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抗生素类药物 的分析 进入 返回主目录 思考与练习 第一节 概 述 第二节 内酰胺类抗生素 第三节 氨基糖苷类抗生素 第四节 四环素类抗生素 第五节 抗生素类药物中高分 子杂质的检查 基本要求 基本要求 一 、 掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法 之间的关系 。 二 、 掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法 。 三 、 掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原 理 、 测定方法与计算 。 四 、 熟悉抗生素类药物杂质检查的方法 。 五 、 了解抗生素类药物中高分子聚合物检查 。 返 回 第一节 概述 1. 抗生素药物的特点 化学纯度较低 活性组分易发生变异 稳定性差 2. 微生物学法与理化法的比较 微生物检定法 理化法 以抗生素对微生物的杀伤或抑制程 度为指标衡量抗生素的生物效价 根据抗生素结构特点，利用其 特有的理化性质测定其含量 已知或新发现的抗生素、精致品或 粗制品均能测定 测定化学结构已知、已提纯的 抗生素 灵敏度高、样品需用量小、反映抗 生素的医疗价值，但操作步骤多、 费时、 误差大 迅速、准确、专属性高、样品 需用量小、操作简单、省时 3.抗生素的活性以效价单位来表示： 每 ml或每 mg中含有某种抗生素的有效成 分的多少，用单位（ u）或 g 表示。 1mg青霉素 G钠盐定为 1667单位 1mg青霉素 G钾盐的单位（ u） =1667 356.4/372.5=1595u/mg 分类 （按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类 返 回 第二节 内酰胺类抗生素 青霉素类 N S C H 3 C H 3 C O O H O H N 1 2 3 4 5 6 7 R C O 母核（ 6-氨基青霉烷酸） A B 头孢菌素类 7 6 5 4 3 2 1 N O N H S C H 2 R 1 C O O H 母核（7- 氨基头孢菌烷酸）? R C O A B C O N S O H N C O O H C H 3 C H 3 C H 2 青霉素 （青霉素钾、钠） N H 2 C O N S O H N C O O H C H 3 C H 3 C H 2 氨苄西林 （氨苄青霉素） 阿莫西林 （羟氨苄青霉素） N H 2 C O N S O H N C O O H C H 3 C H 3 H O C H 2 C 2 H 5 2 N C H 2 C H 2 O O C N S O H N C O O H C H 3 C H 3 OCC H 2 N H 2 普鲁卡因青霉素 头孢氨苄 N O N H S C H 3 C O O H OC N H 2 C H 2 头孢拉啶 C H 2 N H 2 C O N O N H S C H 3 C O O H 头孢羟氨苄 N O N H S C H 3 C O O H OC N H 2 C H 2H O 头孢噻吩钠 S C H 2 C O N O N H S C H 2 O C O C H 3 C O O N a N S O H N C O O K C H 3 C H 3 OCC H 2 酸性 结构特点与性质 一、 Na 与碱金属 (Na+、 K+)成盐 （一）羧基 易溶于水 与有机碱 (普鲁卡因 )成盐 难溶于水 普鲁卡因 青霉素 C 2 H 5 2 N C H 2 C H 2 O O C N S O H N C O O H C H 3 C H 3 OCC H 2 N H 2 N S O 1 2 3 4 56 7 （二） 手性 C 8 7 6 5 4 3 2 1 N O S 头孢菌素类 C6 C7 青霉素类 C3 C5 C6 旋光性 （三）共轭体系 N S O 头孢菌素类 母核有共轭体系 青霉素类 母核无明显 UV 多数有苯环取代基 N O S UV （四） 内酰胺环 水溶液 不稳定 干燥纯净 稳定 不稳定 性因素 四元环张力大 酰胺键易水解 青霉素类 某些氧化剂 酸、碱、青霉素酶 （某些金属离子） （温度） 降解 失效 例 青霉素的降解反应 青 霉 素 青霉噻唑酸 H2O/OH 青霉素酶 青霉酸 H2O pH2 100 青霉噻唑 酰基羟胺酸 NH2OH 青霉烯酸 pH4 青霉胺 CO2 青霉醛 HgCl2 头孢菌素类 酸、碱、胺类 -内酰胺酶 降解失效 （一）呈色反应 1. 羟肟酸铁反应 -内酰胺类 呈色 羟肟酸衍生物 Fe3+/3 H+ 鉴别试验 二、 NaOH HCl NOH H - 内酰胺类 N S O N S CO H N H O H H 2 N O H H C l N S C H N H O F e 3 + 3 O H+ Fe3+/3 （红、棕、褐） N H 2 C O N S O H N C O O H C H 3 C H 3 C H 2 2. 