离子交换法-zuihou

1 第八章 离子交换法 (ion-exchange) 第一节 基本原理 离子交换法：利用溶液中 带电粒子 与离子 交换剂之间 结合力 的差异进行物质分离的 操作方法。 带电粒子与离子交换剂间的作用力是 静电 力 。 电荷密度、电荷种类 2 离子交换剂 离子交换剂： 由惰性的不溶性载体 、 功能基团和平 衡离子组成 。 阳离子交换剂：平衡离子带正电荷 。 阴离子交换剂：平衡离子带负电荷 。 R-X+ + Y+ R-Y+ + X+ R-表示阳离子交换剂的功能基团和载体； X+ 为平衡 离子； Y+为交换离子。 3 吸附 选择性吸附 ： 调节溶液的 pH值， 使目的物带 有相当数量的静电荷，而主要杂质离子带相 反电荷或较弱的电荷。 选择合适的树脂（如阳离子交换树脂），使 目的物被离子交换树脂吸附，而杂质较少被 吸附。 4 洗脱 （ 1） 调节洗脱液的 pH值 。 （ 2） 用高浓度的同性离子将目的物离子取 代下来 。 对阳离子交换树脂而言，目的物的 pI值愈大 （愈碱），将其洗脱下来所需溶液的 pH值也 愈高。 5 离子交换树脂吸附和洗脱过程 （ 1） X+为平衡离子， YH+及 Z+为待分离离子； （ 2） YH+和 Z+取代 X+而被吸附； （ 3）加碱后 YH+失去正电荷，被洗脱； （ 4）提高 X+的浓度取代出 Z+ 动画 6 树脂的选择 pH大于等电点时 ， 物质带负电荷 ， 与阴离子交换剂进行交换； pH小于等电点时 ， 物质带正电荷 ， 可以与阳离子交换剂进行交换 。 7 蛋白质等电点与所用交换剂 8 离子交换技术的应用 9 第二节 离子交换树脂的结构和种类 离子交换树脂构成： （ 1）惰性的不溶性高分子固定骨架，称 载体 。 （ 2）与载体 共价键 连接的不能移动的活性基团， 又称 功能基团 。 （ 3）与功能基团以 离子键 连接的可移动的活性离 子，亦称 平衡离子 。 如聚苯乙烯磺酸型钠树脂 。 10 一、树脂分类 阳离子交换树脂 强酸型树脂：磺酸型树脂，功 能基团为磺酸根 ( SO3H)及甲 基磺酸根 ( CH2SO3H)， 有好 的解离能力 。 中酸性树脂：磷酸型树脂（ PO3H2 ） 弱酸性树脂：羧酸型树脂和酚 型树脂 （ COOH , ） ， 在 酸性环境中解离度受到抑制 。 11 阴离子交换树脂 强碱型阴离子交换树脂： 弱碱型阴离子交换树脂：活性基团为伯 、 仲 、 叔胺 基 。 在碱性环境中解离度受到抑制 。 中强碱性阴离子交换树脂：兼有以上两类活性基团。 12 离子交换树脂功能基团的电离常数 13 离子交换树脂的性能 14 两性树脂： 蛇笼树脂 (snake-cage resins) Na+CI- 15 二、离子交换树脂的命名： 强酸类 1 100号； 弱酸类 101 200； 强碱类 201 300； 弱碱类 301400； 中强酸类 401 500 交联度 ：是合成载体骨架时交联剂重量的百分数 ， 用 “ ”将树脂编号与交联度分开 。 弱酸 101 4其交联度为 4 。 国内常用树脂命名： 724； 732； 717 16 常用树脂 724；弱酸阳离子交换树脂 732；强酸阳离子交换树脂 717；强碱阴离子交换树脂 17 三、离子交换树脂的骨架 （一）苯乙烯型离子交换树脂 由 苯乙烯 与 二 乙烯苯 经过氧 苯甲酰催化聚 合而成 。 交联度 18 19 （二） 丙烯酸型离子交换树脂 丙烯酸型阳离子交换树脂：是由 丙烯酸甲酯 与 二乙烯苯 经过氧苯甲酰催化聚合而成。 20 丙烯酸型阳离子交换树脂 110树脂： 丙烯酸甲酯与二乙烯苯聚合而成。 724树脂： 它是由甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲 酯和二乙烯苯三元共聚而得 。 