动物细胞培养生物制药I

第第9 9讲讲 动物细胞培养生物制药动物细胞培养生物制药I I白血球 巨噬细胞 歼灭癌细胞 细胞与细胞 D D 多形型细胞多形型细胞多形型细胞是一些形态上不规则不规则的细胞。多形型细胞不常见，只有某些像神经组织细胞等难以确定其稳定形态确定其稳定形态的，才可归于多形细胞。体外培养呈现多形型细胞的细胞最常见的是神神经原和神经胶质细胞经原和神经胶质细胞。血清培养基的优点血清培养基的优点：含有丰富的利于细胞生长的成分 血清培养基缺点血清培养基缺点：（1）动物血清来源有限，价格高，不宜大量使用。（2）动物血清成分复杂且成分不稳定，使生长过程不易检测控制。（3）虽然血清对细胞生长有效，但会对后期培养产物的分离、提纯以及检测造成一定困难。同微生物、植物细胞培养不同，动物细胞培养的培养基与其他溶液不能不能经受高温灭菌经受高温灭菌，多采用过滤除菌（例如支原体污染），因此需要特殊的滤器。支原体支原体（mycoplasma）：又称霉形体霉形体，是一种能够自我复制的最小的原核微生物，没有细胞壁，许多常见的抗生素（如青霉素）对支原体是无效的。四环素类、大环内酯类等作用于核蛋白体的抗生素有抑制作用。大小为，可通过一般滤菌器，40纳米过滤技术可去除。细胞贴壁过程细胞贴壁过程1933-1934年，盖尔（盖尔（GeyGey）和刘易斯（和刘易斯（LewisLewis）建立了旋转管培养方法，将培养物接种于一管状培养器皿管状培养器皿中，再将其固定在一可以旋转的装置上旋转培养。旋转管培养方法克服了静置培养的不足，例如：细胞生长环境不均匀、不利于营养的吸收等，培养物可以交替地接触培养液和气体环境，利于细胞或组织生长。接种组织块直接长出单层细胞或将组织分散成单个细胞再进行培养，在首次传代前的培养称为原代培养原代培养（Primary culture）。一般持续1-4周。在这个阶段，细胞有分裂但不旺盛。细胞多呈二倍体核型。这样的细胞称为原代细胞原代细胞（Primary cell）。优点优点：组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大变化生物性状尚未发生很大变化，在一定程度上能反映体内的形态学特征。在供体来源充分、生物学条件稳定的情况下，原代细胞是很好的实验材料，例如药物测试、研究细胞分化等。2 2 细胞原代培养细胞原代培养酶解制备单细胞酶解制备单细胞 根据不同的组织对象采用适当的酶消化液获得动物细胞进行培养。胚胎等组织细胞潜伏期短，第二天既可见生长，一周便可接连成片；成体组织来源的细胞潜伏期长，一般要一周左右。最常用的有胰蛋白酶胰蛋白酶和胶原酶，链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶等也可用于动物细胞的消化。EDTA适合消化传代细胞，常与胰蛋白酶一起使用酶消化的传代方法酶消化的传代方法 吸出或者倒掉培养瓶内吸出或者倒掉培养瓶内的旧培养液。的旧培养液。加入胰蛋白酶和加入胰蛋白酶和EDTAEDTA混混合液盖满瓶底，轻轻摇动培养合液盖满瓶底，轻轻摇动培养瓶。瓶。2-52-5分钟后检查，有细胞分钟后检查，有细胞间隙变大、细胞质回缩现象时间隙变大、细胞质回缩现象时添加培养液终止消化。添加培养液终止消化。吸出消化液，加入吸出消化液，加入HanksHanks液轻轻转动，洗去残留消化液。液轻轻转动，洗去残留消化液。加入培养液，用吸管轻加入培养液，用吸管轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落制成轻吹打瓶壁，使细胞脱落制成悬液。悬液。计数，接种进行传代培计数，接种进行传代培养。养。