培养基制备的基本方法和注意事项

培1.2.3.4.5.6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17.18.19.20.21.养基制备的基本方法和注意事项培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制 外一般均应尽量收集有关资料加以比较核对再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。2 培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源和各种成份的牌号。最终PH值、消毒的温 度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、 以防发生混乱。3. 培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱.最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完 一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。 完全称取完毕后.还应进行一次检查。4. 培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中， 使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消 毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即 不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化迄至煮沸。如为琼 脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化 过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。5. 培养塞 pH 的初步调整培养基各成分完全溶解后，应进行pH的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，例如，牛 肉浸液约可降低PH0.2.而肠浸液pH却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、 以期能掌握培养基的最终pH，保证培养基的质量。pH调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀 物的析出。6 培养基的过滤澄清液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此 项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应拆叠成折扇成漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破 裂。22.23.24.25.26.27.28.29.30.31.32.33.34.35.36.37.38.39.40.41.42.43.44.琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血 和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清 澄清法。即将冷却至55-60C的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/2，每1000ml 培养基加入1-2个鸡蛋的蛋白.强力振摇3-5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121C加热20分钟、取出趁热以 绒布过滤即可。若能自行沉淀者，亦可静置冰箱中1-2日、吸取其上清液即可。7. 培养基的分装培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3 。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还双用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂抖面培养基时，分装量应以能形成2 / 3底层和1/ 3斜面 的量为恰当。分装容器应予先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml 培养基于一小玻瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。8. 培养基的灭菌一般培养基可采用121C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用 此法灭菌。某些畏热成分，如糖类，应另行配成20% 如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技 术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应从无菌操作技术抽取和 加入于经冷却约 50C 左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60C时，摆置成适当斜面、待其自然凝固。