正常家兔磺胺嘧啶钠药动学参数的测定

1正常家兔磺胺嘧啶钠药动学参数的测定中国医科大学药学院药理教研室孙也之 1.掌握家兔动脉插管的手术过程；掌握家兔动脉插管的手术过程；2.熟悉磺胺嘧啶钠血药浓度测定原理与熟悉磺胺嘧啶钠血药浓度测定原理与 测定方法；测定方法；3.了解药动学参数的计算方法。了解药动学参数的计算方法。.实验目的实验目的.实验药品实验药品:1.20%磺胺嘧啶钠磺胺嘧啶钠2.30mg%磺胺嘧啶钠（标准液）磺胺嘧啶钠（标准液）3.5%三氯醋酸三氯醋酸 4.0.5%麝香草酚（用麝香草酚（用20%NaOH溶液配制）溶液配制）5.0.5%亚硝酸钠亚硝酸钠6.2N盐酸盐酸7.1%肝素（肝素（1ml/kg）8.20%乌拉坦（乌拉坦（5ml/kg）.实验动物实验动物家兔，家兔，2.02.5kg.实验设备实验设备1.家兔操作台家兔操作台 2.手术器械手术器械 l手术刀l大镊子l止血钳l弯头小镊子l眼科剪刀l玻璃钩.实验设备：实验设备：3.动脉插管动脉插管 4.722型可见光分光光度计型可见光分光光度计.实验设备：实验设备：5.离心机离心机.实验步骤：实验步骤：1.取家兔，称重，通过耳缘静脉给取家兔，称重，通过耳缘静脉给20%乌拉坦乌拉坦(5ml/kg).耳缘静脉注射耳缘静脉注射如何确定家兔已经被完全麻醉呢如何确定家兔已经被完全麻醉呢?家兔同时出现以下三种体征家兔同时出现以下三种体征:1.肌张力减弱；肌张力减弱；2.呼吸速率逐渐减慢；呼吸速率逐渐减慢；3.角膜反射消失。角膜反射消失。2.颈动脉剖开颈动脉剖开固定家兔头部、绑四肢；固定家兔头部、绑四肢；用弯剪清理颈部毛发；用弯剪清理颈部毛发；沿家兔解剖学正中线摸到颈部甲沿家兔解剖学正中线摸到颈部甲状软骨，用手术刀沿甲状软骨向状软骨，用手术刀沿甲状软骨向下切开颈部皮肤下切开颈部皮肤5-7cm，血管钳，血管钳钝性分离，暴露气管；钝性分离，暴露气管；游离气管一侧的颈总动脉，与周游离气管一侧的颈总动脉，与周围组织及迷走、交感神经分离；围组织及迷走、交感神经分离；为了防止凝血，由耳缘静脉注射为了防止凝血，由耳缘静脉注射1%肝素（肝素（1ml/kg）；）；颈总动脉下穿过两根手术线，一颈总动脉下穿过两根手术线，一根线头端结扎，另一根线备用，根线头端结扎，另一根线备用，心端用动脉夹夹住。心端用动脉夹夹住。眼科小剪刀近头侧结扎处下剪小眼科小剪刀近头侧结扎处下剪小口，插动脉插管，结扎，固定。口，插动脉插管，结扎，固定。3.空白血样品收集：空白血样品收集：从动脉插管放空白血从动脉插管放空白血0.5ml，用离心管收集，并摇匀。，用离心管收集，并摇匀。4.给药：给药：向一侧耳缘静脉内注入向一侧耳缘静脉内注入20%的磺胺嘧啶钠（的磺胺嘧啶钠（1ml/kg）5.血样品收集：血样品收集：在给药后每个时间点收集在给药后每个时间点收集0.5ml血样。血样。时间点：时间点：1、3、5、15、30、60、90、120min。每次取血前，要先放每次取血前，要先放2滴血再取，以免不同时间点的血滴血再取，以免不同时间点的血样间产生污染。样间产生污染。注意事项注意事项动脉插管后，由耳缘静脉注射肝素（动脉插管后，由耳缘静脉注射肝素（1ml/kg）。）。采血试管取血前一定要用肝素浸润；每次取血之前要先将残采血试管取血前一定要用肝素浸润；每次取血之前要先将残血放掉。血放掉。每吸取一个血样时，必须更换枪头；加样时枪头不要碰到三每吸取一个血样时，必须更换枪头；加样时枪头不要碰到三氯醋酸液面。氯醋酸液面。将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。加亚硝酸钠和麝香草酚的顺序不要混乱。加亚硝酸钠和麝香草酚的顺序不要混乱。注意各比色杯要清洗干净、擦干并匹配、取药液要准确。注意各比色杯要清洗干净、擦干并匹配、取药液要准确。离心时要注意离心管的配平。离心时要注意离心管的配平。