加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定

加味香连丸的定性鉴别及加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定黄连生物碱的含量测定一、仪器与药品一、仪器与药品1 1）层析缸）层析缸 2 2）三用紫外分析仪）三用紫外分析仪3 3）喷雾瓶）喷雾瓶 4 4）吹风机）吹风机5 5）紫外分光光度计）紫外分光光度计6 6）小层析柱：高）小层析柱：高13cm,13cm,内径内径8mm8mm，2 2个个 7 7）中性）中性AlAl2 2O O3 3(150200(150200目目)8 8）滴管）滴管9 9）加味香连丸样品加味香连丸样品 1010）盐酸小檗碱对照品盐酸小檗碱对照品、黄连、木香对照药材黄连、木香对照药材1111）95%95%乙醇乙醇1 1、定量用样品的净化、定量用样品的净化1 1）定容：将索氏提取样品定容到）定容：将索氏提取样品定容到25mL25mL。2 2）净化）净化A A、装柱：取、装柱：取2 2个个高高13cm13cm、内径内径8mm8mm的的Al2O3Al2O3柱柱，平行装柱。分别垫上少许棉，平行装柱。分别垫上少许棉花，装入中性氧化铝，高度左右。花，装入中性氧化铝，高度左右。1 1个作空白，另个作空白，另1 1个加入样品。个加入样品。B B、加样与洗脱：将两根小柱下分别接上、加样与洗脱：将两根小柱下分别接上10mL10mL容量瓶，样品用小柱中容量瓶，样品用小柱中精密精密加入加入样品液样品液，待样品完全被填料吸收后，加入，待样品完全被填料吸收后，加入95%EtOH95%EtOH至洗脱完全至洗脱完全。空白。空白用小柱中的填料直接用用小柱中的填料直接用95%95%乙醇平行洗脱。接近乙醇平行洗脱。接近10mL10mL时停止洗脱，分别定时停止洗脱，分别定容到容到10mL10mL。C C、含量测定：采用外标一点法于、含量测定：采用外标一点法于350nm350nm 测定含量测定含量供试品紫外测定：空白采用自制空白供试品紫外测定：空白采用自制空白对照品紫外测定：空白采用对照品紫外测定：空白采用95%95%乙醇，对照品浓度：乙醇，对照品浓度：D D、计算（、计算（100g100g干品中含有多少克总生物碱）干品中含有多少克总生物碱）二、实验步骤二、实验步骤A A供供/A/A标标 =C C供供/C/C标标约约0.1g0.1g25mL25mL0.5mL0.5mL10mL10mL含量含量(%)=(%)=C C供供D Dm m 100%100%1 1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别1 1）黄连的鉴别）黄连的鉴别取本品取本品60mg60mg，研细，加，研细，加乙醇乙醇5ml5ml，置水浴，置水浴中加热回流中加热回流1515分钟，滤过，滤液补加乙分钟，滤过，滤液补加乙醇使成醇使成5ml5ml，作为，作为供试品溶液供试品溶液。另取黄连。另取黄连对照药材对照药材50mg50mg，同法制成，同法制成对照药材溶液对照药材溶液。再取再取盐酸小檗碱对照品盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每，加乙醇制成每1ml1ml含的溶液。含的溶液。用点样用毛细管分别取左用点样用毛细管分别取左右，右，分别点于同一硅胶分别点于同一硅胶G G薄层板上，以薄层板上，以乙乙酸乙酯：氯仿：甲醇：氨水：二乙胺（酸乙酯：氯仿：甲醇：氨水：二乙胺（8 8：2 2：2 2：1 1：）：）为展开剂，展开，取出，晾为展开剂，展开，取出，晾干，置干，置紫外光灯（紫外光灯（365nm365nm）下检视）下检视。供试。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。黄色荧光斑点。二、实验步骤二、实验步骤 O O O O O O O O 小小檗檗碱碱样样品品黄连黄连对照对照药材药材例例1.5cm1.5cm圆形圆形点样点样饱和饱和10min10min1 1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别2 2）木香的鉴别）木香的鉴别取本品，研细，加取本品，研细，加乙醚乙醚5ml5ml，放置，放置2 2小时，小时，时时振摇，滤过，滤液挥去乙醚，残渣时时振摇，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯使溶解，作为加醋酸乙酯使溶解，作为供试品溶液供试品溶液。另取木香对照药材，加乙醚另取木香对照药材，加乙醚5ml5ml，同法制，同法制成成对照药材溶液对照药材溶液，用点样用毛细管分别用点样用毛细管分别取左右取左右，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶G G薄层板上，薄层板上，以以环己烷：丙酮（环己烷：丙酮（1010：3 3）为展开剂，展为展开剂，展开，取出，晾干，喷以开，取出，晾干，喷以5%5%香草醛硫酸溶香草醛硫酸溶液液，在，在105105烘约烘约5 5分钟分钟。供试品色谱中，。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色至蓝紫色斑点。同的紫红色至蓝紫色斑点。二、实验步骤二、实验步骤 O O OO O O 加味香连加味香连丸针对木丸针对木香提取液香提取液木香木香对照对照药材药材例例光度计模式操作教程光度计模式操作教程开机自检通过后，经过开机自检通过后，经过1515分钟的预分钟的预热，系统自动进入主菜单。热，系统自动进入主菜单。波长：波长：546.0nm 09：21：19取消取消下翻下翻选取选取D2W系统主菜单系统主菜单光度计模式光度计模式 定量测量定量测量光谱扫描光谱扫描动力学测量动力学测量DNA/蛋白质测量蛋白质测量测试波长测试波长当前时间当前时间氘灯点亮显示氘灯点亮显示钨灯点亮显示钨灯点亮显示波长：波长：546.0nm 09:21:19取消取消下翻下翻选取选取D2W系统主菜单系统主菜单光度计模式光度计模式定量测量定量测量光谱扫描光谱扫描动力学测量动力学测量DNA/DNA/蛋白质测量蛋白质测量点击点击“选取选取”功能键，或点功能键，或点 ，进入光度计模式。