9. 培养基的质量测试每批培养基制备好以后应仔细检查一遍：如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应 挑出弃去。并测定其最终pH。45.将全部培养基放入361C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。46.47. 用有关的标准菌株接种1-2 管或瓶培养基，培养24-48 小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复 接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。48.48. 10. 培养基的保存50.49. 培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过 3 天。 每批培养基均必须附有该批培养基制各记录副页或明显标签。培养基的常规配制程序一、目的要求了解培养基的配制原理。了解培养基常规配制程序。 了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。二、基本原理 正确掌握培养基基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础，由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致 相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无 菌检查等基本环节大致相向。三、实验材科（一）药品待配各种培养的组成成分，琼脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/l （升，统一用大写）HC1溶液。（二）仪器 天平或台秤，高压蒸汽灭菌锅。（三）玻璃器皿 移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。（四）其他物品药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。四、实验内容（一）玻璃器皿的洗涤和包装1玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗， 然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。再用自来水及蒸馏水冲洗，洗刷干净的玻璃器皿 置于烘箱中烘干后备用。2灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包装 培养皿由一盖底组成一套。可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置 于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。(2) 移液管的包装 在移液管的上端塞入小段棉花 (勿用脱脂棉)。它的作用是避免外界及口中杂菌吹入管 内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左有。棉花自身长度约1-1. 5cm。塞棉花时，可 用一外圈拉直的曲别针，将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约 5cm 左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45 度角，折 叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余 纸条，折叠打结，准备灭菌(见图 51 1)。(二) 液体及固体培养基的配制过程1 .液体培养基配制(1) 称量一般可用1/100粗天平称量配制培养基所需的各种药品。先按培养基配方计算各成分的用量，然后进 行准确称量。(2) 溶化 将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻棒搅动，加 热溶解。(3) 定容 待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶 液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。(4) 调pH 一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸， 在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液进行调节。 调节 pH 时，应逐滴加入 NaOH 或 HCl 溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时 用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。(5) 过滤 用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。2. 固体培养基的配制配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1. 5-2)加入，并用玻棒不断搅拌， 以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。