3组织化学染色

特殊染色在临床病理学中的应用特殊染色在临床病理学中的应用染色的意义和目的染色的意义和目的 用染料对组织切片进行处理，使组织中的不同用染料对组织切片进行处理，使组织中的不同成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以利于光镜观察和分析。病理染色属于生物性染色利于光镜观察和分析。病理染色属于生物性染色的范畴。的范畴。应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色剂，显示组织或细胞的正常结构或病理过程中出现色剂，显示组织或细胞的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，称特殊染色（的异常物质、病变及病原体等，称特殊染色（Special staining）。特殊染色（特殊染色（special staining）染料和染色的原理染料和染色的原理一一、染料的特点：、染料的特点：组织病理学染料是生物学染色剂组织病理学染料是生物学染色剂对所染组织成分具有亲和力对所染组织成分具有亲和力染色剂中同时具备发色团和助色团才具有染色功染色剂中同时具备发色团和助色团才具有染色功能能发色团是使染料显色的化学团（色原），一种染发色团是使染料显色的化学团（色原），一种染料由一个或多个发色团，染料颜色取决于发色团料由一个或多个发色团，染料颜色取决于发色团多少和强弱。多少和强弱。助色团指使色原产生电离成为盐类，对被染物产助色团指使色原产生电离成为盐类，对被染物产生亲和力的原子团生亲和力的原子团染料和染色的原理染料和染色的原理二二、染料的分类、染料的分类染料的来源分类：天然和合成染料染料的来源分类：天然和合成染料化学反应分类：碱性染料、酸性染料、中性染料化学反应分类：碱性染料、酸性染料、中性染料用途分类：用途分类：细胞核染料：苏木素，核固红，结晶紫等细胞核染料：苏木素，核固红，结晶紫等 细胞质染料：伊红，酸性复红，苦味酸等细胞质染料：伊红，酸性复红，苦味酸等 脂肪染料：油红脂肪染料：油红O，苏丹，苏丹III，苏丹，苏丹IV 纤维结缔组织染料：苦味酸，亮绿等纤维结缔组织染料：苦味酸，亮绿等染料和染色的原理染料和染色的原理三三、染料的原理、染料的原理物理机制：物理机制：l 毛细管渗透作用：染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。毛细管渗透作用：染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。l 吸收或溶解作用：组织吸收或溶解染料而着色，如脂肪染吸收或溶解作用：组织吸收或溶解染料而着色，如脂肪染色色l 吸附作用：染料的色素粒子浸润组织中，因分子引力，色吸附作用：染料的色素粒子浸润组织中，因分子引力，色素粒子被吸附而染色素粒子被吸附而染色 例如脂肪染色例如脂肪染色:苏丹类染色剂在脂质中的溶解度酒精中的溶解度 溶解于酒精的苏丹类染色剂与组织中的脂质接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中，从而使脂质着色。染料和染色的原理染料和染色的原理三三、染料的原理、染料的原理化学机制：化学机制：组织和细胞中含有碱性和酸性物质，分别与染料中的阳组织和细胞中含有碱性和酸性物质，分别与染料中的阳离子和阴离子结合。离子和阴离子结合。如如HE染色：细胞核主要由核酸构成，与碱性染料染色：细胞核主要由核酸构成，与碱性染料-苏木苏木素结合，而胞浆主要由碱性物质构成，与酸性染料素结合，而胞浆主要由碱性物质构成，与酸性染料-伊红伊红结合。结合。l 普通染色：又称常规染色，即指普通染色：又称常规染色，即指HE染色（染色（haematoxylin and eosin HE）l 特殊染色：除特殊染色：除HE以外的所有染色，显示特定的组织结构以外的所有染色，显示特定的组织结构和成分。