蜂蜜的抗菌活性研究文献讲解课件

LOGO矢车菊蜂蜜中标记的化合物及矢车菊蜂蜜中标记的化合物及其过氧化物抗菌活性其过氧化物抗菌活性ContentsIntroduction1Materials and methods2Results3 3Discussion4 4Introductionv矢车菊菊科矢车菊属一年生或二年生草本植物，高可达70厘米，其中紫、蓝色最为名贵。矢车菊的故乡在欧洲。它被德国奉为国花。v矢车菊蜂蜜此种即是一种观赏植物，同时也是一种良好的蜜源植物。芳香浓郁，回甘微苦。边花可以利尿，全草浸出液可以明目。矢车菊蜂蜜含有较高的过氧化氢(0.50.9 mM/h)和活性抗菌因子，其蜜也被用于治疗皮肤炎症。Introduction粘度渗透压过氧化氢酚类酸度蜂蜜抗菌活性Materials19种蜂蜜：金合欢，荞麦，栗子，三叶草，矢车菊，桉树，石楠，薰衣草，酸橙，麦卢卡，橙色，松树，油菜花，迷迭香，鼠尾草，向日葵，百里香，和蜜露。95种蜂蜜样品Methods2g蜂蜜溶于3mL的2的NaCl中调节pH到1固相萃取最后的体积调节到5mL固相萃取按Chromabond HR-X试剂盒操作在C18的柱子中进行UPLC分离用0.1%的甲酸和甲醇洗脱通过质谱检测进行分析Methods定量试验多酚和降异戊二烯化合物的定量数据通过MS检测获得建立蜂蜜模型，每个蜂蜜模型中含有40葡萄糖，40果糖，20的水将蜂蜜模型进行固相萃取，然后把标准混合物掺入提取物中。溶于甲醇通过选择反应检测（SRM）和SPE的方法来进行定量Methods通过SRM分析矢车菊中化合物的保留时间、分子离子、SRM转换数、和UV最大值通过SPE分析的一些化合物的线性范围、相关系数、检测限、定量限和回收率。Methods液相萃取和液相萃取和HPLCHPLC分离分离未知化合物化合物目的：验证未知的多酚和降异戊二烯化合物目的：验证未知的多酚和降异戊二烯化合物步骤提取提取提取提取800g800g车矢菊蜂车矢菊蜂车矢菊蜂车矢菊蜂蜜蜜蜜蜜用乙酸乙用乙酸乙用乙酸乙用乙酸乙酯萃取酯萃取酯萃取酯萃取通过通过通过通过HPLCHPLC分离分离分离分离用馏分收集用馏分收集用馏分收集用馏分收集器收集器收集器收集器收集MethodsHPLC-MS分析为了确定分离化合物的准确质量液相色谱仪HPLC条件如下：流速0.3毫升/分钟；溶剂A，H 2 O（0.1甲酸）；溶剂B，乙腈（0.1甲酸）。梯度洗脱程序：0-1分钟，10B;；1-6分钟，10-90B;；6-7分钟，90B;；7-8分钟，90-100；平衡12分钟。质谱数据：获得范围：75-600m/z，获得速率：1光谱/s，场均三瞬变。源参数：干燥空气温度，200；干燥空气流速，8L/min；雾化器压力，0.2MPa；端板偏置电压，500伏；毛细管电压，4500伏；传送时间，30-50微秒。Methods光度法测定过氧化氢光度法测定过氧化氢从山葵中配制母液20 g/mL，领联茴香胺50 g/mL放入10mM磷酸二氢钠缓冲液中，pH调至6.5将一克蜂蜜溶解在5毫升二次蒸馏水并在37下进行60分钟为了释放过氧化氢675微升的过氧化物酶/邻联茴香胺的溶液加入到200微升的培养的蜂蜜水溶液中，用来讲解过氧化氢混合物在室温下孵育5分钟Results1、通过UPLC-PDA分析的资料表征矢车菊蜂蜜2、矢车菊蜂蜜中有用的标记化合物分析3、单植物源蜂蜜中过氧化氢的含量Results通过通过UPLC-PDAUPLC-PDA分析的资料表征矢车菊蜂蜜分析的资料表征矢车菊蜂蜜图1：=245nm时，矢车菊蜂蜜通过UPLC分析后的色谱图。1、7-羧基光色素；2、光色素；3/4、Z/E-3-氧代-反式-紫罗兰酮；5、3-氧代-紫罗兰酮不同种的矢车菊蜂蜜表现出了很大的相似性罗马尼亚德国Results电喷雾质谱最强特征峰光色素（二甲基异咯嗪）HPLCMSNMR7-羧基光色素（Z）3-氧代-反式-紫罗兰酮（E）3-氧代-反式-紫罗兰酮3-氧代-紫罗兰酮ResultsResults定量矢车菊蜂蜜中化合物含量，包括最大值、最小值、平均值和系数变化Results矢车菊蜂蜜中有用的标记化合物分析矢车菊蜂蜜中有用的标记化合物分析图2：相较18种单植物源蜂蜜来说，矢车菊中五种化合物的分析。1、7-羧基光色素；2、光色素；3/4、Z/E-3-氧代-反式-紫罗兰酮；5、3-氧代-紫罗兰酮矢车菊蜂蜜中这5种化合物适合用来作为标记物Results蜂蜜抑菌机理：蜜蜂的咽腺将葡萄糖氧化酶添加到花蜜中催化葡萄糖转化为葡糖酸和过氧化氢释放的过氧化物可防止未成熟的蜂蜜遭到破坏蜂蜜成熟过程中，稀释的蜂蜜可防止葡萄糖氧化酶失活过氧化氢可促进血液增加，刺激伤口愈合单植物源蜂蜜中过氧化氢的含量单植物源蜂蜜中过氧化氢的含量Results单植物源蜂蜜中过氧化氢的含量单植物源蜂蜜中过氧化氢的含量图3：1小时后，19种单植物源蜂蜜中过氧化氢的含量。Discussion总之：矢车菊蜂蜜区别于其它单植物源蜂蜜的标记化合物是7-羧基光色素；光色素；Z/E-3-氧代-反式-紫罗兰酮；3-氧代-紫罗兰酮。它的葡萄糖氧化酶含量越高，过氧化氢酶含量就越低，则其过氧化氢含量高，从而抗菌作用就越强。LOGO