放线菌的分离

放线菌的分离(1) 注意土样在用之前要风干处理20天以上，以除去大部分的细菌。(2) 注意在培养基中添加重格酸钾适量(1) 取体积为300ml的高氏一号培养基，加入0.1%的重格酸钾15mL，使之终浓度为50ppm, 摇匀，倒平板，待用。(2) 取土样5g，摊平于大号培养皿上，在恒温干燥箱中120C干热处理1h。(3) 土样热处理后，加入装有45mL无菌水和少量玻璃珠的三角瓶中，加入0.5mL的笨酚， 室温下振荡30分钟，静止5分钟，取上清液用无菌水稀释10倍。同时另取土样5g，不加 热和笨酚处理，余步骤同上，作为对照。(4) 用移液管分别吸取原液和10倍稀释液各0.1ml标志稀释倍数的平板上，涂抹均匀，倒 置，28C培养。(5) 培养1014d，观察比较不同处理方法的生长情况、菌落特征。挑取红色，无气生菌丝 的小菌落以及其它菌落形态菌株接种斜面，进一步用于形态观察和鉴定。高氏一号培养基配方：可溶性淀粉(20g)，KNO3 (1g)，K2HPO4 (0.5g)，MgSO4- 7H2O (0.5g)，NaCl (0.5g)，FeSO4- 7H2O (0.01g)，琼脂 20g，pH=7.4-7.6 (1L)关于LB培养基的问题：LB培养基的配方如下：胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract) 5g/L氯化钠(NaCl) 10g/L另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(LB固体培养基倒板1. 配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2. 抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55C的水 浴中，待培养基温度降到55C时(手可触摸)加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。(抗生素怎么选)3. 倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在 紫外下照10-15分钟。4. 保存：用封口胶封边，并倒置放于4C保存，一个月内使用改良LB培养基：蛋白胨10g;酵母粉5g；氯化钠10g；琼脂，18g；水1000mL；调至pH 7.27.4。