和成分。l 单一染色：用一种染料进行的染色，如甲苯胺蓝染幽门螺单一染色：用一种染料进行的染色，如甲苯胺蓝染幽门螺杆菌杆菌l 多色染色：用两种以上染液染色的方法，如三色染色多色染色：用两种以上染液染色的方法，如三色染色l 对比染色：又称复染或衬染，先将某一成分或结构染色后，对比染色：又称复染或衬染，先将某一成分或结构染色后，再用另一种染料染其他成分，如苏木素衬染细胞核再用另一种染料染其他成分，如苏木素衬染细胞核染色的常用术语染色的常用术语l 进行性染色：渐进性染色，采用低浓度的染液，使进行性染色：渐进性染色，采用低浓度的染液，使组织成分着色自浅入深，直到达到合适强度，组织成分着色自浅入深，直到达到合适强度，l 退行性染色：又称后退性染色，先使组织着色过度，退行性染色：又称后退性染色，先使组织着色过度，再用某些溶液脱去多余染液，达到合适染色强度再用某些溶液脱去多余染液，达到合适染色强度l 媒染剂：具有促进染色能力，对染料和组织都有亲媒染剂：具有促进染色能力，对染料和组织都有亲和力并与染料和组织结合在一起的试剂。如硫酸铝和力并与染料和组织结合在一起的试剂。如硫酸铝钾等钾等染色的常用术语染色的常用术语l 促染剂：促使染料着色，增强染色能力，但本身不促染剂：促使染料着色，增强染色能力，但本身不参与染色反应，如乙酸参与染色反应，如乙酸l 异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与染料不同的颜色染料不同的颜色l 分化：指用某种溶液选择性脱去过深的着色，并使分化：指用某种溶液选择性脱去过深的着色，并使不应着色的组织细胞成分脱色的过程，不应着色的组织细胞成分脱色的过程，HE染色时的染色时的盐酸酒精分化盐酸酒精分化l 蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色，蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色，碱性条件下呈蓝色，碱性条件下呈蓝色，HE染色时在酸分化后，再用碱染色时在酸分化后，再用碱性水使核变蓝，称蓝化性水使核变蓝，称蓝化染色的常用术语染色的常用术语按照染色方法分类按照染色方法分类l一般方法分类：常规染色，特殊染色等一般方法分类：常规染色，特殊染色等l按主要组织和细胞成分分类：结缔组织染色，按主要组织和细胞成分分类：结缔组织染色，肌组织染色，神经组织染色肌组织染色，神经组织染色l按染色对象种类分类：切片染色法，组织块按染色对象种类分类：切片染色法，组织块染色法，大体标本染色法染色法，大体标本染色法染色方法的分类染色方法的分类l按发明者姓名命名：如按发明者姓名命名：如Van.Gieson（VG）染色染色l按所有染料分类：如苏丹按所有染料分类：如苏丹IV染色，锇酸染色染色，锇酸染色l按所染组织分类：如网状纤维染色按所染组织分类：如网状纤维染色l其他分类：其他分类：染色方法的命名染色方法的命名l 选择适当的组织处理方法：包括固定液和切选择适当的组织处理方法：包括固定液和切片的选择，如脂肪和酶类染色需冰冻切片片的选择，如脂肪和酶类染色需冰冻切片l 染色液的有效期和保存方式染色液的有效期和保存方式l 染色液的浓度和染色液的浓度和pH值值l 染色时间的控制染色时间的控制l 染色前切片的预处理：如脱甲醛色素，脱汞染色前切片的预处理：如脱甲醛色素，脱汞盐固定液的汞结晶等盐固定液的汞结晶等染色中易出现的问题和对策染色中易出现的问题和对策 注意特染的应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能注意特染的应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能达到目的，一般根据达到目的，一般根据HE切片所见，选择适当的特染方法。