培养基的灵敏度检查操作规程

细心整理造就基灵敏度检查操作规程1 目 建立造就基灵敏度试验操作规程，是为了标准、统一造就基灵敏度检测，确保微生物检测精确、平安进展。2 适用范围 本标准适用于造就基灵敏度检查。3 责 任 者 QC检验人员。4 内 容4.1 试验设备及用具：无菌造就皿、无菌刻度吸管或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、酒精灯等。4.2 运用菌株：EP检测用ATCC菌株：金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 6538大肠埃希菌Escherichia coli ATCC 8739沙门氏菌Salmonella enterica subsp ATCC 14028黑曲霉Aspergillus niger ATCC 16404造就基灵敏度检测所用菌株传代次数不得超过5代，并接受适宜菌种保藏技术，以保证试验用菌株生物学特性。4.3 检测频率每批新买造就基配制、灭菌后均应做灵敏度测试。4.4 操作方法4.4.1 参照标准造就基用已经过试验证明合格造就基或购置有质量证书成品平皿造就基作为参照标准造就基。4.4.2 试验造就基 将琼脂类试验造就基加热溶化后，冷却至45左右，以无菌方式在无菌造就皿中注入1520mL，备用。液体类造就基干脆运用。4.4.3 菌悬液制备4.4.3.1 细菌菌悬液制备取细菌斜面造就物1耳匙接种在酪蛋白大豆消化肉汤造就基中30-35造就18-24h，取上述造就物用无菌水按10倍系列稀释，分别制成10-7-10-8菌悬液备用。4.4.3.2 霉菌菌悬液制备取黑曲霉斜面造就物参与无菌水4mL制成孢子悬液，取上述孢子悬液按10倍系列稀释，分别制成10-6-10-7菌悬液备用。4.4.4 造就基生长促进试验4.4.4.1 琼脂类造就基生长促进试验每株菌用2个试验造就基平皿，用外表涂布法在每个平皿外表接种0.1-0.5mL菌悬液约10-100CFU试验菌，同时用2个参照标准造就基平皿做参照，接种一样量菌悬液试验，在规定温度下造就，取出平皿点计菌落数。试验造就基上微生物数量应为参照造就基上微生物生长数量70%-150%范围内。注：每种造就基生长促进试验具体菌株见附录14.4.4.2 液体类造就基生长促进试验 每株菌用2管或瓶试验造就基，接种0.1-0.5mL菌悬液约10-100CFU试验菌，同时用2个参照标准造就基或用确定合格酪蛋白大豆消化琼脂平皿做参照，接种一样量菌悬液试验，在规定温度下造就，比照或计数，在规定时间内能生长菌落为合格。4.4.5 造就基生长促进和抑制特性试验4.4.5.1 液体造就基生长促进特性试验 接种0.1-0.5mL菌悬液约10-100CFU试验菌于必需量适合造就基。在特定温度下造就，造就时间不超过试验中规定最短期限。与参照标准造就基获得微生物生长相比，接种微生物生长应明显。4.4.5.2 固体造就基生长促进特性试验接受外表涂布法，在每一块平皿上接种0.1-0.5mL菌悬液约10-100CFU试验菌适宜微生物。在特定温度下造就，造就时间不长于试验中规定最短期限。接种微生物生长与参照标准造就基获得微生物生长相当。4.4.5.3 液体或固体造就基抑制特性试验用适当造就基接种至少100 CFU适宜微生物。在特定温度下造就，造就时间至少为试验中规定最长期限。无受试微生物生长。