萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2 的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响

氨基酸和生物资源Amino Acids & Biotic Resources ,23(1):45 47 45 萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL- 2的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响*陈小君, 冯翠萍, 梅承恩 刘 昕(中山医科大学肿瘤研究所, 广州510060) (中山大学生命科学学院, 广州510275)摘要: 目的: 探讨萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响措施:实验小鼠随机提成实验组（低剂量组4 g/kg/d；高剂量组:8 g/kg/d）和对照组（与实验组用同体积的生理盐水）,持续用药10天用3HTdR掺入法进行检测成果:与对照组相比萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2分泌有明显增进作用并能明显提高小鼠脾淋巴细胞转化增殖,并有一定的量效关系结论:萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠免疫功能有明显的增进作用,这也许与其增进细胞因子的分泌和淋巴细胞转化增殖有关核心词: 萌动激活/赤灵芝孢子粉; 3HTdR法; IL-2; 淋巴细胞转化增殖中图分类号: R967 文献标记码: A 文章编号: 1006-8376()01-0045-03 灵芝孢子(The spores from Ganoderma lu- cidum Karst) 是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来的象淡雾状的极其微小的孢子,具有灵芝的所有遗传活性物质以往的研究表白,灵芝孢子粉有抗病抗衰老作用;灵芝对机体的免疫功能具有调节作用2-7灵芝孢子粉亦能全面提高小鼠的免疫功能,增强机体的抗病能力1本文初次用萌动激活的赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2(白细胞介素-2)的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响进行研究,从而进一步探讨灵芝孢子粉的免疫调节功能的机理,为临床应用提供根据1 材料和措施1.1 实验动物 实验用NIH小鼠,由广东省卫生厅实验动物中心提供 鼠重20 22g, 雌雄各半C57BL/6J小鼠(8周鼠龄)由广东省卫生厅实验动物中心提供1.2 药物与试剂 萌动激活赤灵芝孢子口服液(0.2 g/ml)由中山大学国家教育部食品工程研究中心及广州绿色盈康生物工程有限公司提供ConA, PHA为Sigma产品；3H-TdR：中科院北京原子能所,比活性20 Ci/mmol;1.3 实验措施 随机将小鼠提成实验组(低剂量组高剂量组)和对照组,每组10只,低剂量 组和高剂量组每天剂量为4 g/kg和8 g/kg,对 照组口服同体积的生理盐水,连服10天1.3.1 小鼠脾细胞对丝裂原增殖反映: 3H- TdR掺入法9,实验时将NIH小鼠处死后,用75%酒精浸泡小鼠半晌,无菌取出小鼠脾脏,将脾脏研成细胞悬液,过200目不诱钢筛,计细胞数,调节细胞浓度为1107/ml的脾细胞悬液取脾细胞悬液50 1(5105细胞)加入96孔平板中,加Con A2 g/孔,或PHA 20 g/孔,平行样3份置于37 C,5%CO2孵育箱中培养72h,终结培养前6h每孔加入0.5 1 Ci 3H-TdR,多头细胞收集器收集细胞,液闪计数仪测量3HTdR掺入1.3.2 IL-2待测样品的制备和活性测定: 取实验的 NIH 小鼠脾细胞悬液50 1, 加入24孔板,对照组和实验组（低剂量组和高剂量组）分* 收稿日期:-11-07作者简介:陈小君(1936- ), 女, 中山医科大学专家, 重要从事抗癌药物药理学和肿癌生物学研究 46 陈小君, 等. 萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响别加3个平行样,然后,分别加入ConA 3 g/ ml和脾细胞数为5105/ml,每孔总体积为1 ml,将培养板置37 C含5%CO2培养箱中培养24h后,收集上清液即为含IL-2的待测样品C57BL/6J小鼠8周鼠龄,先无菌制备细胞悬 液,计数细胞后,调节细胞浓度为23105/ ml,加入ConA 3 g/ml,置37 C含5% CO2培养箱中培养72h,用淋巴细胞分离活化好的淋巴 母细胞,即为活化小鼠脾细胞,作为测定IL-2 的靶细胞用淋巴细胞分离液分离和活化小鼠脾细胞,用培养液洗三次后,用10%新生牛血 清加1640培养液将细胞浓度调为1106/ml, 将100 g细胞悬液和1:3稀释的待测样品 10 1加入96孔板中,置37 C,5% CO2培养箱 中培养24h,培养结束前4h加3HTdR 0.5 Ci,培养结束后用多头样品收集器收集培养 物,用液闪计数仪测定其放射活性(cpm)2 成果2.1 萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾淋巴细胞转化增殖的作用实验成果表白灵芝孢子粉口服液对小鼠淋巴细胞转化增殖有一定的增进作用,并有量效关系(见表12)表1. 萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响组别 剂量/天3H-TdR cmp(Xs)P *ConA(2g/ml) PHA(20g/ml)对照组 20 mg/kg 