切片所见，选择适当的特染方法。必须掌握各种特殊染色的结果，避免导致错误的结论或严必须掌握各种特殊染色的结果，避免导致错误的结论或严重的误诊，如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。重的误诊，如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。应做阳性切片作对照，保证染色结果的可靠性。应做阳性切片作对照，保证染色结果的可靠性。染色所用的器皿都必须清洗。染色所用的器皿都必须清洗。染色中易出现的问题和对策染色中易出现的问题和对策常用染色方法和应用常用染色方法和应用 结缔组织由细胞和细胞间的骨架成分构成，结缔组织由细胞和细胞间的骨架成分构成，分为无定形的间质（如硫酸盐和非硫酸盐黏多分为无定形的间质（如硫酸盐和非硫酸盐黏多糖）和定形或纤维型间质（如胶原纤维，弹力糖）和定形或纤维型间质（如胶原纤维，弹力纤维。网状纤维）。各种纤维成分的识别有助纤维。网状纤维）。各种纤维成分的识别有助于病理学的诊断和鉴别诊断。于病理学的诊断和鉴别诊断。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维的特性网状纤维的特性l 网状纤维是构成组织的网状支架网状纤维是构成组织的网状支架l 广泛分布于实质器官内，其中最丰富的区域是肝脏、脾脏、广泛分布于实质器官内，其中最丰富的区域是肝脏、脾脏、淋巴结、骨髓、基膜、血管等淋巴结、骨髓、基膜、血管等l 形态学上为交织成网的纤细纤维形态学上为交织成网的纤细纤维l 化学成分为网状蛋白，一种特殊的胶原蛋白，抗酸化学成分为网状蛋白，一种特殊的胶原蛋白，抗酸l 病理状态下可转化为胶原纤维病理状态下可转化为胶原纤维l 具有嗜银性，又称嗜银纤维具有嗜银性，又称嗜银纤维l HE染色着色淡，特殊染色可显示染色着色淡，特殊染色可显示 结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色网状纤维染色的原理网状纤维染色的原理 网状纤维染色方法很多，但基本原理相同，即经过网状纤维染色方法很多，但基本原理相同，即经过氧化剂的氧化使网状纤维对银离子具有选择性的亲和氧化剂的氧化使网状纤维对银离子具有选择性的亲和能力（嗜银性），并在媒染剂的作用下网状纤维吸附能力（嗜银性），并在媒染剂的作用下网状纤维吸附二氨合银离子，在经甲醛将其还原为黑色金属银而显二氨合银离子，在经甲醛将其还原为黑色金属银而显示出网状纤维。示出网状纤维。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色常用网状纤维的染色方法常用网状纤维的染色方法 Gomori染色法染色法 结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈黄色或黄结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈黄色或黄褐色，细胞核呈灰黑色褐色，细胞核呈灰黑色。特点：此法简单可靠，染色时间短，常用于活特点：此法简单可靠，染色时间短，常用于活检病理组织检查。检病理组织检查。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色网状纤维染色的应用网状纤维染色的应用肿瘤的诊断和鉴别诊断：肿瘤的诊断和鉴别诊断：l 癌和肉瘤的鉴别：癌巢周围存在网状纤维；癌和肉瘤的鉴别：癌巢周围存在网状纤维；肉瘤中网状纤维围绕每个细胞肉瘤中网状纤维围绕每个细胞l 尤文氏瘤和淋巴瘤：尤文氏瘤无网状纤维，尤文氏瘤和淋巴瘤：尤文氏瘤无网状纤维，淋巴瘤内存在大量网状纤维淋巴瘤内存在大量网状纤维l 脑膜瘤和胶质瘤：脑膜瘤有网状纤维。胶质脑膜瘤和胶质瘤：脑膜瘤有网状纤维。