21 （三）其它离子交换树脂 蛇笼树脂 ： 脱盐 螯形树脂 ：金属离子 吸附树脂 ：“ 脱色树脂 ” 热再生离子交换树脂： 22 第三节 离子交换动力学 一 、 离子交换平衡 R代表离子交换树脂 ， Z1及 Z2分别为交换离子 A1和 平衡离子 A2的价电数 。 23 尼科尔斯基方程式 用 m1、 m2及 C1、 C2分别代表树脂上和溶液中 的两种离子的浓度 。 数量关系可表示 : 尼科尔斯基方程式 K 1时 交换离子 A1比平衡离子 A2对树脂有较大 的吸引力 24 二、离子交换速度 R B+ + A+ R A+ + B+ 离子交换过程 ： 1、 A+从溶液扩散到树脂表面 。 2、 A+从树脂颗粒表面扩散到颗粒中 心 。 3、 交换离子 A+ 与平衡离子 B+交换 。 4、 B+从交换中心扩散到颗粒表面 。 5、 B+ 再扩散到溶液中 。 25 粒子扩散 速度： 颗粒孔径 、 颗粒半径 、 树脂交换容量 、 交换离子 A+的半径与电荷 、 平衡离子的性质 （ 电荷 、 半径 ） 。 26 离子交换速度的影响因素： 1、 树脂粒度 ：树脂粒度大 ， 交换速度慢 。 2、 搅拌速度 3、 树脂交联度 ：交联度大 ， 交换速度低 。 4、 离子半径和离子价 ：离子每增加一个电荷 ， 交换速度下降一个数量级 。 5、 温度 。 6、 离子浓度 ：交换速度随离子浓度的上升而加 快 。 27 三、离子交换动力学 交换离子被吸附，平衡离子被释放。 交换带 ： 交换离子 A1由于被树脂吸附，其 浓度从起始浓度 Co逐渐下降到 0的树脂层。 交换带窄： K 1 ； A1浓度小；流速慢 。 28 第四节 离子交换树脂的性能 一 、 离子交换对树脂的基本要求 二 、 影响树脂性能的几个因素 三 、 主要理化常数的测定 29 一、离子交换对树脂的基本要求： 1、 有尽可能大的 交换容量 。 2、 有良好的 交换选择性 。 3、 化学性质稳定 。 4、 化学动力学性能好 。 5、 物理性能好 。 30 二、影响树脂性能的几个因素 1、 离子交换树脂具有的 功能基团性质 和 数 目 ， 数目 是其交换容量的基础 。 （ pH） 2、 树脂的 交联度 树脂强度 、 交换选择 性 、 动力学性质 。 3、 树脂骨架 和 平衡离子 。 31 pH对交换容量的影响 32 钠型树脂与氢型树脂 偶极离子 RSO3-Na+ + H3+NRCOO - RSO3- H3+ NRCOO - +Na+ RSO3- H + + H3+NRCOO - RSO3- H3+ NRCOO H 钠盐树脂 氢型树脂 ，被取代的氢离子为羧基所固定，使被吸附 的氨基酸不能形成偶极，与树脂之磺酸基没有排斥力。 与钠型树脂相比， 氢型树脂 有较 大 的有效 交换容量 。 33 三、主要理化常数的测定 1、 含水量 ：常用 干燥法和离 心法 测得 。 2、 膨胀度 ：膨胀系数 K膨胀 。 3 湿真密度树脂充满水时 的密度 。 4.交换容量 :meq/g 树脂。 34 交换容量测定方法 阳离子交换树脂 （ 氢型 ） 的测定方法：一定量 树脂中加入 NaOH溶液 ， 一天或数天后测定 NaOH剩余量 ， 从 消耗的碱量 求交换容量 。 阴离子交换树脂 （ 氯型 ） 的测定方法：一定量 树脂装柱 ， 用过量 Na2SO4溶液进行离子交换 ， 测定 流出液中氯离子总量 ， 求交换容量 。 35 滴定曲线： 36 滴定曲线 1 强酸树脂 Amberlite IR-120； 2 弱酸树脂 Amberlite IRC-84； 3 强碱树脂 Amberlite IRA-400； 4 弱碱树脂 Amberlite IR-45 强酸强碱树脂有水平段 转折点位置 功能团种类 交换容量随 pH值变化 37 第五节 离子交换的选择性 影响离子交换选择性的因素： 离子价与离子水合半径 离子价与离子浓度 交换环境 树脂结构 偶极离子排斥 38 一、离子的化合价与水合半径的影响： 相对亲和力 和相对浓度。 