茚三酮 反应 -氨基 -氨基 茚三酮 蓝紫色 3. 双缩脲反应 - C O N H 似肽键 （开环分解） - 内酰胺类 碱性酒石酸铜 紫 4. 与重氮苯磺酸反应 橙黄色 重氮苯磺酸 - - OH H C （偶合） 酚羟基 头孢哌酮 5. 与变色酸 -硫酸反应 活泼 “ -CH2-” 青霉素 阿莫西林 氨苄西林 H C H OCH SOH - ”羰基侧链含“ （ 分解 ） 变色酸 显色 1. K+、 Na+的火焰反应 （二）各种盐的反应 焰色 鲜黄色 + 醋酸氧铀锌 黄 Na+ 焰色 紫色 + 0.1%四苯硼钠 + Ac白 K + 2. 沉淀反应（青霉素盐） 遇酸 在过量 HCl或 有机溶剂中溶解 白 青霉素 青霉素钠 青霉素钾 緘 + H 3. 重氮化 - 偶合反应 青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素 + +H 重氮化 -偶合反应 红 芳伯氨基 4. 与三硝基苯酚反应 三硝基苯酚 二苄基乙二胺苄星青霉素 N a O H 二苄基乙二胺 mp 三硝基苯酚 H 2 O H O H - H C O N S O H N C O O H C H 3 C H 3 C H 2 C H 2 N C H 2 C H 2 N H C H 2 O H N O 2 O 2 N N O 2 C H 2 N C H 2 C H 2 N H C H 2 光谱法 （三） 1、 UV法 样品、分解产物 nm339 H A + 苯唑青霉烯酸苯唑青霉素 Cu2+ A,Em in,m ax, %1 cm1光谱图 头孢氨苄 max = 262nm 青霉素 V钠 A280nm/A264nm = 1.30 1.50 N O C O N H C H 3 N O S C H 3 C H 3 C O O N a N O C H C H 3 O C O CN H N C H H C C H 3 C H 3 S H C H C O O H pH3.8 分 子 重 排 2、 IR法 3180cm-1 N-H 内酰胺 C=O 1780cm-1 3470cm-1 O-H 1690cm-1 仲酰胺 C=O 1250cm-1 C-O 以阿莫西林为例 色谱法 （四） 1、 TLC法 对照品对照法 和斑点颜色比较 供试品 对照品 相同条件 fR 2、 HPLC法 Rt比较供试品 对照品 相同条件 三、杂质检查 药物 检查项目 检查方法 头孢他啶 聚合物 HPLC法 头孢曲松钠 头孢哌酮钠 头孢噻肟钠 头孢呋辛酯 有关物质和异构体 HPLC法 头孢氨苄 有关物质 反相 TLC法 青霉素钾（钠） 吸收度 紫外分光光度法 1.头孢他啶聚合物的测定 固定相：葡聚糖凝胶 G-10（ 40120m ） 流动相 A： 3.5%硫酸铵的 0.01mol/L磷酸盐缓冲液 流动相 B： 0.01%十二烷基硫酸钠 对照品溶液：头孢他啶对照品 100g/ml 1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子 用 1mg/ml蓝色葡聚糖 2000、流动相 A测定；重 复性用对照品溶液、流动相 B测定。 N不低于 900，拖尾因子 0.751.5，峰面积的 RSD应小于 5.0%。 2）测定方法 进样供试液，用流动相 A；进样对照液， 用流动相 B。以外标法计算，含头孢他啶聚合 物以头孢他啶计不得超过 0.3%。 2.头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查 固定相： ODS 流动相： 0.2mol/L磷酸二氢铵 -甲醇（ 62:38） 1）头孢呋辛酯 2-异构体的制备：头孢呋辛酯对 照品 +流动相 头孢呋辛酯 2-异构体。 2）系统适用性试验：各异构体之间的 R1.5，以 头孢呋辛酯 A异构体计算 n1500。 3）异构体： tR1 相对保留时间 r12=- 1-被测物 tR2 2-标准物 异构体 相对保留时间 判断 B异构体 0.85 供试液谱图中 A异构体的峰面积 A异构体 1.0 与 A、 B异构体峰面积和之比应 为 0.480.55。 3.头孢氨苄中有关物质的检查 -反相 TLC法 固定相：活化后的硅胶 G板臵 5%（ V/V）正十四 烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干 展开剂： 0.1mol/L枸橼酸 -0.2mol/L磷酸氢二 钠 -丙酮（ 120： 80： 3） 供试液：本品 50mg/ml 对照液（ 1）：本品 0.5 mg/ml 对照液（ 2）： -苯甘氨酸 0.5 mg/ml 对照液（ 3）： 7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸 0.5 mg/ml 结果判断 ：供试液如显杂质斑点，与对 照液（ 2）（ 3）位臵相同上所的斑点比 较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑 点，与对照液（ 1）所显的主斑点比较， 其颜色不得更深。 