胶质瘤少瘤少结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色网状纤维染色的应用网状纤维染色的应用某些梭形细胞肿瘤的诊断：已被免疫组化取代，很少用某些梭形细胞肿瘤的诊断：已被免疫组化取代，很少用 平滑肌瘤的瘤细胞间可见大量平行分布的网状纤维；平滑肌瘤的瘤细胞间可见大量平行分布的网状纤维；纤维肉瘤则见大量网状纤维密集包绕细胞；纤维肉瘤则见大量网状纤维密集包绕细胞；滑膜肉瘤的梭形细胞产生网状纤维少。滑膜肉瘤的梭形细胞产生网状纤维少。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色网状纤维染色的应用网状纤维染色的应用判断组织坏死的性质和预测坏死后的结局：判断组织坏死的性质和预测坏死后的结局：、凝固性坏死：用网染可以观察到早期凝固、凝固性坏死：用网染可以观察到早期凝固性坏死处网状纤维支架还保留的特点。性坏死处网状纤维支架还保留的特点。、肝炎的坏死范围和程度：如网状支架塌陷，、肝炎的坏死范围和程度：如网状支架塌陷，则演变成肝硬化。则演变成肝硬化。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色网状纤维染色的应用网状纤维染色的应用骨髓网状纤维染色：骨髓网状纤维染色：结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色580例骨髓病变网状纤维的染色结果例骨髓病变网状纤维的染色结果l 胶原纤维是结缔组织中含量最多胶原纤维是结缔组织中含量最多的一种，皮肤，肌腱，硬膜等处的一种，皮肤，肌腱，硬膜等处丰富丰富l 纤维母细胞合成，化学成分为胶纤维母细胞合成，化学成分为胶原蛋白原蛋白l 不溶于水，在酸性溶液中膨胀不溶于水，在酸性溶液中膨胀l HE染色呈红色，易辨认染色呈红色，易辨认l 出现质和量的改变时，与疾病状出现质和量的改变时，与疾病状态有关态有关 结缔组织染色结缔组织染色胶原纤维染色胶原纤维染色染色原理：染色原理：胶原纤维含碱性氨基酸，能够与酸性染料结合，酸胶原纤维含碱性氨基酸，能够与酸性染料结合，酸性染料具有不同程度的扩散性，扩散性高的小分子容性染料具有不同程度的扩散性，扩散性高的小分子容易进入结构致密的组织（肌纤维）间隙，扩散性低的易进入结构致密的组织（肌纤维）间隙，扩散性低的大分子只可能进入结构疏松的组织（胶原纤维）间隙，大分子只可能进入结构疏松的组织（胶原纤维）间隙，从而产生不同的染色。从而产生不同的染色。结缔组织染色结缔组织染色胶原纤维染色胶原纤维染色Van Gieson（V.G）染色：）染色：结果：胶原纤维鲜红色；肌纤维：黄色；细胞核：蓝黑结果：胶原纤维鲜红色；肌纤维：黄色；细胞核：蓝黑色或灰色色或灰色Masson三色染色：三色染色：结果：胶原纤维绿色或蓝色；肌纤维：红色；细胞核：结果：胶原纤维绿色或蓝色；肌纤维：红色；细胞核：灰蓝色或灰黑色灰蓝色或灰黑色结缔组织染色结缔组织染色胶原纤维染色胶原纤维染色应用：应用：l 显示组织，器官损伤或炎症的修复与纤维化程度，如显示组织，器官损伤或炎症的修复与纤维化程度，如早期肝硬化早期肝硬化l 显示与判断心肌坏死后被纤维组织取代的区域和病变显示与判断心肌坏死后被纤维组织取代的区域和病变的新旧程度：的新旧程度：HE染色心肌与胶原呈红色，胶原染色则染色心肌与胶原呈红色，胶原染色则颜色不同；胶原染色新形成的胶原多呈细丝状，成熟颜色不同；胶原染色新形成的胶原多呈细丝状，成熟后则粗大，不规则波浪状后则粗大，不规则波浪状l 区别透明变性和淀粉样变性区别透明变性和淀粉样变性l 鉴别心肌纤维化和心内膜弹力纤维增生症鉴别心肌纤维化和心内膜弹力纤维增生症l 