注意严格按照注意严格按照722型分光光度计操作方法进行操作。型分光光度计操作方法进行操作。.试管实验试管实验 v 本实验测定磺胺嘧啶钠的原理：本实验测定磺胺嘧啶钠的原理：显色原理：磺胺类药物在酸性溶液中，可使苯环上的氨基（显色原理：磺胺类药物在酸性溶液中，可使苯环上的氨基（-NH2）离子化生成铵类化合物（）离子化生成铵类化合物（-NH3+），进而与亚硝酸钠起），进而与亚硝酸钠起重氮反应，产生重氮盐（重氮反应，产生重氮盐（-N=N+-）。此重氮盐在碱性溶液中）。此重氮盐在碱性溶液中与酚类化合物如麝香草酚起偶联反应，生成橙红色的偶氮化合与酚类化合物如麝香草酚起偶联反应，生成橙红色的偶氮化合物。物。偶氮染料的显色深浅与磺胺的浓度有关。可用光度计测出其吸偶氮染料的显色深浅与磺胺的浓度有关。可用光度计测出其吸光度，通过与标准品吸光度的比较及运算，即可推算出磺胺的光度，通过与标准品吸光度的比较及运算，即可推算出磺胺的浓度。计算公式如下：浓度。计算公式如下：偶氮染料（橙红色）麝香草酚重氮盐磺胺药 NaOHNaNOHCl2度）吸光给药前测定管度吸光（给药后测定管度吸光标准管浓度mg%管标准血浆中磺胺浓度mg%1.脱蛋白脱蛋白 取空白血样与各时间点血样取空白血样与各时间点血样0.2ml，放入各离，放入各离心管中并标记，每个离心管分别加水心管中并标记，每个离心管分别加水1.8ml(标准管加水标准管加水1.6ml)；另取另取30mg%磺胺嘧啶钠标准液磺胺嘧啶钠标准液0.2ml加入到标加入到标准管中，以配置标准血样品；准管中，以配置标准血样品；各试管分别加入各试管分别加入5%三氯醋酸三氯醋酸4ml，并摇匀，然，并摇匀，然后后1000rpm离心离心5min。2.重氮化及偶联呈色重氮化及偶联呈色从各离心管提取上清从各离心管提取上清2.0ml并转移至玻璃试管中并转移至玻璃试管中试剂按照如下顺序添加：试剂按照如下顺序添加：0.5ml 2N HCl 0.5ml 0.5%NaNO2 1.0 ml 0.5%麝香草酚，然后摇匀。麝香草酚，然后摇匀。注意：加亚硝酸钠和加麝香草酚的顺序不要颠倒！注意：加亚硝酸钠和加麝香草酚的顺序不要颠倒！NH2SO2NHRNaNO3CCl3COOHNNClSO2NHR+H3COHCH(CH3)2NaOHNH3CONaCH(CH3)2N3.分光光度计分析：分光光度计分析：每个样品的吸光度值由每个样品的吸光度值由722型分光光度计测型分光光度计测定，最大吸收波长设定于定，最大吸收波长设定于480nm.以空白血样品作为空白对照进行分光光度计以空白血样品作为空白对照进行分光光度计调零。调零。计算血药浓度计算血药浓度偶氮染料的显色深浅与磺胺的浓度有关。可用光度偶氮染料的显色深浅与磺胺的浓度有关。可用光度计测出其吸光度值，通过与标准品吸光度值的比较计测出其吸光度值，通过与标准品吸光度值的比较及运算，即可推算出磺胺的浓度。计算公式如下：及运算，即可推算出磺胺的浓度。计算公式如下：度）吸光给药前测定管度吸光（给药后测定管度吸光标准管浓度mg%管标准血浆中磺胺浓度mg%实验结果实验结果Table 1.结果记录表 实验结果实验结果1.1.以时间为横坐标，浓度的对数为纵坐标，在半对数图以时间为横坐标，浓度的对数为纵坐标，在半对数图上绘制磺胺嘧啶钠的药时曲线，以上绘制磺胺嘧啶钠的药时曲线，以lgClgC对对t t做直线回归，做直线回归，得方程得方程:lgC=a+bt:lgC=a+bt。按。按lgC-tlgC-t图判断房室数，如果基图判断房室数，如果基本上为一条直线则按一室模型处理本上为一条直线则按一室模型处理一室模型图问题：问题：1测定半衰期有何意义？测定半衰期有何意义？2根据根据Vd=DCo，当用药剂量，当用药剂量400mgkg（D）你能计算出零时血药浓度）你能计算出零时血药浓度Co及表现分及表现分布容积布容积Vd吗？吗？