4.青霉素钠（钾）的吸收度检查： 供试液 1.80mg/ml， 结果判断： A280不得大于 0.10 - 8 I I +H 碘量法 （ 一 ） 1. 原理 水解产物 OSNaNa IOSNaI 定量过量 剩余 ChP 四、含量测定 （ 水解 ） NaOH 头孢菌素族 青霉素族 反应分两步进行： 1. 水解反应 (按化学计算量进行 ) 2. 氧化 -还原反应 (无固定的量关 系 ， 受温度 、 PH值和时间等因素 影响 ， 应严格控制反应条件并采 用标准品平行对照测定 ) N S C H 3 C H 3 C O O HO H NR C O R C O H H N C O O N a C H 3 C H 3 S N COON a I24 + 5 H 2 O + 2 H C l N a O H C C H 3 C H 3 S O 3 H C H N H 2 C O O HC H N H C O R C O O H 2 +2 N a C l + + 8HI 第一步 第二步 V样空 V样 对照液 +缓冲液 +碘液 +回滴 +碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴 V对空 V对 2. 方法 供试液 +缓冲液 +碘液 +回滴 +碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴 空白试验 A、 消除样品已降解产物的干扰 B、 消除样品中其他消耗碘的杂 质的干扰 C、 消除碘挥发造成的误差 以未经水解的样品作空白测定 空白 样品 I2 Na2S2O3 I- I2 采用标准品平行对照测定 A、 可消除温度、 pH、操作、环 境等条件的影响 B、 使本法测定结果与微生物检定 法一致 3. 条件 （ 1） 弱酸性 pH4.5 碱 I2 IO3- + I- 酸 普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐沉淀 （ 2） 温度 24 26 温度 38 未水解的供试品亦消耗碘 （ 3） 水解时间 以水解 20分钟后的 耗碘量最大 （ 4） 反应时间 反应 20分钟后， 耗碘量随时间的 变化较小，可减小含量测定的误 差。 4. 特点 （ 1） 灵敏度高 样品 : 碘 = 1 : 8 （ 2） 反应条件、实验操作要求高 V对 、 V对空 V样 、 V样空 1份含量 加试剂次序、反应时间、滴定速度相同 4I28I- 5. 计算 原料 % W W VV VV 对照品 ）（ ）（ 含量 样 对 对对空 样样空 - - 相 当 于 标 示 量 % = S 0 - S R 0 - R C U W U 0 D 平 均 装 量 1 0 0 % 制剂 电位配位滴定法（汞量法） （ 二 ） 1. 原理 SH R OH - - 青霉素族 （ 水解 ） HgRS ）（ 青霉素族 ChP +Hg.pH 2. 方法 总样V NOHgH N ON a O H 醋酸盐缓冲液 pH4.6 滴定 水解 (降 ) 空 醋酸盐缓冲液 V (NO3)2 Hg pH4.6 滴定 样 品 以未经水解的样品作空白测定 3、 讨论 （ 1） 水解必须完全 （ 2） 汞盐滴定液用 EDTA标定 （ 3） 空白试验 消除已降解产物干扰 （ 4） 优点 不需标准品 % W FTV % W FTV % - 空 空 样 样含量 4、 计算 %FT W V W V % - ）（含量 空 空 样 样 可见 -紫外分光光度法 （ 三 ） 1、 酸水解 -铜盐法 稳定剂 nm Cu pH A + 青霉烯酸 青霉素族 （水解） C H 2 C O C O N H H C C H 3 C H 3 C C O O H CCN H S H C O N S O H N C O O H C H 3 C H 3 C H 2 pH ACu + 2、 硫醇汞盐法 （ 1） 原理 青霉烯酸硫醇汞盐 青霉素族 HgCl2 （ 咪唑 ） nmm a x H g C l C H 3 C H 3 C O O N a S N H C O N C H 2 N H C O C H 3 N S O H N C O O N a C H 3 C H 3 OCC H 2 N H C O C H 3 H g C l 咪唑 nmm a x （ 2） 方法 对照品法 % W W A A % 对照品 样 标 标 样 计算 标 样咪唑硼酸缓冲液 标准液 供试液 A AH g C l - 2pH 9 （ 3） 注意 侧链有 -NH2时，需加醋酐先 将其乙酰化后才能发生上述 反应 N S O H N C O O C H 3 C H 3 OCC H 2 N H 2 N a N S O H N C O O N a C H 3 C H 3 OCC H 