电荷效应越强的离子与树脂的亲和力越 大，而决定电荷效应的主要因素是 价电 数和离子半径 。 39 一价阳离子亲和力的次序是： H+Li+ Na+ K+ NH4+ Ag+ 对 强碱性 树脂阴离子亲和力次序： F OH HCOO Cl Br I SO4 2- 对 弱碱性 树脂阴离子亲和力次序： F Cl Br =I =Ac SO4 2- OH 。 40 离子交换树脂的性能 41 强酸强碱树脂对各种离子的选择系数 H+Li+ Na+ K+ NH4+ Pb+ Cs+ Ag+ Ti+ 。 42 二、 离子化合价与离子浓度的影响： 设离子平衡后溶液中两种离子的浓度比是定 值 P. C1/C2=P 在稀溶液 (C2较小 )中 ， 树脂吸附高价离子的 倾向很大 。 43 举例 例如： 当 k=2 P=1 m1+m2=1 C2=0.1mol/L Z2=1时 若 Z1=2 则 m1 0.9， m2 0.1 若 Z1=3 则 m1 0.97， m2 0.03 在较稀的溶液中，树脂几乎仅吸附高价离子。 44 三、交换环境的影响 1、 溶液的 pH： 解离度 、 交换容量 、 选择性 。 2、 离子强度 ： 交换容量 、 选择性 、 交换速度 3、 有机溶剂 ：能降低有机离子的解 离程度 。 45 四、树脂结构的影响 （ 一 ） 树脂载体的交联度 ： 交联度上升 ， 膨胀度下降 ， K值增大 ， 树 脂潜在的选择能力提高 。 选择性 的影响 ， 膨胀度增大时 ， K值减小 ， 促使树脂吸附量降低； 空隙大小 的影响 ， 即膨胀度增大 ， 促使树 脂吸附量增加 。 膨胀系数值很小时 ， 空间效应占主要地位 。 膨胀系数增大到一定值时，选择性占主要 地位。 图 8.14 磺酸基树脂 吸附土霉素的量与树 脂膨胀度之间的关系 46 膨胀度与选择性的关系 甲基丙烯酸 丙烯酰胺树脂 ， 链霉素与钠离子交换等温线与树脂膨胀度 的关系 1 膨胀系数 1.9； 2 膨胀系数 3； 3 膨胀系数 4.5； 4 膨胀系数 5.2； m1 树脂对链霉素吸附量； C1， C2 溶液中链霉素和钠离子浓度 47 （ 二 ） 辅助力 ：离子交换树脂与被吸附离子间的 作用力除静电力外 ， 还存在一种辅助力 。 无机离子交换常数 K值多在 110之间 。 有机离子交换时 ， K值可高达 102103。 （三） 其它结合力：某些树脂对金属离子有特殊 的亲和力。 羧酸型树脂 48 五、偶极离子排斥作用： 偶极离子 RSO3-Na+ + H3+NRCOO - RSO3- H3+ NRCOO - +Na+ RSO3- H + + H3+NRCOO - RSO3- H3+ NRCOO H 钠盐树脂 氢型树脂 与钠型树脂相比， 氢型树脂 有较 大 的有效 交换容量 。 49 氢型与钠型磺酸基树脂吸附氨基酸比较 50 第六节 离子交换操作方法 一 、 树脂的选择 目的物是弱酸性或弱碱性的 小分子 物质时 ， 宜选用强酸强碱树脂 （ 氨 基酸的分离 ） 。 蛋白质、酶 和 其它生物大分子 的分 离多采用 弱碱或弱酸性树脂 ，减少 生物大分子的变性，利于洗脱，提 高选择性。 51 二、树脂的处理和再生 1、 外观特征 透明或半透明；颗粒圆整 ， 粒度 均匀 ， 强度 。 2、 树脂的预处理 （ 1） 物理处理：去杂 ， 过筛 。 （ 2） 化学处理 ：用 8 10倍 的 1mol/L 盐酸或氢氧化钠溶液 交替浸泡 。 52 氨基酸分离前树脂的处理 53 不同类型树脂的处理 54 树脂的再生 树脂再生： 使用过的树脂重新获得使用性能的处理 过程 。 再生过程： （ 1） 去杂 ， 大量水冲洗 ， 除去物理吸附的杂质 。 （ 2） 用酸 、 碱处理除去与功能基团结合的杂质 。 (3) 转型： 55 三、基本操作方法 交换： 静态交换 动态交换 洗脱方式：分静态洗脱及动态洗脱两种 ， pH及离子强度改变 。 洗脱液： 酸、碱、盐 。 56 酸、碱洗脱液 目的是改变 吸附物的电荷 或 改 变树脂活性基团 的解离状态，以消除静电结 合力，迫使目的物被释放出来； 盐类洗脱液 是通过高浓度的同种电荷的离子 与目的物 竞争 树脂上的活性基团，使吸附物 游离。 57 洗脱方式 动态洗脱： 1、 溶液 pH及离子强度不变 。 2、 分阶段改变溶液 pH及离子强度 。 3、 连续改变溶液 pH及离子强度 。 梯度洗脱 ： 自动化的梯度仪 58 梯度洗脱 梯度混合器 : A瓶为低浓度盐溶液 B瓶为高浓度盐溶液 C=CA （ CA CB） VAA/AB 浓度梯度曲线 59 第七节 应用实例 分离纯化 氨基酸制备 无盐水制备 60 氨基酸制备、分离 猪血粉水解制备 6种氨基酸 : 61 无盐水制备 无盐水制备是利用 氢型 阳离子交换树脂和 羟 型 阴离子交换树脂的组合以 除去水中所有的 离子 ， 其反应式如下： 62 无盐水制备 阳离子交换树脂用 强酸性 树脂 ， 阴离子交换树脂可以用 强碱或 弱碱 树脂 。 强酸 弱碱 或 强酸 强碱； 强酸 弱碱 强酸 强碱 ； 强酸 强碱 混合床 。 63 混合床 混合床系将阳 、 阴两种树脂混合而成 ， 脱盐效果好 。 混合床中所发生的反应 : 64 混合床无盐水 图 8.20 混合床的操作 (a)为水制备时的情形； (b)为制备结束，用水逆流冲洗。 阳、阴树脂根据比重不同分层，阳树脂较重在 下面，阴树脂在上面； (c)为上部、下部同时通入碱、酸再生，废液自中间排出； (d)为再生结束，通入空气，将阳、阴树脂混合、准备制水 65 混合床抗生素脱盐 经过第一柱 （ 阳树脂 ） 时 ， 溶液变酸 ， 而经过第二柱 （ 阴树脂 ） 时 ， 溶液又变 碱 。 链霉素脱盐： 强酸 1 25和弱碱 311 4 树脂组成混合床 ， 脱盐效果较好 。 66 第八节 新型离子交换剂 一 、 大孔 、 均孔树脂 （ 一 ） 大孔型离子交换树脂 （ macro porous ,MP） （ 二 ） 均孔型离子交换树脂 ( IR ) 二 、 多糖基离子交换剂 （ 一 ） 离子交换纤维素 （二） 葡聚糖凝胶离子交换剂 67 大孔型与凝胶型离子交换树脂物理性质 68 （一）大孔型离子交换树脂的特征 （ 1） 载体骨架交联度高 。 （ 2） 孔径大 。 （ 3） 表面积大 ， 表面吸附强 ， 对大分 子物质的交换容量大 。 （ 4） 孔隙率大 。 69 大孔型离子交换树脂主要特性 70 国产大孔离子交换树脂的命名 D113是大孔弱酸性丙烯酸系树脂 D代表大孔型树脂 第一位数字代表产品的分类 ： 0 代表强酸性， 1代表 弱酸性， 2代表强碱性， 3代表弱碱性 第二位数字代表不同的骨架结构 ： 0代表苯乙烯系， 1代表丙烯酸系， 2代表酚醛系， 3代表环氧系等。 第三位数字为顺序号，用以区别交联剂等的差异。 71 国产大孔离子交换树脂品种 72 （二） 均孔型离子交换树脂 主要是 阴离子交换树脂 。 骨架的交联度比较均匀 。 代号为 IP或 IR。 交联度均匀 ， 孔径大小一致 ， 交换容 量都较高 ， 膨胀度 、 机械强度好 。 73 二、多糖基离子交换剂 生物大分子对离子交换的要求 : 固相载体具有 亲水性 和较大的 交换空间 ; 对其生物活性有稳定作用，并便于洗脱。 生物来源稳定的高聚物 多糖作载体。 多糖基离子交换剂可以分为： 离子交换纤维素 葡聚糖离子交换剂 74 （一）离子交换纤维素 特点： (1)开放的长链骨架， 亲水性强 ，表面积大，易 吸附大分子 。 (2)交换 基团稀疏 ，对大分子的实际交换容量大。 (3)吸附力弱， 交换和洗脱条件缓和 ，不宜变性。 (4)分辨率高。 