尿液蛋白质定量测定方法及临床意义

尿液蛋白质定量测定方法及临床意义【摘要】正常人尿液中含有微量的蛋白质,每天排出量在150mg以下,其中以白蛋白占多数,随不同病种有一定量的球蛋白和其它蛋白。随着肾病科研工作的开展,以观察患者每天排出蛋白质的量以示病情的变化,因此尿液蛋白质定量在临床上有实际应用价值,已成为医院化验室常规的检验项目。 【关键词】尿液蛋白质检测 1丽春红-S法 尿液标本中的蛋白质与丽春红-S染料混匀后一起被三氯醋酸沉淀，将沉淀物溶解于碱性溶液中，此时溶液呈紫色，显色深度与蛋白质浓度成正比。 1.1试剂 三氯乙酸-丽春红-S试剂原液：称取丽春红-S1.0g，加入到1000ml300gL三氯乙酸中溶解。 三氯乙酸-丽春红-S试剂应用液：将原液用蒸馏水按1：10稀释，放置室温稳定数月。 蛋白定性试剂。0.2molL氢氧化钠溶液。 蛋白标准曲线：把定值蛋白稀释成不同的浓度，按操作测定其吸光度，以吸光度为横坐标，以稀释后的蛋白浓度为纵坐标绘制标准曲线。 1.2操作先做尿蛋白定性试验，以适当稀释标本。在试管中加入100l标本，再加入1ml三氯乙酸一丽春红-S应用液，混匀后以3000rmin离心15分钟，吸去上清液，倒置于洁净滤纸上。在沉淀中加入02molL氢氧化钠溶液lml，用560nm波长测定其吸光度，查标准曲线的蛋白含量。 1.3参考值46.5181mgL 1.4注意事项：尿液如被稀释应乘以稀释倍数。尿中血红蛋白含量>5mgL时影响结果。离心后上清必须全部弃去，若沉淀中夹带有丽春红-S影响比色结果。 2双缩脲比色法 以磷钨酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白质，在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫红色络合物，与标准液比色即可得出尿中蛋白质的含量。 2.1试剂 蛋白沉淀液：称取磷钨酸7.5g，加入30ml蒸馏水、95乙醇385ml、浓盐酸25ml。 双缩脲液：(1)称取枸橼酸钠346g，无水碳酸钠20g，加入120ml蒸馏水使其溶解；(2)称取硫酸铜346g，加入20ml蒸馏水使其溶解。将(1)、(2)混合，加入蒸馏水至200ml，备用。075molL氢氧化钠溶液。蛋白标准液(15gL)：称取150mg结晶型冻干人血清白蛋白，加入100ml的3gL苯甲酸溶液溶解。 2.2操作取5ml24小时混合尿液，25003000rmin离心5分钟，取上清备检。混匀放入56水浴15分钟，取出后离心，倾上清留沉淀。075mol1 NaOH151515 双缩脲液010101 各管混匀置室温10分钟，在540nm波长，以空白管调“0”比色。 2.3结果计算尿蛋白含量(gL)=测定管吸光度标准管吸光度15 2.4参考值<150mg24h尿、 2.5注意事项：记录24小时尿量，将尿液混合后再离心。先做尿标本蛋白定性试验，若为阳性再做本试验。尿蛋白浓度较高时应稀释标本再操作。若疑有药物干扰时，可将尿蛋白沉淀物用无水乙醇洗涤3次再操作。 3考马斯亮蓝法 在酸性介质中考马斯亮蓝与尿液中的蛋白质NH3+基团结合，发生由棕色到蓝色的颜色变化，光谱吸收峰由465nm移至595nm。与标准液相比即可测出尿蛋白质含量。 3.1试剂 考马斯亮蓝溶液：(1)称取75mg考马斯亮蓝G-250溶于40ml甲醇中；(2)加入蒸馏水800ml、85的浓硫酸100ml、浓盐酸5ml；(3)称取30mg十二烷基磺酸钠，溶于(2)中；(4)加蒸馏水至1000ml，用滤纸过滤至棕色瓶中，室温保存。 