肿瘤的鉴别诊断：纤维源性肿瘤的诊断肿瘤的鉴别诊断：纤维源性肿瘤的诊断结缔组织染色结缔组织染色胶原纤维染色胶原纤维染色染色的方法和结果：染色的方法和结果：Verhoeff铁苏木素染色铁苏木素染色结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原纤维呈红色纤维呈红色结缔组织染色结缔组织染色弹力纤维染色弹力纤维染色应用：应用：（1）显示皮肤组织中弹刀纤维的变化）显示皮肤组织中弹刀纤维的变化：如硬皮病，皮肤松如硬皮病，皮肤松解症等解症等（2）显示与判断心血管疾病：）显示与判断心血管疾病：鉴别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化鉴别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化 动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板的情况动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板的情况 高血压小动脉的改变高血压小动脉的改变 老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚 （3）观察疾病时弹力板是否破坏）观察疾病时弹力板是否破坏结缔组织染色结缔组织染色弹力纤维染色弹力纤维染色 糖类物质除参与细胞代谢外，现已证实还参与多种细糖类物质除参与细胞代谢外，现已证实还参与多种细胞功能活动，包括蛋白折叠，细胞粘附，酶活动及免疫胞功能活动，包括蛋白折叠，细胞粘附，酶活动及免疫识别等，糖生物学已成为一门复杂的学科。识别等，糖生物学已成为一门复杂的学科。糖类可分为单糖，双糖，粘多糖，粘蛋白，粘脂等，糖类可分为单糖，双糖，粘多糖，粘蛋白，粘脂等，病理学中最有意义的是糖原和黏多糖。病理学中最有意义的是糖原和黏多糖。因糖原极不稳定，易自溶，因此做糖原分析的组织应因糖原极不稳定，易自溶，因此做糖原分析的组织应在取材后立刻固定。糖原是水溶性的，建议最好使用酒在取材后立刻固定。糖原是水溶性的，建议最好使用酒精福尔马林。精福尔马林。糖类物质（碳水化合物）染色糖类物质（碳水化合物）染色染色原理：染色原理：过碘酸是一种氧化剂，它能氧化糖类及有关物过碘酸是一种氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的质中的1,2-乙二醇基使之变为二醛，醛与乙二醇基使之变为二醛，醛与Schiff试剂结合形成亮红色的终产物试剂结合形成亮红色的终产物-碱性品红。形成碱性品红。形成颜色的深浅取决于组织内反应的乙二醇浓度。颜色的深浅取决于组织内反应的乙二醇浓度。结果：结果：糖原和其他糖原和其他PAS阳性物质呈红色，细胞核呈蓝阳性物质呈红色，细胞核呈蓝色色糖类物质染色糖类物质染色1、PAS染色染色（Periodic Acid Schiff PAS）应用：应用：肿瘤的诊断和鉴别诊断肿瘤的诊断和鉴别诊断 基底膜厚度的判断（肾病的诊断）基底膜厚度的判断（肾病的诊断）基底膜的完整性基底膜的完整性 病原菌感染的诊断病原菌感染的诊断 糖类物质染色糖类物质染色1、PAS染色染色糖类物质染色糖类物质染色1、PAS染色染色PAS反应阳性的物质反应阳性的物质染色原理：染色原理：染色机制不清，可能是阿辛蓝中的异硫脲基通染色机制不清，可能是阿辛蓝中的异硫脲基通过静电与组织内的多聚阴离子相连。过静电与组织内的多聚阴离子相连。结果：结果：酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）：酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）：蓝色蓝色 蛋白多糖和透明质酸：蛋白多糖和透明质酸：蓝色蓝色 细胞核：红色细胞核：红色糖类物质染色糖类物质染色2、AB染色染色应用应用 用于一般黏液性病变的观察。用于一般黏液性病变的观察。