75 常用的离子交换纤维素 羧甲基纤维素（ CM-C）： 弱酸性阳离子交换纤维素， pK=3.6 。 二乙基氨基乙基纤维素 （ DEAE-C）：强碱型阴离 子交换纤维素， pK=9.1。 76 77 离子交换纤维素的制备 78 操作注意点 可静态交换，也可动态交换。 交换基团密度低、吸附力弱。 盐浓度不宜高 （控制在 0.0010.02 mol/L） 。 79 离子交换纤维素的选择 解离曲线 80 离子交换纤维素的解吸 洗脱缓和 。 升高环境的 pH、降低 pH或是增加离子强度都能将 被吸附物质洗脱下来。 81 思考题 请以 DEAE-C为例说明离子交换纤维素分离 纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各 种方法的洗脱原理。 82 思考题 83 离子交换纤维素的处理和再生 酸碱浓度要适当降低 ， 处理时间也从 4h缩短 为 0.31h。 以交换缓冲液平衡 。 注意： 不耐酸，用酸处理的浓度和时间须小心控制。 84 （二） 葡聚糖凝胶离子交换剂 是将 活性交换基团 连接于 葡聚糖凝胶 上制成的各种 交换剂 。 命名 : 交换活性基团 -Sephadex C (A)-编号。 具有 离子交换和分子筛 的双重作用，对生物分子有 很高的分辨率。 85 常用离子交换葡聚糖 86 琼脂糖凝胶离子交换剂 琼脂糖凝胶上引入功能基 DEAE sepharose CL-6B CM sepharose CL-6B DEAE Toyopearl CM Toyopearl 87 多糖基离子交换剂应用 尿激酶分离纯化 88 L-门冬酰胺酶 (L-asparaginase) 能专一地水解 L-门冬酰胺生成 L-门冬氨酸和氨。 外源门冬酰胺被降解，蛋白质合成过程中氨基酸的 缺乏，导致肿瘤细胞的死亡。 L-门冬酰胺酶是一种重要的抗肿瘤药物。 大肠杆菌能产生 2种天冬酰胺酶，即 L-门冬酰胺酶 和 L-门冬酰胺酶 。 重组 L-门冬酰胺酶 pI为 4.85。 89 重组门冬酰胺酶 的纯化 90 离子交换剂 弱酸 阳离子交换 树脂 724 强酸 阳离子交换 树脂 732 强碱 阴离子交换 树脂 717 D113 大孔弱酸性丙烯酸系树脂 CM-C DEAE-C CM-Sephadex C DEAE-Sephadex A 91 第九节 离子交换聚焦色谱 色谱聚焦 （ chromatofocusing） : 是一种高 分辨的新型的蛋白质纯化技术 。 是根据蛋白 质的等电点 ， 结合离子交换技术的大容量色 谱 ， 能分离几百毫克蛋白质样品 ， 洗脱峰被 聚焦效应浓缩 ， 分辨率高 。 适用 水溶性的两性分子 ，如蛋白质、酶、多 肽、核酸等。 92 一、色谱聚焦的原理 （ 一 ） 自动形成 pH梯度 。 （ 二 ） 蛋白质的色谱行为 （三） 聚焦效应 93 PH梯度溶液的形成 在 聚焦层析 中，当 洗脱液流进 多缓冲 交换剂 时，由于交 换剂带有缓冲能力 的电荷基团，故 PH梯度溶液可以 自动形成 。 94 PBE94柱聚焦色谱的 pH梯度 （ 1） 柱内每点的 PH 值从高到低逐渐下降 。 （ 2）从层析柱顶部到 底部就形成了 PH6 9 的梯度。 （ 3） PH梯度会逐渐 向下迁移。 （ 4） 底部流出液的 PH由 9逐渐降至 6。 95 蛋白质的色谱行为 当柱中 PH低于蛋白质的 PI时 ， 蛋白质带 正电荷 ， 不与阴离 于交换剂结合 ,随洗脱液向下移动 。 当蛋白质移动至环境 PH高于其 PI时 ， 蛋白质 由带正电荷变 为带负电荷 ， 并与 阴离子交换剂结合 。 由于洗脱剂的通过 ， 蛋白质周围的环境 PH 再次低于 PI时 ， 它又带 正电荷 ， 并 从交换剂解吸下来 而下降 。 移至 pH大于 PI时又重新结合 ， 直至蛋白质从柱下流出 。 