 、 颜 色 、 表 面 、透 明 度 、 湿 润 度 、 黏 度 、 溶 血 性 。菌 苔 ： 指 多 个 菌 落 融 合 在 一 起 形 成 的 细 菌 堆 积物 。 菌 落 与 菌 苔 菌 落菌 苔 2 . 细 菌 在 液 体 培 养 基 中 的 生 长 现 象 浑 浊 ： 大 多 数 细 菌 ， 如 E.c. 沉 淀 ： 多 见 于 链 状 排 列 的 细 菌 。 菌 膜 ： 专 性 需 氧 菌 （ 如 结 核 分 枝 杆 菌 、 枯 草 杆菌 ） 。 细 菌 在 液 体 培 养 基 中 的 生 长 现 象菌 膜 菌 沉 淀 均 匀 浑 浊 对 照 3 . 细 菌 在 半 固 体 培 养 基 中 的 生 长 现 象有 鞭 毛 细 菌 ： 在 培 养 基 中 沿 穿 刺 线 并 向 外 扩 散 生 长 ， 穿 刺线 边 缘 模 糊 。无 鞭 毛 细 菌 ： 只 沿 穿 刺 线 生 长 ， 穿 刺 线 边 缘 清 晰 。 细 菌 在 半 固 体 培 养 基 中 的 生 长 现 象有 动 力 现 象无 动 力 现 象 肠 道 致 病 菌 的 分 离 培 养 (1 ) 一 .肠 道 杆 菌 的 生 物 学 性 状 二 .S-S培 养 基 的 特 性 及 用 途 三 .分 离 培 养 方 法 主 要 内 容 （ 一 ） 肠 道 杆 菌 的 生 物 学 性 状 埃 希 菌 属 ： 大 肠 埃 希 菌沙 门 菌 属 ： 伤 寒 沙 门 菌 甲 型 、 乙 型 、 丙 型 副 伤 寒志 贺 菌 属 ： 痢 疾 志 贺 菌肠 杆 菌 科 的 重 要 菌 属 及 代 表 菌 种 1.相 似 的 形 态 染 色 乳 糖 发 酵 试 验 肠 道 致 病 菌 肠 道 非 致 病 菌 多 数 不 发 酵 乳 糖 多 数 发 酵 乳 糖 2.活 泼 的 生 化 反 应初 步 鉴 别 肠 道 致 病 菌 和 肠 道 非 致 病 菌 +/- - +伤 寒 杆 菌 - - +痢 疾 杆 菌 - 大 肠 杆 菌 硫 化 氢 乳 糖 葡 萄 糖 菌 名 三 种 细 菌 的 生 化 反 应 成 分 含 量 （ g/L） 作 用牛 肉 膏 5 营 养 成 分乳 糖 10 营 养 成 分 ， 发 酵蛋 白 胨 5 营 养 成 分胆 酸 钠 、 胆 酸 -脱 氧 胆酸 钠 盐 混 合 物 （ 三 号 ） 3.5 抑 制 G+、 大 部 分 大 肠 菌 群 和 变 形杆 菌柠 檬 酸 钠 8.5 抑 制 G+、 大 部 分 大 肠 菌 群 和 变 形0.1%煌 绿 溶 液 0.33ml 抑 制 G+、 大 部 分 大 肠 菌 群 和 变 形硫 代 硫 酸 钠 8.5 检 测 硫 化 氢 的 产 生10%柠 檬 酸 铁 溶 液 10ml 检 测 硫 化 氢 的 产 生1%中 性 红 溶 液 2.5ml 指 示 剂琼 脂 17 凝 固 剂（ 二 ） SS培 养 基 （ Salmonella Shigella Agar ） 胆 盐 抑 制 G+,枸 橼 酸 钠 和 煌绿 能 部 分 抑 制 大 肠 杆 菌 ,致病 的 沙 门 菌 和 志 贺 菌 能 大量 生 长 。 中 性 红 指 示 剂 和 乳 糖 , 性红 遇 酸 变 粉 红 。 常 用 于 肠 道 致 病 菌 的 分 离培 养 。 （ 二 ） SS培 养 基 细 菌 SS平 板大 肠 杆 菌 粉 红 色 大 菌 落痢 疾 杆 菌 无 色 细 小 ， 半 透 明 菌 落伤 寒 杆 菌 无 色 细 小 半 透 明 菌 落 (中 间 有 黑 色 沉 淀 ）SS培 养 基 中 菌 落 特 点 将 粪 便 标 本 以 平 板 分 区 划 线 法 接 种 到 SS培 养 基 。 (每 个 实 验 室 8个 SS平 板 ， 每 组 做 好 标 记 ， 班 长 用 胶 布按 班 级 绑 好 ) 放 入 37 温 箱 中 培 养 24h； 取 出 放 4 冰 箱 中 保 存 备 用 。 （ 三 ） 粪 便 标 本 的 分 离 培 养 1.空 气 中 细 菌 的 检 查 （ 每 个 班 2个 平 皿 ） 原 理 ： 根 据 空 气 中 携 带 有 微 生 物 气 溶 胶 （ 以 固 体 或 液体 微 小 颗 粒 分 散 于 空 气 中 的 分 散 体 系 称 为 气 溶 胶 ， 其 中 的 气体 是 分 散 介 质 ） 粒 子 在 地 心 引 力 的 作 用 下 ， 以 垂 直 的 自 然 方式 沉 降 到 琼 脂 培 养 基 上 。 方 法 ： 在 室 内 选 择 一 处 放 一 个 平 皿 。 揭 开 皿 盖 ， 皿 盖扣 置 于 皿 底 下 ， 暴 露 放 置 15min， 即 盖 上 皿 盖 ， 放 入 37 培养 24小 时 ， 观 察 结 果 。细 菌 在 自 然 界 的 分 布 2.紫 外 线 对 细 菌 的 影 响（ 每 个 实 验 室 2个 培 养 皿 ） 取 一 个 平 皿 ， 用 密 涂 法 将 细 菌 涂 布 于 培 养 皿 中 ，打 开 一 半 平 皿 盖 ， 置 于 紫 外 灯 下 照 射 30分 钟 ，然 后 盖 好 平 皿 ， 置 37 培 养 24h后 取 出 观 察 结 果 。 分 三 次 接 种 ，每 次 取 一 环 。 第一 次 密 涂 接 种 后旋 转 60度 二 次 密涂 接 种 ， 然 后 同方 向 旋 转 60度 后再 次 密 涂 接 种 。 3. 咽 喉 部 细 菌 的 检 查 （ 每 班 4个 平 皿 ） n 取 血 琼 脂 平 板 1块 ， 打 开 平 皿 盖 ， 将 培 养 基 面 置 于口 腔 前 10cm处 ， 受 试 者 用 力 咳 嗽 几 次 ；n 盖 上 平 皿 盖 ， 置 37 温 箱 中 倒 置 培 养 24h后 取 出观 察 结 果 。 4 .化 学 消 毒 剂 对 细 菌 的 影 响方 法 ： 取 一 普 通 平 皿 培 养 基 ，一 部 分 写 上 “ 前 ” ， 另 一 部 分写 上 “ 后 ” ， 然 后 将 手 指 在 写有 “ 前 ” 的 部 分 沾 一 下 ， 再 将手 指 用 酒 精 进 行 消 毒 ， 在 写有 “ 后 ” 的 部 分 沾 一 下 。 放 入37 温 箱 培 养 24小 时 后 观 察 。 （ 每 个 实 验 室 4个 平 皿 ） 5.自 选 细 菌 进 行 培 养 (4个 )方 法 ： 取 一 普 通 平 皿 培 养 基 ， 用 棉 签 沾 取 生 理 盐 水 后 ，在 手 机 、 台 面 等 物 品 上 擦 拭 ， 然 后 涂 布 在 平 板 上 。 下 次 实 验细 菌 的 形 态 学 检 查药 敏 试 验肠 道 致 病 菌 分 离 培 养