(三) 培养基的分装 根据不同需要，可将己配好培养基分装入试管或锥形瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱 脂棉弃去。1. 试管的分装 取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧 夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指 及无名指夹住玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内（图 512）。装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15X150 mm时，液体培养基可分装至试管高度14 左右为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固 体培养基的分装量为管高1/5（约34ml）；半固体培养基分装量为管高的1/3为宜。2锥形瓶的分装用于振荡培养微生物用时，可在250 ml锥形瓶中加入50 ml的液体培养基，若用于制作平板培养基用时，可 在250 ml锥形瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂粉（按2%计算），灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。（四）棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或锥形瓶内空气预 先进行过滤除菌。通常方法是在试管及锥形瓶口加上棉花塞等。1试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从 中央压入团孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞（图 51 3）。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入。棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试 管不下落为准。棉塞的23 在试管内，13 在试管外（图 514）。目前也有采用金属或塑料试管帽代替棉塞。直接盖在试管口上。灭菌待用。 将装好培养基并塞好棉塞或盖好管帽的试管拥成一捆，外面包上一层牛皮纸。用铅笔注明培养基名称及配制日期， 灭菌待用。2锥形瓶棉塞制作 通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用 8层纱布代替 棉塞包在瓶口上。目前也有采用无菌培养容器封口膜直接盖在瓶口，既保证良好通气，过滤除菌又操作简便，故 极受欢迎。在装好培养基并塞好棉塞或包上八层纱布或盖好培养容器封口膜的锥形瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳 捆好，灭菌待用。（五）培养基的灭菌培养基经分装包扎之后，应立即进行高压蒸汽灭菌，100Pa灭菌20min （灭菌条件根据培养基不同有所差异， 含糖培养基105C, 30min）。如因特殊情况不能及时灭菌，则应暂存于冰箱中。（六）斜面和平板的制作1斜面的制作 将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面（图 515）。斜面长 度不超过试管长度12为宜。如制作半固体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至冷凝。2平板的制作将装在锥形瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50C左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿 盖上的冷凝水太多，温度低于50C，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应采用无菌操作，左手拿培养皿，右手拿锥形瓶的底部或试管，左于同时用小指和手掌将棉塞打 开，灼烧瓶口，月左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10-12m1的培养基，迅速盖好皿盖， 置于桌上，轻轻旋转平皿、使培养基均匀分布于整个平皿中、冷凝后即成平板（图 516）。（七）培养基的无菌检查灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好从中取出1-2管（瓶）置于37C恒温箱中培养12天，确定 无菌后方可使用。（八）无菌水的制备在每个250 mL的锥形瓶内装99mL的蒸馏水并塞上棉塞。在每支试管内装4.5m1蒸馏水。塞上棉塞或盖上 塑料试管盖。再在棉塞上包上一张牛皮纸。高压蒸汽灭菌，100 Pa灭菌20分钟。MS培养扯母液的配制讣液成分规定量浓编倍数称取量mg)液体积(ml)咆制1 -J 擀养基吸 取童定容编种 类大KNO31900101W001元NH4NO3165010165001000100MgS()4 - 7H2O370103700KH2POI1701017002CaCl2 2H2O44U10440010001003微量 元AMnSCM - 4H2O22. J1002230100010ZrSO4 - 7H2OS.6100S60H3B( )362100620KI财3100S3Na2MuO4 - 7H2O0.2510025CuSO4.5H2O40.0251002C0CL2.6H2O0.0251002.54铁盐Na2-EDTA37.31003730100010FeSO4.4H2O27.810027805有X物甘氨酸2.010010050010盐酸毗哆醇0.510025盐酸硫钱素0.11005烟酸0.5100256肌酸100100500050010汀蕊i.