不同蛋白质具有不同的等电点 ， 在被离子交换剂结合以前 ， 移动距离 是不同的 ， 洗脱出来的先后次序是按等电点排列的 。 96 聚焦效应 当一种蛋白质在柱上随洗脱液下移 至等电点处时，移动速度明显减慢。 此时加上 相同 的 第二个样品 ，它将 以洗脱液移动的速度下降，直至追 到正在慢移的第一个样品（ 聚焦 ）。 如果加入的第二个样品的等电点比 第一个样品高，它可以越过第一个 样品区先被洗脱出来。 97 二、多缓冲剂 多缓冲剂是一种两性电解质缓冲剂，是 分子 量大小不同的多种组分的多羧基多氨基化合 物 。 Polybuffer96 PBE94 Polybuffer74 PBE94 98 三、多缓冲交换剂 PBE94是以 交联琼脂糖 6B（ Sepharose 6B） 为载体 ， 并在糖基上通过醚键偶合上配基制成的 多缓冲交换剂 ， 是 阴离子交换剂 。 当 Polybuffer96流进多缓冲交换剂时 ， PH梯度 溶液可以自动形成 （ 9 6） 。 99 四、操作步骤 （一）凝胶和缓冲剂的选择 PBE94 Polybuffer96 PBE94 Polybuffer74 pH间隔为 3个单位。 pH范围应包含要分离样品各组分等电点 ， 并使其有 2/31/2柱长的吸附解吸时间。 100 （二）凝胶柱的准备 （ 1） 凝胶按 1 1悬浮于 起始缓冲液 中 ， 除气泡 。 （ 2） 在柱中放 23ml起始缓冲液 ， 搅拌下缓缓倒 入 。 （ 3） 打开柱底部开关 ， 待凝胶沉降后将柱顶部接 头装好 。 （ 4） 用 1015个柱床体积 起始缓冲液平衡 。 101 （三）、样品的准备 100mg蛋白质 /10ml床体积。 样品体积不超过 0.5个床体积 。 102 （四）、上样和洗脱 样品均匀平整地加到床面上； 上样前应先加 5ml洗脱液 。 用洗脱缓冲液淋洗 ， pH梯度自动形成 。 梯度的 pH上限由起始缓冲液确定 ， 其 下限由淋洗缓冲液的 pH决定 。 103 去除多缓冲剂的方法 （ 1） 沉淀法 （ 2） 凝胶过滤 （ 3） 亲和色谱法 （ 4） 疏水色谱法 104 多缓冲离子交换剂的再生 多缓冲交换剂的再生可以在柱上进行。 用 23个床体积的 1mol/L NaCl淋洗。 用 0.1mol/L HCl洗涤。 105 106 五、应用实例 -蛋白质模拟混合物分离 PBE94柱 ，床高 15cm。 样品 :4ml洗脱缓冲液含有马肌 红蛋白 ， 碳酸酐酶和白蛋白 . 起始缓冲液 :0.025mol/L咪唑 HCl， pH7， 洗脱缓冲液 ：多缓冲剂 74， pH4。 107 离子交换剂 弱酸 阳离子交换 树脂 724 强酸 阳离子交换 树脂 732 强碱 阴离子交换 树脂 717 D113 CM-C DEAE-C CM-Sephadex C DEAE-Sephadex A ？ -Sepharose A （ 聚焦色谱 PBE94 ） 108 思考题 1、 影响树脂性能的因素有离子交换树脂具有的 、 和 。 2、 写出下列离子交换剂类型： 732 ， 724 ， 717 ， D113 ,CM-C ,DEAE-C ， PBE94 。 3、 在采用多缓冲阴离子交换剂作固定相的离子交换聚焦色谱过程中 ， 当 柱中某位点之 pH值下降到蛋白质组分 值以下时 ， 它因带 正电荷而 ， 如果柱中有两种蛋白组分 ， pI值较 者会 超过另一组分 ， 移动至柱下部 pH较 的位点进行 。 4、 影响离子交换选择性的因素主要有 、 、 、 、 等 。 5、 用钠型阳离子交换树脂处理氨基酸时 ， 吸附量很低 ， 这是因为 （ ） A. 偶极排斥 B.离子竞争 C. 解离低 D. 其它 6、 在尼柯尔斯基方程式中 ， K值为离子交换常数 ， K 1说明树脂对交 换离子吸引力 （ ） 。 A. 小于平衡离子 B.大于平衡离子 C. 等于平衡离子 D. 其它