邻二氮菲分光光度法测铁722型分光光度计

邻二氮菲分光光度法测铁 F e N N 3 2 + 一、实验目的 学习分光光度法主要测量条件的选择。 掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的方法。 了解 721型（或其他型号）分光光度计的构 造和学习使用方法。 二、实验原理 分光光度法测定物质含量时的主要测量条 件是通过吸收曲线的测绘而选择的入射波长。 邻二氮菲是测定微量铁的一种较好的试剂， 反应式如下： F e N N 3 2 + N N 3F e 2 + + 2 F e 3 + + 2 N H 2 O H = 2 F e 2 + + N 2 + 2 H 2 O + 2 H + F eNN 3 2+ 配合物 lgK稳 =21.3，摩尔吸光系数 (510)=1.1 104 测定时 pH=5较适宜。酸度高时，反应速度慢， 酸度太低，亚铁离子易水解，影响测定。 三、仪器与试剂 仪器： 722（或其他型号）型分光光度计、容 量瓶、吸量管。 100mg/ml铁标准溶液、 10 mg/ml铁标准溶液、 10%盐酸羟胺（临时配置）、 0.1%邻二氮杂 菲溶液（新配置）、 1mol/L醋酸钠溶液、铁 未知液。 四、实验操作步骤 1 10 ug/mL铁标准使用液和水样的配制 用移液管移取 100 ug/mL的铁标准储备液 10.00 mL，置于 100mL容量瓶中，加入 2 mL 6 molL HCl，用蒸馏水稀释至 刻度，摇匀。 2标准系列的配制 用刻度移液管分别移取上一步骤配制的铁标准使用溶液（ 10ug/mL）： 0.0、 1.0、 2.0、 4.0、 6.0、 8.0、 10.0 mL依次放入 7只 50mL容量瓶中， 分别加入 10%盐酸羟胺 溶液 1.0 mL，稍摇动，再加入 0.1%邻二氮菲 溶液 2.0 mL及 Hac-NaAc缓冲溶液 5 mL，稀释至刻度，充分摇匀。 四、实验操作步骤 3.测量条件实验 吸收曲线的测绘： 取上述标准系列中铁标准溶液用量为 6.0 mL的显色溶液，在分光光度计上， 从波长 440nm开始，以含铁标准溶液 为 0.0 mL的试液为参比，每隔 20nm测 定一次吸光度 A值。当临近最大吸收波 长附近时应每间隔 5 10nm测定一次 A 值。 以波长为横坐标，吸光度为纵坐标制 出吸收曲线，从吸收曲线上确定最大 吸收波长（ max ). A 4.铁含量的测定 标准曲线的绘制： 1 2 3 4 5 6 10 mg/ml 铁标准溶 液 参比 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml 6 ml 以不加铁标准 溶液的试液为 参比液，上一 步骤所选择的 最大吸收波长 为测定波长， 依次测定标准 系列中各溶液 的吸光度 A值。 以铁的质量浓度为横坐标， A值为纵坐标，绘制标准曲线。 5水样微量铁的测定 准确移取 5 10mL（以所测吸光度在标准曲线范围内为宜） 未知试样溶液，按同样步骤和方法测定吸光度 A值。在标 准曲线上查出所含铁的浓度，计算水样中铁的含量。 五、结果与数据处理 1.吸收曲线的绘制： 将各波长及相应的吸光度 列出，用坐标纸绘制吸收 曲线。吸光度最大时相应 的波长即为最大吸收波长， 并在图上标出。 A max 以铁含量为坐标，吸光度为纵坐标 在坐标纸上绘制标准曲线； 由未知液的吸光度在标准曲线上查 出 5ml未知液中的铁含量； 计算每毫升未知液中含多少克铁。 SP-72型可见分光光度计 SP-72型分光光度计 1仪器性能的检查 （ 1）接通电源，让仪器预热至少二十分钟，使仪器进入热稳定工 作状态。 （ 2）仪器接通电源后，即进入自检状态。显示器实时显示仪器的 自检状态。当仪器发生故障时，显示器会自动显示故障位置。自检结 束，仪器自动寻找光源最大能量，查找完毕，仪器自动停留在 546nm 处，并自动调 100%T和 0%T。显示器上显示 546nm和“ 100.0%T”。 仪器此时进入测试状态。 2使用方法 （ 1）按“方式键”（ Mode）将测试方式设置为吸光度方 式。 （ 2）按“波长设置”键设置想要的分析波长，如 340nm。 （ 3）将参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中。注意比色 皿内的溶液面高度不应低于 25毫米，大约 2.5毫升；被测试的 样品中不能有气泡和漂浮物。 （ 4）打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿 槽中，盖上样品室盖。注意：一般情况下，参比样品放在样品 架的第一个槽位中；仪器所附的比色皿，其透视率是经过测试 匹配的，未经匹配处理的比色皿将影响样品的测试精度；比色 皿的透光部分表面不能有指印和溶液痕迹。 （ 5）将参比溶液推入光路中，按“ 100%T”键调整零吸光 度。 （ 6）将被测溶液推或拉入光路中，此时，显示器上所显示 的是被测样品的吸光度数值。