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选修一课堂默写（1）班级姓名实验 1 大肠杆菌的培养和分离1培养基的配制（1） 亠 培养基是通用的细菌培养基，其中包含水、NaCl、蛋白胨和 酵母提取液（如果配制的是固体培养基，还需要加入琼脂 ）（2） 培养细菌的培养基中加入一定量NaCl的作用是维持渗透压（3）在制备培养基时，还需调节培养基的pH,细菌通常喜欢中性偏碱性的环境，调节pH应该在 培养基灭菌之_前_ （填“前”或“后”）。（4） 培养基配置完成后，需转移分装到三角瓶、试管中，为了避免发生污垫三角瓶口、试管口不能 沾有培养基，因此，分装时必须用三角漏斗（玻璃漏斗。分装完成后，三角瓶口和试管口需要加棉塞， 制作棉塞所需的棉花不能用脱脂棉，因为脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。如果有条件，可以用 封口膜（橡胶塞、塑料盖）代替棉塞。（4）常见的灭菌方法还有高压蒸汽灭菌法和灼烧灭菌法等三角瓶、培养皿和试管等器皿的灭菌要在 121C（. Ikg/cm2压力）下灭菌15分钟，这种灭菌方法称为 高压蒸汽灭菌法。（5） 制备培养细菌用的空白试管斜面：LB液体培养基配好后，加入琼脂并加热使之 融化，在未凝固 时，通过三角漏斗（玻璃漏斗）加入试管（15mmX150mm）中，每支试管2_ml。试管口加 棉塞，并将 试管捆在一起，上端加盖一张 牛皮纸（报纸）纸，灭菌后将试管 斜靠在平放的铅笔上，冷却后，固 体培养基即成为斜面。2大肠杆菌的扩大培养将接种环在酒精灯火焰上烧红后伸入保存有大肠杆菌的试管斜面，待其冷却后再蘸取大肠杆菌，将其放 入三角瓶的液体培养基中，然后将三角瓶用封口膜密封，放到37C、每分钟200转的摇床 上 振荡12 小时。3大肠杆菌的分离（1）单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。分离细菌 的方法主要有划线分离法和.涂布分离法。前者通常使用的工具是接种环，后者通常使用的工具是 玻璃刮刀。其中操作方法较简单的是划线一分离法，较容易得到单菌落的是涂布一分离法。如果要统计活 细菌的数目，宜采用涂布分离法。（2）划线分离法：将接种环烧红并冷却后蘸取大肠杆菌菌液，然后在培养皿的固体培养基上连续划 线。完成后盖上盖子，然后将培养皿倒置，在37C的恒温培养箱中培养1224小时。由于在划线过 程中接种环 上的菌液逐渐稀释,因此划线最后部分细菌间的距离逐渐 加大。经培养后可看到在划线 的末端出现不连续的单菌葢，这表明细菌已被分离。(3) 涂布分离法：先将大肠杆菌菌液稀释，然后取0.1 ml稀释度不同的菌液，加到培养皿的固体 培 养基上。再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待玻璃刮刀上的火焰熄灭后，用其将 培养皿中的菌液涂布在培养基平面上。完成后盖上盖子，然后将培养皿，倒置，在37C的恒温培养箱 中 培养1224小时，最后可得到相互分开的单菌落，这表明细菌已被分离。在适当的稀释度下，可培养得 到相互分开的菌落，通常以每个培养皿中有_20_个以内的单菌落 最为适宜。4大肠杆菌的保存在无菌条件下,将大肠杆菌的单菌落用接种环取出,再用划线法接种在试管中的斜面培养基上, 37C 培养24小时后，置于4C的 冰箱 中保存。实验2分离以尿素为氮源的微生物1. 尿素又称脲，是 蛋白质 降解的产物。土壤中有一些细菌含有脲酶，它们可以将尿素降解为氨从而为其生长提供氮源_。在脲酶作用下，尿素分解的化学方程式是:书25页 2. 分离以尿素为氮源的微生物所用的培养基中含有水、NaCl、KHP0、尿素、葡萄糖、琼脂糖和24酚红等，其中酚红作为指示剂，琼脂糖作为凝固剂，选用琼脂糖而不选用琼脂的原因是琼脂中含有一定 量的含氮化合物，不利于以尿素为氮源的微生物的筛选。尿素培养基灭菌时，为防止尿素分解，可将尿 素溶液通过-G6玻璃砂漏斗一过滤，使其无菌。该设备使用前需经过 高压蒸汽灭菌,使用后需用1mol/L 的 盐酸 浸泡，并抽滤去酸，再用 蒸馏水 清洗至洗出液呈中性，干燥后保存。培养基的其余成分配 制好后用高压蒸汽灭菌法灭菌，待冷却至60 C时，加入无菌的尿素溶液，混合均匀后待用。同时配置 好墮_固体培养基，灭菌待用。3. 制备土壤细菌悬液:在无菌条件下，将1g 土样加入有99 ml无菌水的三角瓶中，振荡10min,即成 10-2土壤稀释液。取上述土壤稀释液0.5ml加入有4.5ml无菌水的试管中，震荡制成稀释10-3为土壤 稀释液。依次法制备10-4和10-5 土壤稀释液。取样时，尽量只取悬液4涂布：取稀释度10-4和10-5土壤稀释液各0.1ml,分别加到有LB培养基和 尿素培养基的培养皿中，再 将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上的 火焰熄灭，在 酒精灯 旁打开培养皿， 将菌液涂布到整个平面上。5.培养和观察：涂布后，将培养皿倒置，在37C的 恒温培养箱 中培养2448小时。最终在尿素培养 基上出现的菌落数要少于一(填“多于” “等于”或“少于” LB培养基，而且在尿素培养基上的菌落周围 会出现 红色环带。这是因为尿素培养基中的氮源只有尿素,含有 脲酶 的细菌才能利用尿素存活生长。 它们将培养基中的尿素降解为 氨，使 酚红 变为红 色。
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