含酚污水降解菌的分离ppt课件

含酚污水降解菌的分别含酚污水降解菌的分别一、目的要求一、目的要求学习从含酚工业废水、活性污泥中挑选学习从含酚工业废水、活性污泥中挑选苯酚降解菌。苯酚降解菌。学习经过活性污泥培育驯化和分别耐酚学习经过活性污泥培育驯化和分别耐酚菌菌二、实验原理二、实验原理 许多微生物可从不同基物中获取能量，具许多微生物可从不同基物中获取能量，具有降解某些特殊污染物的才干，这是目前环境有降解某些特殊污染物的才干，这是目前环境微生物研讨的重点。本次实验以含酚污水降解微生物研讨的重点。本次实验以含酚污水降解菌的分别、纯化与挑选为例，引见某些特殊污菌的分别、纯化与挑选为例，引见某些特殊污染物微生物降解菌的挑选方法。染物微生物降解菌的挑选方法。梯度平板法分别纯化 般微生物在含苯酚培育基上不能生长，苯酚耐受菌株的挑选，可采用与挑选药物抗性菌株一样的梯度平扳法。即在培育基中参与定量的药物。使大量细胞中的少数抗性菌细胞在平板上的一定剂量药品的部位长成菌落。从而断定该菌耐苯酚的才干。三、实验资料三、实验资料1 1、菌源、菌源 含酚工业污水或含酚废水曝气池中的活性污泥含酚工业污水或含酚废水曝气池中的活性污泥2 2、培育基、培育基 耐酚细菌培育基，包括固体平板、斜面和液耐酚细菌培育基，包括固体平板、斜面和液体两种。体两种。固体：牛肉膏蛋白胨固体培育基，灭菌后参与苯固体：牛肉膏蛋白胨固体培育基，灭菌后参与苯酚至酚至6g/L6g/L。3、其他物品稀释分别所用的装有无菌水的试管，每组6支。无菌移液管，每组2支。四、步骤实验分别耐酚菌驯化性能测定 四、实验内容四、实验内容1梯度平板制备梯度平板制备 在已灭过菌的培育皿中，先倾倒在已灭过菌的培育皿中，先倾倒710 ml不含苯不含苯酚的已灭过菌的细菌或真菌培育基，将培育皿一侧酚的已灭过菌的细菌或真菌培育基，将培育皿一侧放置木条上，使皿中的培育基倾斜成斜面，而且刚放置木条上，使皿中的培育基倾斜成斜面，而且刚好完全盖住培育皿底部，待培育基凝固后，将培育好完全盖住培育皿底部，待培育基凝固后，将培育皿放平，再倾倒皿放平，再倾倒710 m1已融化的无菌耐酚真菌已融化的无菌耐酚真菌培育基或耐酚细菌培育基培育基或耐酚细菌培育基(苯酚终浓度为苯酚终浓度为75mg/100 m1)，刚好完全盖住下层斜面，由于苯酚的分散作，刚好完全盖住下层斜面，由于苯酚的分散作用，上层培育基薄的部分苯酚浓度大大降低，呵斥用，上层培育基薄的部分苯酚浓度大大降低，呵斥上层培育基由厚到薄苯酚浓度递减的梯度上层培育基由厚到薄苯酚浓度递减的梯度(图图642)。一分别酚降解菌1梯度平板制备 在已灭过菌的培育皿中，先倾倒710 ml不含苯酚的已灭过菌的细菌培育基，将培育皿一侧放置木条上，使皿中的培育基倾斜成斜面，而且刚好完全盖住培育皿底部，待培育基凝固后，将培育皿放平，再倾倒710 m1已融化的无菌耐酚细菌培育基(苯酚终浓度为6g/L)，刚好完全盖住下层斜面，由于苯酚的分散作用，上层培育基薄的部分苯酚浓度大大降低，呵斥上层培育基由厚到薄苯酚浓度递减的梯度梯度平板制备及菌落生长情况 2涂布法分别 将采集的样品按稀释涂布法分别，37培育2d后，半板上生长的菌落也构成密度梯度，上层培育基薄的部分苯酚低浓度区构成菌苔较多、上层培育基厚的部分苯酚高浓度区出现稀少菌落。将此菌落在耐酚细菌培育基平板或耐酚真菌培育基平板上延续划线分别，最后挑取单菌落接种到耐酚斜面培育基上，37培育2d。二耐酚菌驯化 先活性污泥、放入苯酚无机培育液中、30振荡培育610 d，使苯酚降解菌大量增殖，淘汰对酚不顺应的微生物；再添加苯酚无机培育液(苯酚终浓度添加至100mg/L 30振荡培育46d。再流加苯酚无机培育液(苯酚终浓度添加至200mg/L)30振荡培育46d，再提高到加250 mg/L苯酚无机培育液，30培育4d后从中选出对苯酚耐受力强的苯酚降解 三性能测定 1、初筛 制备不同浓度苯酚含量的平板培育基，将选出的耐酚力强的菌株在其上分别划线分别，自高酚浓度平板上长出的菌落，即为苯酚降解力高的菌株。复筛。2、复筛将经初筛纯化的菌种，分别接入碳源对照培育液和苯酚培育液中，20振荡培育48h，于发酵的0、12、24、36、48h取样，在OD600处检测光密度值(OD)。绘制在葡萄糖培育液和苯酚培育液上的生长曲线，在苯酚培育液中生长速度下降不明显者为耐酚菌株。思索题阐明采用梯度平板法进展药物抗性菌株挑选的优越性。