离体蛙心灌流

一、 实验目的：学习斯氏离体蛙心灌流法；理解心肌的生理特性；观测Na+、K+、Ca+、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响。二、 实验原理：将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在合适的环境中，在一定的时间内仍然可以保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一种合适的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过变化灌流液的某些成分，观测其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L）,心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，体现为收缩力削弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期，血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度减少，心肌收缩力削弱，血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可以使心率加快、传导加快及心肌收缩力加强，乙酰胆碱则肾上腺素的作用相反。三、 实验仪器：青蛙、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针型露丝刺激电极、滴管、培养皿（或小烧杯）、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管（斯氏套管或八木式套管）、套管夹、氯化钠溶液、氯化钙溶液、氯化钾溶液、肾上腺素、乙酰胆碱、肝素。四、 实验环节：1、斯氏蛙心插管法：（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的措施暴露心脏。仔细辨认心脏周边的大血管(见右图)。在左积极脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。再从左右两积极脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起积极脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小合适的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内23 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端达到动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推动，经积极脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表白操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右积极脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保存静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(1.52 cm)，即可进行实验。 （2）将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少量心尖部肌肉 (不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一种滑轮与张力传感器相连（如右图）。注意：勿使灌流液滴到传感器上。调节显示屏上心脏收缩曲线的幅度适中。 2、 实验观测 (1)记录正常心搏曲线 (2)改用065NaCI溶液灌流，并作好加药标记，观测心搏变化。待曲线 氏插管装置浮现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同步做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗23次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同步保持灌流液面一致(如下同)。 观测可得，NaCI溶液会阻遏心脏搏动。 (3)向套管内加26滴5NaCI(较细的套管需少加)溶液，作好加药记号，观测心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线浮现明显变化时，应立即吸去套管中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清洗23次，待心搏恢复正常。 (4)同法向套管内加入13滴2CaCI：溶液，观测并记录心搏曲线的变化。当浮现明显变化时，立即更换任氏液，待心搏恢复正常(如果恢复缓慢，可多次冲洗)。 (5)向套管中加12滴1KCl溶液，记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时，同法更换灌流液，待心搏恢复正常。 (6)同法记录套管中加入l2滴的肾上腺素溶液(1：10 000)后心搏曲线的变化。 (7)同法记录套管中加入12滴乙酰胆碱溶液(1：10 000)后心搏曲线的变化。五、实验成果： 由计算机采集系统所测定的相应曲线如下： 正常蛙心图像加入钠离子之后的蛙心图像加钙离子之后的蛙心图像加钾离子之后的蛙心图像加肾上腺素之后的蛙心图像加乙酰胆碱之后的蛙心图像六、注意事项：1. 制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。 2 .上述各实验项目，一旦浮现作用应立即用正常任氏液换洗，以免心肌受损，并且必须待心搏恢复正常后方能进行下一步实验。 3. 复习心肌生物电的产生机制及多种离子对心脏活动的影响。 4. 尽量选用强健、体大的雄性蟾蜍，手术过程中注意保护心脏，避免损伤。 5. 实验中及时用任氏液冲洗心脏，待曲线恢复平稳后再进行下一步操作。 6. 每次更换任氏液都必须保持灌流液液面高度恒定，以免因灌流量变化而影响成果。7. 严格控制每次药物加入量，先加一滴，效果不明显再加一滴。 8. 滴加药物和换取正常任氏液，须及时标记，以便观测分析。 9. 吸滴瓶中的任氏液和吸蛙心套管内溶液的吸管应辨别专用，不可混淆使用，以免影响实验成果。七实验感想 这次实验比较简朴，我们较快的完毕了实验。我们清晰的观测了蛙心脏离体跳动，以及加不同刺激的变化。