在肿瘤诊断与研究中：在肿瘤诊断与研究中：用于肿瘤类型的鉴别，如黏液腺癌与未分化癌的鉴别，用于肿瘤类型的鉴别，如黏液腺癌与未分化癌的鉴别，黏液表皮样癌与鳞癌的鉴别；黏液表皮样癌与鳞癌的鉴别；黏液染色还可以证明癌细胞是否浸润间质；黏液染色还可以证明癌细胞是否浸润间质；观察胃黏膜腺体的肠上皮化生等观察胃黏膜腺体的肠上皮化生等糖类物质染色糖类物质染色2、AB染色染色组织中粘液物质的分类组织中粘液物质的分类糖类物质染色糖类物质染色2、AB染色染色 中性黏多糖：主要存在于胃黏膜表面上皮、幽门腺、十中性黏多糖：主要存在于胃黏膜表面上皮、幽门腺、十二指肠腺等处；二指肠腺等处；酸性黏多糖：其基质成分可分为硫酸性（酸性黏多糖：其基质成分可分为硫酸性（HID染色呈棕染色呈棕黑色）和非硫酸性（黑色）和非硫酸性（AB染色呈蓝绿色）两种形式存在，染色呈蓝绿色）两种形式存在，主要分布于消化道、呼吸道及其他部位的黏液腺分泌物主要分布于消化道、呼吸道及其他部位的黏液腺分泌物中；中；黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而构成，故又称糖蛋白，黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而构成，故又称糖蛋白，见于各种组织上皮和腺体导管的分泌物中。见于各种组织上皮和腺体导管的分泌物中。糖类物质染色糖类物质染色 AB与与PAS共同染色，亦称套染，对于显示和区别酸性共同染色，亦称套染，对于显示和区别酸性黏液物质与中性黏液物质均有较好效果。黏液物质与中性黏液物质均有较好效果。结果：结果：酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合性黏酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合性黏液物质呈紫红色；细胞核呈浅蓝色。液物质呈紫红色；细胞核呈浅蓝色。糖类物质染色糖类物质染色2、AB-PAS染色染色 脂类物质染色脂类物质染色 脂类物质染色脂类物质染色淀粉样物染色淀粉样物染色 淀粉样物质（淀粉样物质（Amyloid）是一种细胞外无定形，嗜酸性物）是一种细胞外无定形，嗜酸性物质，刚果红染色后在偏正光镜下呈质，刚果红染色后在偏正光镜下呈“苹果绿苹果绿”的双折射，具的双折射，具有独特的原纤维超微结构，大多数由有独特的原纤维超微结构，大多数由B-折叠层构象的蛋白质折叠层构象的蛋白质构成。构成。淀粉样物的沉积与很多疾病有关，不同疾病所构成的淀粉淀粉样物的沉积与很多疾病有关，不同疾病所构成的淀粉样物的蛋白质不同。如骨髓瘤相关淀粉样变为免疫球蛋白轻样物的蛋白质不同。如骨髓瘤相关淀粉样变为免疫球蛋白轻链；链；Alzheimer病为淀粉样蛋白病为淀粉样蛋白B前体。前体。染色方法和结果：染色方法和结果：l 刚果红染色：淀粉样物，弹力纤维呈红色，核呈刚果红染色：淀粉样物，弹力纤维呈红色，核呈蓝色蓝色l 甲基紫染色：淀粉样物呈紫红色，细胞核和基质甲基紫染色：淀粉样物呈紫红色，细胞核和基质呈蓝色呈蓝色染色的原理：染色的原理：机制不清楚机制不清楚淀粉样物染色淀粉样物染色应用：应用：l肿瘤的诊断与鉴别：如甲状腺髓样癌、胰岛细胞瘤、肺小肿瘤的诊断与鉴别：如甲状腺髓样癌、胰岛细胞瘤、肺小细胞癌可细胞癌可 出现淀粉样物质，染色阳性对诊断提供可靠依出现淀粉样物质，染色阳性对诊断提供可靠依据。据。