18132319 714580低剂量组 4 g/kg25897436 13334960 0.0001高剂量组 8 g/kg28128556 15945836 0.0001* 与对照组比2.2 萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2分泌的影响萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL- 2的分泌有一定的增进作用并有量效关系 (见表2) 表2. 萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2分泌的影响组别剂量/天3H-TdR cmp(Xs)P*ConA (3g/ml) 对照组20 mg/kg17067601-低剂量组4 g/kg2577310340.0001高剂量组8 g/kg285233930.0001* 与对照组比3 讨论淋巴细胞及白介素均参与机体的免疫反映淋巴细胞转化率的增长阐明有成熟T细胞的增多,即可提高机体的免疫功能;白介素-28(Interleukin-2, IL-2)是与T淋巴细胞从细胞周期G1期到S期进展有关的重要细胞因子, IL-2作用于产生它的同一细胞,也作用于附近的T淋巴细胞,因此IL-2即是一种自分泌生长因子也是一种旁分泌生长因子IL-2可刺激NK细胞生长并增强它的溶细胞作用,产生所谓的淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)IL-2还可以作用于人类B细胞,既可以作为生长因子又是抗体合成的刺激物由此可见IL-2对机体的免疫功能亦有明显的增进作用本实验的成果表白:灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2分泌有明显的增进作用;灵芝孢子粉能明显提高小鼠脾淋巴细胞转化率阐明灵芝孢子对小鼠免疫功能有明显增进作用因而可以觉得灵芝孢子粉引起的淋巴细胞转化率的提高及IL-2分泌的增多是其对机体的免疫调节功能的机理之一参照文献:1黄邵新, 等. 灵芝孢子粉对小鼠免疫功能的影响J. 河北医药, 1997, 19 (1) : 25.2章灵华, 等. 灵芝孢子粉提取物在体内外的免疫效应J. 中国药理通讯, 1992, 9 (3) : 4.3陈小君, 等. 萌动激活赤灵芝孢子的抑瘤作用研究J. 中草药, , 31 (增刊) : 94.4丁余成, 等. 中草药非特异性免疫作用在抗疾病疗效中的意义J. 福建中医, 1989, (1) : 45.5张庆萍, 等. 灵芝孢子粉对肝脏保护作用的药理 氨基酸和生物资源 47 研究J. 中草药,31(增刊):94.6顾立刚, 等. 薄盖灵芝对小鼠体内外免疫反映的研究J. 基本中药, 1997, 11 (1) : 40.7何来英, 等. 赤芝水提取物对菏瘤鼠免疫功能的影响J. 中国食品卫生杂志, 1994, 6 (2) : 1.8 林学颜, 等. 细胞因子的分类与功能J. 现代医学进展, 1999, 1月, 第28页.9 丁 雁, 等. 淫羊藿多糖增进小鼠T和B细胞3HTdR掺入和诱生干扰素作用的研究J. 中 国免疫学杂志, 1985, 1 (6) : 342.Effects of Actively Germinating Ganoderma Sporeon the Secretion of IL - 2 and the Transformation and Proliferation of Mouse SplenocyteCHEN Xiao-jun, FENG Cui-ping, MEI Cheng-en(Cancer Institute, SunYat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510060)LIU Xin(School of Life Sciences, SunYat-sen University, Guangzhou 510275)Abstract: To explore the action of actively germinating ganoderma spore on the secretion of IL-2 and the transformation and proliferation of mouse splenocyte. Methods: 3H-TdR incorporation scintillation count assays. Results: Compared with the control, the actively germinating ganoderma spore not only dramatically increased the secretion of IL-2 but also enhanced the transformation and proliferation of mouse splenocyte with dose manner. The actively germinating ganoderma spore possesses obviously im- muno-promoting effect on mouse immune system and this effect might be related with the secretion of cytokines and the proliferation and transformation of lymphocyte.Key words: Actively germinating Ganoderma spore, 3H - TdR incorporation assays; IL-2; Trans- formation and proliferation of lymphocyte