犬怕兀秦按照使川时高io倘的数值称取,仃別将舛种化合物称虽历除I.対t尤累按照使川时高K）倘的数值称取,仃别将舛种化合物称量历阶CaCl2UI3O 蚀配制外.乱余化合物趾合W 500ml烧拣中扫适量谯tg水溶解，汕废璃棒搅拌促榕.倒入igM容盘瓶中用菱谄水定容至劇度，置小口栢中保存.贴上标签注明优合 物名称（或编号人浓堀倍数.配制日期和配制科姓名* CChQHQ配制同上置于另一小口 瓶中*二微量元刑液的配制技要求液縮100普的数怕称取，分別将各种优合物称城除铁盐 细胞培养基怎样学手绘拯迅容乳iixjuei容柿粧中-片-卜丨口版屮|黒存-駆上标签L铁盐配制将FcSO4-7HiO和N叶EDTA.2H2分别溶丁 450ml議谓水学站热，（很讯装） 不断搅押.mJil-两液混介 调PH 5.5 水加容H0M, % ;忖丨曲山.妙上礎4. 有机物埠液配制、搠沖液要求浓编5Q倍.除蛊糖按咫单独临时称量外,其余分别称量 石.瘩解沱容在500ml容貴曲屮.S-T -M Iffil1保存.贴上标猛5. 母液最好在2YC的冰箱中贮存.特别是有机类物质，贮存时间不宜过长无机盐母液 最奸在一个！丨山川汕 如咬现仃霉菌利沉淀T 1-就九能iWJUoI-制备“液和泮弄培弄基I听川蒸憾水或无离子水宦级符讥栋准娶求，化邛药卅必颈是 花纯度KI（分析纯2. 称量药物采川札晃敏度的天平.每种-药壯.生曉调节剂母液Sl；H：为操件丿便.肖釣时刘牛长调节剂也叮加同配制母液 祥.先配成原液,这杆配制 h_JU_t i t_l i = %I AsFi- Lj匸.n F_d -i =0&c=n ews&cf= 1 &ch=0&d i=8&fv=0&is_a pp=OSyk= ad 58efeed 63b8a3b&k：.（ lI * I I I II I I I =r I II . II 1*1 LI I j ! J I F * fIf II rr I I I A I IU- I I I I I I I *T k I I 叩A *Ur 尸 F.I” A 丸UI 最.川TRIF 丿T丈 買 J l口 丨叫- H. IK UiJ | J J fUHi rJ W- |HI flU 中$1 “ 衣 IT 7C：T1L収 t心 T h nL岡 用养扯时只要稍扫计算,按需要:址取即诃=小同药晶在配制时朴不潛于水，川川少：*门同的溶剂先摺解.蔡7 iNAAJ. 郦乙 酸（IAA）不霉素 H 2, 44孵牛丧素和玉来素ZTJ irJJH少慌9衆画ffi溶解.然 忘加水.如溶解不充仝”加热*激術素（KT：利&节姗岭BA）町曙丁少量ImqlL :丫 盐議中.叶酸需川少量稀氨水溶略称取兄吨生长调节物质.落解后，在100曲的容量瓶中定容配制的母殺每亳升则含有生 底调节物质o.5mgt配制后一股要求彳1.低艦4YS 保徉 配制培弄基时如每升ClOOTiml） 需添力lfir-1-. K谓节剂物质为0.5mg时则取 帀1册液即叫.：.、培养苯配训乳灭菌-.养坷养牡配训程序（-）旳液吸取冷TWI算配制卅养弹的升數公式II：母液吸取量=母液休积C? X冷液液缩恰数暗弄基 要求的作加公讥丑 母液吸耳炕匸 （各种牛上谓节剂|母液每CL的含竝C 备种母液按顺序细V排列A.赴量儿素：FU；：C ：.：!ILU i G微量儿素：山铁评；匸E.仆机恸；F.生检素蔡乙酸（NAA）：配制0. Suff/ml的NAA W50mg，NAA用弘量95%洒粘溶解 后加蒸慵水述容1000ml： Q.iHI胞分裂素、澈功素f KT）配制0. 5mg/m I N KT称5WigKT 川少量IX HCL瘠解匸力1蘿憎术淀容节100ml.（三）配制珀养基 1000ml）1. 琼川了:称取菸屯煉脂协入30伽I蒸憎水勺11热溶解丁总X亍溶解为止,2. 蔗糖3阴用质量较好的白糖代替称取知g白糖.溶于溶有琉脂的孔伽1蓬帽水中口3. 齐种诃液的嘅恥（培养此IL） 和50ml量衙量戦大量元素母液（A）和5C沁HQ样液（B）各1畑】 分别用10ml移液管或吸管吸収微量元素CC）,铁盐（D）母液各10m Jf 10ml移液營或吸管吸取们机物HD 10mlf-) 移取激素将丄述溶液亍部混件于血脂打直赭溶液中.混合均匀后.加热至809止儿 用酸度计 或精密PH试紙测比胖芥娠的PH般要求5X0.过醴过碱则JH IN NaoH和IN HCL週 整-.分装:川卜機冇胶管时分装器趁热装培养基LOOOml用莽墓分装到药30个三肃瓶 中，每个三垢瓶釣30ml左右一般占试管、三角瓶客量】4总左右注：培养基勿碰瓶 壁。三.包装：分装好何三角胭I曲丨嗟包扎好.标明培养肚代匕即川进行换川収清理印洗涤；各种母液按原口用摆整齐冃过的忙筒.移耐 烧杯、鋁谓等川水 址潇丁净.然后按次序威冋赊辿“、点拆蒸汽灭菌锅:W刨山法具林操作步骤上1. 高丿湖放水亍平把架;2. 把也扎好的培养竝装入阳I潮:3. 希上热爪训乩I爆撼帕汴总对角拧紧螺帽)关匕气阀和安全阀一4. 然后接通电源.5. 兀力i l升金O.OSMPa时-打丿I：放气風排除冷处吒此步很萸更)“6. 排除冷空岂后，副倣气础 特JK力升到0.1 IMPsJWfTp算灭菌IK nJ.