l识别器官的淀粉样变性：如舌、喉、肝脾、肠道及皮肤等识别器官的淀粉样变性：如舌、喉、肝脾、肠道及皮肤等淀粉样物染色淀粉样物染色微生物的染色微生物的染色微生物主要包括：微生物主要包括：l 病毒病毒l 细菌细菌l 真菌真菌l 原虫原虫l 寄生虫寄生虫微生物的染色微生物的染色细菌染色细菌染色Gram碱性复红结晶紫染色：碱性复红结晶紫染色：应用：识别应用：识别Gram菌的感染菌的感染结果：结果：Gram阳性菌呈蓝色，阴性菌和细胞核阳性菌呈蓝色，阴性菌和细胞核呈红色呈红色原理：原理：Gram阳性菌含核糖核酸镁盐阳性菌含核糖核酸镁盐-蛋白质蛋白质复合物多，摄取结晶紫多且较牢固，呈蓝复合物多，摄取结晶紫多且较牢固，呈蓝色或紫色，而色或紫色，而Gram阴性菌则较少，易与碱阴性菌则较少，易与碱性复红结合呈红色性复红结合呈红色微生物的染色微生物的染色细菌染色细菌染色抗酸染色（抗酸染色（Ziehl-Neelsen染色）：染色）：应用：识别分枝杆菌，如结核杆菌和其他分枝杆菌应用：识别分枝杆菌，如结核杆菌和其他分枝杆菌结果：分枝杆菌呈红色，背景淡蓝色结果：分枝杆菌呈红色，背景淡蓝色原理：分枝杆菌细胞壁含大量脂质，主要成分是分枝菌酸，原理：分枝杆菌细胞壁含大量脂质，主要成分是分枝菌酸，它具有抗酸性，可与染料中石碳酸复红结合，抵抗盐酸乙它具有抗酸性，可与染料中石碳酸复红结合，抵抗盐酸乙醇的脱色。醇的脱色。微生物的染色微生物的染色细菌染色细菌染色其他细菌的染色其他细菌的染色Wathin-Starry染色染色显示螺旋体，菌体呈黑色，背景呈金黄色显示螺旋体，菌体呈黑色，背景呈金黄色改良改良Steiner染色：染色：螺旋体，猫爪病病原体，非放线菌呈深棕黑色，背螺旋体，猫爪病病原体，非放线菌呈深棕黑色，背景呈亮黄色至金黄色景呈亮黄色至金黄色微生物的染色微生物的染色真菌染色真菌染色l 真菌（真菌（fungus）种类较多，常见的致病菌如毛霉）种类较多，常见的致病菌如毛霉菌、曲菌、隐球菌、放线菌和白色念珠菌等。菌、曲菌、隐球菌、放线菌和白色念珠菌等。l 真菌的基本结构成分是含较多的黏多糖和蛋白质。真菌的基本结构成分是含较多的黏多糖和蛋白质。l 常形成肉芽肿和坏死常形成肉芽肿和坏死l 培养是最好的方法培养是最好的方法微生物的染色微生物的染色真菌染色真菌染色Grocott六胺银染色法 结果：真菌孢子和菌丝呈黑褐色，细胞核呈红色，结果：真菌孢子和菌丝呈黑褐色，细胞核呈红色，背景呈淡绿色。背景呈淡绿色。原理：铬酸氧化真菌内的多糖化合物，醛基暴露，原理：铬酸氧化真菌内的多糖化合物，醛基暴露，醛基将六胺银中的银还有呈黑色的金属银醛基将六胺银中的银还有呈黑色的金属银过碘酸过碘酸-Schiff（PAS）反应法：）反应法：结果：真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色结果：真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色。原理：原理：色素和矿物质色素和矿物质生物体内的色素可分为：生物体内的色素可分为：1）内源性色素：）内源性色素：血源性色素：含铁血黄素，血红素，卟啉等血源性色素：含铁血黄素，血红素，卟啉等 非血源性色素非血源性色素 内源性矿物质内源性矿物质2）人工色素：组织成分和一些化学物质之间相互）人工色素：组织成分和一些化学物质之间相互作用后产生的物质沉积，如福尔马林色素作用后产生的物质沉积，如福尔马林色素3）外源性色素和矿物质：外源性物质进入人体）外源性色素和矿物质：外源性物质进入人体色素和矿物质染色色素和矿物质染色铁染色：铁染色：组织内沉积的铁质主要以含铁血黄素的方式存在，组织内沉积的铁质主要以含铁血黄素的方式存在，HE染染色下呈黄色至褐色颗粒，以氢氧化铁形式存在于蛋白质结色下呈黄色至褐色颗粒，以氢氧化铁形式存在于蛋白质结构中，含铁血黄素中的铁可分为三价和二价铁，可用不同构中，含铁血黄素中的铁可分为三价和二价铁，可用不同方式显示。方式显示。色素和矿物质染色色素和矿物质染色Perls blue（普鲁士蓝）染色：（普鲁士蓝）染色：Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁 原理：盐酸与含铁血黄素中的三价铁反应形成三氯化铁，三氯化铁与亚铁氰化钾反应生成一种稳定的化合物蓝色的亚铁氰化铁（普鲁士蓝）。结果：含铁血黄素呈蓝色，其他组织浅红色。