2 N H C O C H 3 OCHCH pH9 3、 羟肟酸比色法 Fe3+/3 H+ 红色 NaOH HCl NOH H2 - 内酰胺类 羟肟酸衍生物 HPLC法 （ 四 ） ChP 内标法校正因子 外标法 特点 快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测） 返 回 第三节 氨基糖苷类抗生素 苷苷元糖 缩合 + 氨基糖苷苷元氨基糖 缩合 + 链霉素 双氢链霉素 新霉素 卡那霉素 庆大霉素 巴龙霉素 链霉素 链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基 -L-葡萄糖胺 苷元 糖 链霉双糖胺 N H C N H N H 2 H O O H O HN HCH 2 N N H O O C H 3 O H C H O O O C H 2 O H O H O HN H C H 3 链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L- 葡萄糖胺 N H C N H N H 2 H O O H O HN HCH 2 N N H O O C H 3 O H C H O O O C H 2 O H O H O HN H C H 3 链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L- 葡萄糖胺 巴龙霉素 D-葡萄糖胺 +脱氧链霉胺 +D-核糖 +巴龙霉糖 巴龙胺 苷元 巴龙二糖胺 糖 D-葡萄糖胺 脱氧链霉胺 D-核糖 巴龙霉糖 O O O OH O C H 2 O H H O N H 2 H O O O H N H 2 N H 2 O H O O H R 2 N H 2 C H 2 O H * * * * R 1 庆大霉素 糖 苷元 绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺 糖 R O C R 1R 2 HN N H 2 O O H H 2 N N H 2 O O O H N H C H 3 O H C H 3 绛红糖胺 紫素胺 2-脱氧链霉胺 加洛糖胺 N-甲基 -3- 去氧 -4-甲 基戊糖胺 R O C R 1R 2 HN N H 2 O O H H 2 N N H 2 O O O H N H C H 3 O H C H 3 绛红糖胺 紫素胺 2-脱氧链霉胺 加洛糖胺 N-甲基 -3- 去氧 -4-甲 基戊糖胺 庆大霉素 C复合物 庆大霉素 C1 R=H R1、 R2=CH3 庆大霉素 C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素 C1a R、 R1、 R2=H 庆大霉素 C2a R=CH3 R1= R2=H 庆大霉素 C2b R=R1=H R2=CH3 一 、 结构与性质 多与硫酸成盐 链霉素 3个 庆大霉素 5个 碱性中心 碱性 （一） 水溶性 溶解性 （二） 链霉素 pH5 7.5 庆大霉素 pH2 12 稳定 稳定性 （ 四 ） UV （ 三 ） N H C N H N H 2 H O O H O HN HCH 2 N N H O O C H 3 O H C H O O O C H 2 O H O H O HN H C H 3 坂口反应 N-甲基葡萄 糖胺反应 麦芽酚反应 二 、 鉴别 茚三酮反应 （ 一 ） 蓝紫色 庆大霉素 链霉素 茚三酮 羟基胺结构 Molisch 试验 （ 二 ） 氨基糖苷类 H+ 糠醛 羟甲基糠醛 -萘酚 蒽酮 呈色 O H O H 2 C C H O O H O H 2 C C H O H O H O H 红紫色 N-甲基葡萄糖胺反应 （ 三 ） 甲基葡萄糖胺 巴龙霉素 链霉素 水解 - N 乙酰丙酮 OH- 吡咯衍生物 对二甲氨基苯甲醛 H+ 红色 （ Elson-Morgan反应 ） 庆大霉素 N H C H 3 N H N H N H C N H 2 H O O H O HN HCH 2 N O O C H 3 O H C H O O O C H 2 O H O H O H N C H 3 C O C H 3 H H O C H 2 C H O H 3 (缩合 ) 323 C O C HC O C HCH -OH H H H 3 C H 3 C C HN N C O C H 3 C H 3 C O C H 3 C H 3 N 红色 对二甲氨基苯甲醛 H+ N C H 3 C O C H 3 H H O C H 2 C H O H 3 麦芽酚反应 （ 四 ） 链霉素特征反应 链霉糖链霉素 -OH 麦芽酚紫红色 +3FeH+ 分子重排 N H C N H 2 H O O H O HN HCH 2 N O O C H 3 O H C H O O O C H 2 O H O H O H N H N H N H C H 3 H 2 O N a O H O O O H C