，进入光度计模式。ENTER波长：波长：546.0nm I:19669 09:21:19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W0.0 0 0 A b s首先选择测量所需要的波长。首先选择测量所需要的波长。点点 进入进入。GOTO波长：波长：546.0nm I:19669 09:21:19D2W0.0 0 0 A b s 请输入波长：请输入波长：_使用数字键和小数点输入所需要的波长。使用数字键和小数点输入所需要的波长。波长：波长：546.0nm I:19669 09：21：19D2W0.0 0 0 A b s请输入波长：请输入波长：输入完毕后，点击输入完毕后，点击 进行确认。进行确认。ENTER输入的测量波长输入的测量波长波长：波长：350.0nm I ：19669 09:21:19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W0.0 0 0 A b s波长将自动调节到所设置的波长，系统将自动校零。波长将自动调节到所设置的波长，系统将自动校零。波长已调整波长已调整波长：波长：350.0nm I:19669 09:21:19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W样品浓度单位设定键样品浓度单位设定键0.0 0 0 A b s使用四个方向键来选择设置单位模式，选择完毕后，使用四个方向键来选择设置单位模式，选择完毕后，点点 确认。确认。ENTER波长：波长：350.0nm I ：19669 09：21：19D2W0.0 0 0 m g/L 请输入含量单位：请输入含量单位：mg/L使用四个方向键来选择浓度单位，选择完毕后，点使用四个方向键来选择浓度单位，选择完毕后，点 确认。确认。ENTER波长：波长：450.0nm I:19669 09:21:19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W0.0 0 0 A b s设定测量模式：吸光度模式、透过率模式、浓度模式。设定测量模式：吸光度模式、透过率模式、浓度模式。点击点击“模式模式”功能键进入。功能键进入。“模式模式”功能键功能键吸光度模式：显示样品的吸光度；吸光度模式：显示样品的吸光度；透过率模式：显示样品的透过率；透过率模式：显示样品的透过率；含量模式：含量模式：根据系数法根据系数法C=KAC=KA，直接显示，直接显示试样浓度。试样浓度。波长：波长：350.0nm I:19669 09:21:19D2W0.0 0 0 A b s请输入模式：请输入模式：吸光度吸光度使用四个方向键来选择测量模式，选择完毕后，使用四个方向键来选择测量模式，选择完毕后，点点 确认。确认。ENTER波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W0.0 0 0 m g/L模式已变为浓度模式模式已变为浓度模式浓度测定的原理是公式浓度测定的原理是公式C=KA。C浓度浓度 A吸光度吸光度 K吸收系数吸收系数 K值设定有两种方法：值设定有两种方法：一是选择一是选择“因子因子”功能键直接输入功能键直接输入K值；值；二是选择二是选择“标样测量标样测量”，测定吸光度，输入浓度，求出，测定吸光度，输入浓度，求出K值值波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W0.0 0 0 m g/L选择选择“因子因子”模式，直接输入模式，直接输入K值。值。吸收系数设定键吸收系数设定键波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0.0 0 0 m g/L 请输入请输入F因子：因子：使用数字键和小数点输入所需要的使用数字键和小数点输入所需要的K值。值。K值来源：以前实验所做、查询相关文献。值来源：以前实验所做、查询相关文献。波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0.0 0 0 m g/L 请输入请输入F因子：因子：输入完毕后，点击输入完毕后，点击 进行确认。进行确认。ENTER输入的吸收系数输入的吸收系数K波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W0.0 0 0 m g/LF 因子因子 设定的吸收系数设定的吸收系数K波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W0.0 0 0 m g/LF 因子因子 测量浓度已知样品的浓度，输入浓度，由机器自动求出测量浓度已知样品的浓度，输入浓度，由机器自动求出K值。值。选择选择“标样测量标样测量”功能键。功能键。进入浓度法求进入浓度法求K值值波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0.0 0 0 m g/L 请输入标样含量：请输入标样含量：将标样放入光路中，使用数字键和小数点输入标样的浓度。将标样放入光路中，使用数字键和小数点输入标样的浓度。波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0.0 0 0 m g/L 请输入标样含量：请输入标样含量：输入完毕后，点击输入完毕后，点击 进行确认。进行确认。ENTER输入的标样浓度输入的标样浓度波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W4.0 0 0 m g/LF 因子因子 计算出的吸收系数计算出的吸收系数K标样浓度标样浓度 4.000 波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位设置单位模式模式因子因子标样测量标样测量D2W4.0 0 0 m g/LF 因子因子 输入的标样浓度输入的标样浓度标样浓度标样浓度 4.000