色素和矿物质染色色素和矿物质染色Turnbull-Sehmaltzer铁染色：铁染色：显示二价铁和三价铁显示二价铁和三价铁 原理：组织中同时含有二价和三价铁，经硫化氨处理后三价原理：组织中同时含有二价和三价铁，经硫化氨处理后三价铁转变为二价铁，原来存在的二价铁不变，与铁转变为二价铁，原来存在的二价铁不变，与Turnbull反反应呈蓝色，若不经硫化氨处理，直接与应呈蓝色，若不经硫化氨处理，直接与turnbull反应，则反应，则只显示二价铁只显示二价铁结果：含铁血黄素呈蓝色，其他组织浅红色。结果：含铁血黄素呈蓝色，其他组织浅红色。色素和矿物质染色色素和矿物质染色 黑色素（Melanin）在黑色素母细胞内合成，黑色素母细胞起源干神经脊，在胚胎发育过程中，由神经脊移行到皮肤、眼和中枢神经系统。皮肤的表皮、毛囊、眼的虹膜、睫状体、脉络膜，脑的软脑膜、黑质、蓝斑、迷走背核，以及交感神经节和脊神经节的节细胞内均可有黑色素沉着。Masson-Fontana银染色法原理：黑色素具有还原性，嗜银，将染液中银还原后使黑色素着色 结果：黑色素及嗜银细胞颗粒呈黑色。色素和矿物质染色色素和矿物质染色应用应用:l黑色素瘤的诊断和鉴别l含铁血黄素、脂褐素及非色素性黑色素瘤和假性黑变瘤色素相鉴别。色素和矿物质染色色素和矿物质染色脱黑色素染色：脱黑色素染色：氯化钾乙醇盐酸法：氯化钾乙醇盐酸法：高锰酸钾草酸法：高锰酸钾草酸法：通常制作通常制作3张连续石蜡切片，一张染张连续石蜡切片，一张染HE，一张作，一张作黑色素染色，一张作脱色素。黑色素染色，一张作脱色素。结果：细胞内黑色素完全消失。结果：细胞内黑色素完全消失。应用：鉴别组织内颗粒是否为黑色素颗粒。应用：鉴别组织内颗粒是否为黑色素颗粒。色素和矿物质染色色素和矿物质染色色素与矿物质色素与矿物质其他色素和矿物质染色其他色素和矿物质染色：l 三氯醋酸染色法显示胆色素（绿色）l Von Kossa法显示钙盐（黑色）l 红氨酸铜染色（绿色或黄绿色）l PAS，Gomori等显示脂褐素DNA染色法染色法 DNA常用酸水解常用酸水解-无色品红染法（无色品红染法（Feulgen染色染色法）显示，通过酸水解，打开法）显示，通过酸水解，打开DNA的嘌呤基的嘌呤基-糖苷，糖苷，释放出反应型醛基，游离醛基与释放出反应型醛基，游离醛基与Schiff试剂结合，试剂结合，形成紫红色复合物，从而显示形成紫红色复合物，从而显示DNA。DNA染色染色应用：应用：l 用于肿瘤的诊断和研究，测定用于肿瘤的诊断和研究，测定DNA含量，有助于含量，有助于判断肿瘤的良恶性及分化程度，并估计肿瘤患者判断肿瘤的良恶性及分化程度，并估计肿瘤患者的预后。的预后。骨组织技术骨组织技术l 骨组织主要由矿物质，细胞和细胞外基质构成骨组织主要由矿物质，细胞和细胞外基质构成l骨的矿物质主要是钙和磷，与氢氧根离子骨的矿物质主要是钙和磷，与氢氧根离子结合形成羟基磷灰石结晶结合形成羟基磷灰石结晶l矿物质是维持骨硬度的主要原因矿物质是维持骨硬度的主要原因骨的脱钙骨的脱钙l 利用化学制剂将骨组织中的钙盐除去的过程称脱钙利用化学制剂将骨组织中的钙盐除去的过程称脱钙l 脱钙剂主要有两种：酸性脱钙剂和螯合剂脱钙剂主要有两种：酸性脱钙剂和螯合剂l 酸性脱钙剂包括强酸：盐酸，硝酸；弱酸：甲酸，乙酸，酸性脱钙剂包括强酸：盐酸，硝酸；弱酸：甲酸，乙酸，苦味酸苦味酸l 螯合剂螯合剂EDTA，在，在pH77.4时可以与钙结合时可以与钙结合l 酸性脱钙剂脱钙迅速，但不利于抗原的保存酸性脱钙剂脱钙迅速，但不利于抗原的保存l 螯合剂脱钙慢，可保存抗原螯合剂脱钙慢，可保存抗原l 应注意观察脱钙是否理想，过度脱钙可造成组织破坏应注意观察脱钙是否理想，过度脱钙可造成组织破坏l 脱钙结束后应流水冲洗，以除去组织表明的酸性物质脱钙结束后应流水冲洗，以除去组织表明的酸性物质其他染色其他染色l 神经病理的特殊染色l 酶组织化学l 神经内分泌颗粒，细胞内颗粒的染色