蛋白标准液(1g/L)以3g/L苯甲酸溶液稀释蛋白质标准。 3.2操作 留取24小时尿标本混匀，取5ml尿液离心后取上清备检。室温放置5分钟，以空白管调“0”，波长600nm读取光密度。 3.3结果计算 尿蛋白质含量(gL)=测定管吸光度标准管吸光度10 3.4参考值(2061726)mg24h 3.5注意事项：考马斯亮蓝溶液要定期新鲜配制，过滤后才可使用。测定标本时应同时测定蛋白质标准管。尿中的水杨酸类药物、麝香草酚和去污剂等可产生颜色干扰。尿标本蛋白质定性试验在(+)以上需稀释后测定。 4微量蛋白检验 尿液微量蛋白包括纤维蛋白降解产物、尿1微球蛋白、尿2微球蛋白、微量白蛋白等。 4.1纤维蛋白降解产物(fibrinogendegradationproducts，FDP)FDP是纤维蛋白(原)经纤溶酶作用降解的产物。其检测现多用免疫学方法：免疫胶乳凝集法和ELISA法。正常人尿液无FDP。当肾脏及尿路局部炎症时，其渗出的少量纤维蛋白经纤维蛋白溶解酶降解，产生FDP。当肾小球病变至肾小球滤过膜通透性增高时，FDP碎片排于尿中。血液FDP增高时，尿液FDP排泄也增多。 4.21-微球蛋白1-微球蛋白(1-microglobulin，1-M)是一种小分子量糖蛋白，由肝脏与淋巴细胞合成，广泛存在于体液及淋巴细胞膜表面。血液中存在两种形式的1-M，一种为游离形式，另一种为与IgA结合形式。前者易被肾小球滤过，几乎全部被肾小管重吸收和代谢。检测方法多采用放射免疫法和ELISA法。 临床意义：单纯尿1-M增加见于早期肾小管损害。血与尿中1-M均增高多见于肾小管与肾小球功能障碍如慢性肾功能衰竭。尿中出现结合型1-M提示肾小球滤过膜受损。 4.32-微球蛋白2-微球蛋白(2-microglobulin，2-M)是一种小分子量单链多肽，是人类白细胞抗原I类抗原的轻链，经肾小球完全滤过，由肾近曲小管以胞饮方式摄取并降解为氨基酸，不返流入血液。 检测方法多采用放射免疫法和ELISA法，正常人尿液2-M含量少(<0.2mgL)。 临床意义：当肾小球滤过率下降或肾近曲小管损害时，血中2-M增高；超过正常3倍时，尿中2-M也增高。 4.4微量白蛋白微量白蛋白(microalbumin，M-alb)尿是肾病的早期征兆，是反映肾小球毛细血管壁通透性的指标。检测方法多采用放射免疫法和ELISA法。当尿液白蛋白浓度在30300mg24h(或20200mgL)时，用常规方法检测尿液蛋白仍为阴性。 临床意义：当尿常规试条检测蛋白为阳性时，此时白蛋白浓度已大于200mgL，称为大量白蛋白尿。早期检测M-alb是监测肾脏病变的有效方法，尤其对糖尿病肾病的早期诊断具有重要价值。当白蛋白>300mg/24h时，糖尿病肾病的预后较差。另外，对于高血压患者，可以预示高血压病的发病率及死亡率。 5尿蛋白测定的临床意义 正常人终尿中的蛋白质含量很少，仅为30130mg24h。随机一次尿中蛋白质为080mgL。当尿液中蛋白质超过正常范围时称为蛋白尿。 参考文献 1戴慧莉,钱家麒,严玉澄.低分子量尿蛋白在原发性肾小球肾炎中的作用.上海第二医科大学学报,2003,23(5):4232426. 2沈霞.电泳技术的现状和发展.中华检验医学杂志,2001,24(5):2632265. 3赵绍林,吴惠毅,杨新玲,等.超薄琼脂糖凝胶的简易制备技术.临床检验杂志,2004,22(4):251. 4沈霞,张敏华,汪萍,等.非浓缩尿蛋白电泳的临床应用.中华检验医学杂志,2001,24(5):266268.