H 3 O O C H 3 F e 3 + H + O F e 3 3 + / 紫红 麦芽酚 链霉胍特有反应 橙红 羟基喹啉 链霉胍链霉素 次溴酸钠 - - 8 OH （ 或 -萘酚 ） N O H 8-羟基喹啉 坂口反应 （ 五 ） -萘酚 O H O N B r R N H C O N H （ 六 ） -24SO 反应 白 - + B a S OSO BaH+ UV法 （ 七 ） 庆大霉素无 UV吸收 nm max 链霉素 （八）色谱法 （ 1） TLC法：硫酸庆大霉素的鉴别 点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色 对照液 判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位 臵应一致。 点样：供试液 对照液：硫酸链霉素标准品 对照液：硫酸链霉素标准品 + 硫酸 新霉素标准品 + 硫酸卡那霉素标准品 判定法：供试液中主斑点的位臵、颜色、大小 应与对照液 相同， 对照液应显示分离清晰的 3个斑点 否则试验无效。 （ 2） HPLC法：硫酸庆大霉素的鉴别 比较供试液与对照液各组分的保留 时间。 三 、 特殊杂质检查 链霉素杂质 （一） 链霉素 B（甘露糖链霉素） 2. 方法 TLC中的对照品法（ BP） 1. 来源 反应中间体 对微生物的活性无明显差异 毒副作用和耐药性不同 发酵菌种不同 工艺差别 C组分比例 不一致 规定控制各组分的相对百分含量 ChP USP BP JP 庆大霉素 C组分的测定 （ 二 ） + + . pH 吲哚衍生物 巯基醋酸 邻苯二醛 氨基 max = 330nm 衍生化原理 1. 1-烷基硫代 -2-烷基 异吲哚衍生物 R N H 2 + + H S C H 2 C O O H O H - C H O C H O N R S C H 2 C O O H RP HPLC 方法 2. 规定 C1 2550% C1a 1540% C2a +C2 2050% 计算 3. % AAAA A %A CCCC i i aa + 峰面积归一化法 四 、 含量测定 微生物检定法 各国药典主要采用 HPLC法 常用于体内药分 返 回 2 C H 3N R R 3 H O H C O N H 2 O O H O HOO H R 2 R 1 第四节 四环素类抗生素 A B C D 2 C H 3N R R 3 H O H C O N H 2 O O H O HOO H R 2 R 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 2 C H 3N H O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 H O 四环素 （ TC） tetracycline 2 C H 3N H O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 H O C l 金霉素 (CTC) chlortetracycline 氯四环素 2 C H 3N H O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 H O O H 土霉素 (OTC) oxytetracycline 氧四环素 2 C H 3N H O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 O H 多西环素 (DOXC) doxycycline 脱氧土霉素 美他环素 （ METC） metacycline H O H C O N H 2 O O H O HOO H N C H 3 2 O HC H 2 2 C H 3N R R 3 H O H C O N H 2 O O H O HOO H R 2 R 1 一、 结构与性质 两性 （一） 1. 与酸、碱均能成盐 2. 强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性 二甲胺基 弱碱性 与金属离子生成有色配位化合物 Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV和荧光性质 （ 三 ） 与金属离子络合 （ 四 ） pH3 7.5 荧光 （二） 旋光性 H O H O C a O O O O H O H O O 不稳定性 （五） 1. 差向异构化 差向金霉素 差向四环素 金霉素 四环素 - - 2 pH 淡黄 黑 蓝色荧光 O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 H C H 3 2 N H O 差向四环素 2C H 3N H O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 H O 2 C H 3N H O H C O N H 2 O O H O HOO H R 2 R 1 H O （ 土霉素、多西环素不易差向异构化 ） 2. 