PCR方法联合酶联免疫吸附试验检测肺炎支原体感染的临床价值

PCR方法联合酶联免疫吸附试验检测肺炎支原体感染的临床 价值摘要：目的：观察和评价分析肺泡盥洗液PCR方法联合酶联免疫吸附试验（ELISA）在肺炎支原体感染检测中的临床意义。方法：选取对我院2014年12月 2016年7月期间住院的200例获得性肺炎病人分别采用血清ELISA方法和肺泡 盥洗液PCR方法检测肺炎支原体（MP），并对两种方法检验结果的敏感性和差 异性。结果：血清ELISA法和肺泡盥洗液PCR法检测肺炎支原体感染阳性20例和 18例敏感性分别为83.33%、75.0%，通过两组方法肺炎支原体感染阳性180例和 182例，检测特异性分别为98.33%、97.25%。两种方法在检测肺炎支原体感染中 敏感性及特异性的差异无统计学意义（P0.05）。结论：通过采用泡盥洗液PCR 方法联合酶联免疫吸附试验（ELISA）检测可提高诊断阳性率，对早期诊断支原体 肺炎有重要临床意义，值得临床推广应用。关键词：PCR方法；酶联免疫吸附试验；肺炎支原体感染支原体肺炎（mycoplasmal pneumonia ）是由肺炎支原体引起的急性呼吸道感 染伴肺炎，过去称为原发性非典型肺炎。肺炎支原体进人人体常导致上呼吸道带 菌状态或感染，部分患者可发生多种类型的肺炎、胸膜炎。本病潜伏期23周， 起病缓慢，约1/3病例无症状。可以气管一支气管炎、肺炎、耳鼓膜炎等的形式 出现，而以肺炎最重1。选取对我院2014年12月一2016年7月期间住院的200 例肺炎支原体感染患者进行临床观察和分析，现报告如下。1资料及方法1.1 一般资料选取对我院2014年12月一2016年7月期间住院的200例成人社区获得性肺 炎病人，其中男病人128例，女病人72例，年龄20-75岁，平均年龄46.2岁。1.2诊断标准肺炎支原体肺炎的诊断标准是如下2。（1 ）青少年或老年患者于发病季节 出现顽固的刺激性干咳，发热体征不明显，常规应用青霉素和头孢菌素等B-内酰 胺类抗生素无效，应考虑肺炎支原体肺炎可能。（2）本病有自限性，多数病例 不经治疗可自愈。临床表现轻、影像学表现重。仅极少数患者出现严重的肺外表 现。（3）血清肺炎支原体抗体检查有助于进一步确诊，如急性期IgM阳性，恢 复期IgG滴度1： 64或4倍升高。（4）呼吸道标本培养分离出肺炎支原体是诊 断的金标准，但检出率低，技术条件高，所需时间长。（5）本病应与病毒性肺 炎、肺炎球菌肺炎、肺炎支原体肺炎、军团菌肺炎、真菌性肺炎和肺结核等鉴别。1.3检验方法病人分别采用血清ELISA方法和肺泡盥洗液PCR方法检测肺炎支原体（MP）， 并对两种方法检验结果的敏感性和差异性。模板DNA:从公司购买的试剂： 10xPCR 缓冲液：dNTP 混合物（2.5mmol/L）； Taq DNA 聚合酶（5IU/W）；引物 （10pmol/W）。器材：DNA扩增仪；PCR小管；移液器及枪头。按试剂盒说明书 的要求准备实验中需用的试剂。先将针对IgM的第二抗体（如羊抗人IgM肛链抗 体）连接于固相载体，用以结合（捕获”）样品中所有IgM （特异或非特异）， 洗涤除去IgG等无关物质，然后加入特异抗原与待检IgM结合；再加入抗原特异 的酶标抗体，最后形成固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体复合物，加酶底物作用显色 后，即可对样品中待检IgM是否存在及其含量进行测定1.4统计学处理采用数理统计软件SPSS19.0对收集数据进行整理与统计分析，计量资料运用 标准差表示，进行t检验，计数资料运用表示，进行卡方检验，P0.05）。表1 200例获得性肺炎支原体检测结果3讨论酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）是在酶免疫 技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的免疫测定技术，为固相 酶免疫测定。其基本原理是将已知抗原或抗体结合到某种固相载体表面并保持其 免疫活性，测定时把受检标本和酶标抗原或抗体按一定程序与固相载体表面的抗 原或抗体起反应形成抗原抗体复合物。反应后，通过洗涤的方法使抗原抗体复合 物与其他游离物质分离。通过抗原抗体复合物结合在固相载体上的酶量与标本中 受检物的量成一定的比例。加入底物显色，根据颜色反应深浅及其吸光度值的大 小进行定性或定量分析。ELISA法常用的标记酶是辣根过氧化酶（HRP）和碱性磷 酸酶（ALP），相应的底物分别为邻苯二胺（OPD）和对硝基苯磷酸盐，前者显色 为黄色，后者为蓝色。聚合酶链式反应（PCR）方法是对呼吸道标本进行DNA扩 增。PCR技术：当前研究得最多，PCR方法不仅能快速检出LP，而且还能检出非 嗜肺军团菌。本方法特异性高，但因某些患者标本中存在PCR抑制物，敏感性比 培养低。本组资料显示，通过采用泡盥洗液PCR方法联合酶联免疫吸附试验（ELISA）检测可提高诊断阳性率，对早期诊断支原体肺炎有重要临床意义，值得 临床推广应用。参考文献：1 马勇，李莉.金标免疫层析试验与酶联免疫吸附试验在肺炎支原体检测中的 比较分析J.世界最新医学信息文摘，2015，A0： 139+6.2 李晓丽，孔宪明，徐凌云，薛海燕，曹兰芳.可溶性PD-1和调节性T细胞 在肺炎支原体感染和哮喘的实验研究J.现代生物医学进展，2016，07： 1205- 1208.3 吴建荣，骆益华，骆勇.2595例呼吸道感染儿童肺炎支原体抗体检测结果 J.浙江预防医学，2016，05： 518-519.刘晓丽，张秀芝，蔡军，孙长义.间接免疫荧光和酶联免疫吸附试验对嗜肺 军团菌的检测效果分析J.现代预防医学，2016，11： 2041-2043.5于红亮.被动凝集法与酶联免疫吸附试验检测肺炎支原体感染患者的价值J. 中国民康医学，2015，09： 82-83.