疑体刀法：当压力锅指针升至O.lZMPi时，关闭电源，待指针下降至O.UMPaHT接通电源，不断 皿览此操作过程维持2() 5yl；K7. 匱繭时河达到20分钟后除扶电源,和川放U闽门意要逐渐放气待高斥锅山的空气止 亍II除际打!卡热压天菌锅盐疳意对角扭松螺阳)1肖徘拎心山出出养基闵J&经过灭菌的营养培养基不宜放置丈长.应尽早使用，但为了在使用前能检査培养基有无 微生物河染.町将培养苹世I 25匕卜傑打4从如果培养基和要贮存较长时间.irj/l： 4-C1K 温卜探存,灭菌為压锅们大VI卄幕屮割爲卜屮T提式等若种川规格，无论哪种聲娈 操 側步骤都很和址“辿水放辿陪养基一蓋紧锅盖关上放汽阀一检竹农全阀”接上抓热簿 诵汗力升亍 0.05MP3忖排锅内冷牢H 关:放U闽.IIMPa(J2lC)b菌2045分钟,保持稳血压力 论热源“逐渐打开放吒阀一锅内空PIE除工后开放锅盖一稍冷门戕出培养基，PK无菌提柞技术(一)枯物材料表简消初剂灭菌Ll AL W 冷;玄山* 酌制 I hi ；f.i i.tti HR.：!.;! P.l u li-i .怙 7 ,SLidiiM 4L-Itt ；.；！ l 址 i._ | i 他|戎羊 E J:_ V|H5| pi=i|jLii rn Irt z.in：| J. -I. 厂土丄Jiyi. 山二 JP VIF壬 T qL也宓his 壬 r * 曲的沙骤幫很HI址.进水一放辿恪养基一蓋席锅盖* Xz.i js汽阀一检竹安全阀接上抓热诵一材压力升亍0.05MPa忖排锅冉冷空工关:放V阀 呻川MPa（化）下况菌20如分钟,保持稳丘压力 陀热源“逐渐打开放r阀一锅内空H排除扫Fi 厅放锅羞L稍冷门戕出培养拟PK后菌提作技术（一）柏物材料涯面消订剂天菌从外界或室内选取的植物材料*都不同程度抱潸町齐种谶生物。这些污染源一旦带入培养基, 便公造成培养爪讨染“闵此.植物村料必锁蚪尹脏內却li灭询处如再经无菌操乐F续接負 培即培1这过珥叫做接种I .接种歩骤：小 戲：汁址M料 说水沖洗-办II入吐温或洗衣粉）汕冼”出来水冲;第二步:对材料的表巾】浸:润灭菌:M帛酒糰浸皿加秒一无菌水第-涉:灭菌剂处川 Q.I-I%；| JSmir 或其也灭菌剂第卩排：无菌木进衍冲沈离异征婚交友黄金怎么做英国留学一年租跑车主题酒店设计】灭菌剂-般要临时配制-现况现用-升朮可以短期儼亿2 M去除较容易的氏菌剂灭菌后无菌水冲洗3-4 升朮-般!5 - 8次，每次不少于各min 筑灭菌时要轻轻的搅拌.誚除U泡.使消毒更彻底.匚灭繭时間是从倒入消毒叙I妳至倒入无菌水忖为,孑一火隔呵第拧牡昕斑小隊气根1史小瑯匹f卯底.讣菌时同是从側入消毒液丿|:皓，笊倒入无菌水片知，k灭菌菠要充分漫没材卡q2.圮菌操作可按以卜刘骤进卄:门）往接种圮前川中唯熏蒸接种总只丁接种前j小时打丿血内紫外醜灯逊行杀菌； 2）往接种刑20分钟.打丿I超净匚作舍的风机以及吿丄的紫外贱灯； 接种慣先洗讣戏几 探缓冲间换始黔实验服，并换穿推鞋等；u） .I-.I作宀二川酒耕郴球搽拭取,特别是帘中处懿拆搽U r q TiifH；O 先川酒精棉球搽拭接种工儿 再将钳子和剪刀从头川尾过火 遍,熬帚反复过火尖躺 处.对培芥川要过也烤汙：6）按种时.按种双于不能离丿I：创:合.不能说话、上型和咳嗽叨：材料换I Jh-T負银子于拿剪山或解剖dr对廿料总竹适严的切轧（如叫片切成0曲 的小块;茎创就制 L个节的小段，略光要爭减只含口片叶际彷 在接种过秤中要经常 均烧接种器械一陪山交叉河染。接种兀毕拆要犒即挣I作第 川川紫外贱灯天菌加分钟若連续接种,每5疋嘤A: 加度灭菌一叽常川植物激索类旳Z啄肺1汨分 Ji|使用浓度也IH母液恥制说明1:1;素2： 4一一氯笨利乙隴2： 4-022 1.00.001 -10nvg/L生忙素通常H； NaOIT 涪 穢滴F瘠解 成涪液.能涪1乙St1AA细抱所歌化. 般培莽KTfk 少甲独址川一a 一素乙聂NAA186.2a.COlTOm呼L刚瞰一一巴酸TM175.2O.COl-lChTLL眠一 3 酸TBA201.2U.COI 伽回 L细胞裂t，一节塁酬里疇吟BA225.2汁甕秦通牯能涪：稀 XaOH書水 乙酹或稀盘k米索j；闸热*不能髙压（i-劭塵敢宴唾吟KT1 2v :IS.烯氮茎疇吟、米素）ZT219.2赤$素GAjS46.4能涪1乙Sf山科热卞能冷压氏菌在强册养物的启创N养物的启旳匚：部拘亡氏时-f也需卩叽常川Irir-N配賈访法I lninl L HC1泊配制:根拥祉酸的密趾37%.nt酸溶液的密度为19克斥小 假设要配制 1000ml Imol/r HCI则需要壮酸的物质的胃：为1mol所以需要量取37%的盐酸？ 1*363/37%/1,121012.1H1R1/L的NkOH的配制：4gNaQH .然后融于KXXhnl的蒸悟水中。龍O 100ml) )95%的洒帝配制成75%的牺梢：用量简盘取75hnl的外洒帝加入200ml的赫谓水即可 得蟄75%酒精.如果川上止酒精配制75% 1酒粧则li；収750ml的无水酒胳卩加冰250ml.4A1%的丁|耒配制;先称取I克升朿W-糕后用蒸懈水解解最后圧客到lOOOml ?. iTHg/ml 19 2,4-D fl-J 配制： W(J. Ifi2.4-F). 115 少聞 I mol LuaO H 或洒精 M 溶.松 fid 客到 lODmL6.1的 64U 的配制：Wi.1g6-RA, .llm Imol T.HClsS I mol .NaOH W-然后朮容判100ml7.0.5nig/ml | AA 制：称取tL肿gNA儿川少量册酒精创務 然际显容貞OmL