降解反应 （ 1） 酸性下降解 max = 445nm max = 435nm 橙黄色 脱水金霉素 脱水四环素 金霉素 四环素 pH 2C H 3N H O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 H O N C H 3 2 H O H C O N H 2 O O H OO H C H 3 O H 脱水四环素 2C H 3NH O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 H O p H 2 6 p H 2 6 TC O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 H C H 3 2 N H O ETC N C H 3 2 H O H C O N H 2 O O H OO H C H 3 O H ATC N2C H 3 O H C O N H 2 O O H O H O H O C H 3 H EATC p H 2 p H 2 （ 2） 碱性下降解 异四环素 四环素 - OH H O H C O N H 2 O O H O HOO H C H 3 O N C H 3 2 二 、 鉴别试验 浓 H2SO4反应 （ 一 ） 黄色 朱红色 绿 蓝 深紫色 盐酸多西环素 盐酸土霉素 盐酸金霉素 盐酸四环素 SO H 盐酸美他环素 橙红色 FeCl3反应 （ 二 ） 褐色 橙褐色 深褐色 红棕色 盐酸多西环素 盐酸土霉素 盐酸金霉素 盐酸四环素 FeCl TLC法 （ 三 ） 盐酸土霉素的鉴别 HPLC法 （ 五 ） EDTA 克服痕量金属造成的 拖尾现象 比较保留时间 三 、 特殊杂质检查 4-差向四环素（ ETC） 脱水四环素 （ ATC） 差向脱水四环素 （ EATC） 盐酸金霉素 （ CTC） 有关物质 （ 一 ） HPLC法（ 2000版） 盐酸四环素 四环素有关物质 TLC图 I. 供试液 ( 5 mg/ml) II. ETC ( 0.2 mg/ml) III. ATC ( 0.025 mg/ml) IV. EATC ( 0.025 mg/ml) V. CTC ( 0.1 mg/ml) VI. 混合液 4 0.5 0.5 2 吸收度 （二） nm max 8 、 盐酸四环素 杂质吸收度 取供试品配成每毫升 10mg/ml的溶液 至 4cm的吸收池中 ， 在 530nm处测定 ， 其 吸收度不得超过 0.12。 应严格控制温度和时间 四 、 含量测定 HPLC法 盐酸四环素的测定 系统适用性试验：盐酸四环素、有关 物质及 ATC峰间的 分离度 均应符合要 求。 定量方法：外标法以峰面积计 。 返 回 第五节 抗生素类药物中高分子 杂质的检查 1.高分子杂质 分子量大于药物本身的杂质总称。 蛋白、多肽、多糖或抗生素 与蛋白、多肽、多糖的结合物。主要来自 于发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青 霉噻唑多肽。 药物的自身聚合物，来自于 生产、贮存过程。可引发过敏。 外源性杂质 内源性杂质 3.高分子杂质的质控方法 （ 1）凝胶色谱法测定高分子杂质：使高分子杂质 与药物分离。 （ 2）高分子杂质的控制方法 -自身对照外标法 原理 ：测定在 Kav=0处 药物缔合物的峰响应 指标 样品中高分子杂质的响应指标 按外标法计算，得样品中高分子杂质 相当于药物本身的相对含量。 （ 3）高分子杂质的分析方法 简单测定系统：葡聚糖凝胶 G-10（ 40 120m ）柱 . HPLC系统 :葡聚糖凝胶 G-10柱 . 返 回 练习与思考 A型题 1. 硫酸链霉素 、 硫酸青大霉素的鉴别方法是 A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C. 茚三酮反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E. 双缩脲反应 2. 青霉素钠 中国药典 规定的含量测 定方法为 A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.汞量法 B型题 A。 焰色反应 B. 硫色素反应 C.硝酸反应 D. 三氯化锑反应 E. 麦芽酚和坂口反应反应 1.青霉素钠 2. 硫酸链霉素 3. 维生素 B1 4. 维生素 A A E B D X型题 1. 用汞量法测定的药物有 A。 青霉素钠 B. 青霉素 V钾 C. 维生素 C D. 青霉素 V钾片 E. 维生素 C注射液 2. 可用微生物法测定含量的药物有 A 硫酸链霉素 B. 硫酸青大霉素 C. 罗红霉素 D. 青霉素钠 E. 青霉素 V钾 返 回
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