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微生物实验技术,第一章,实验室建设及设备仪器,实验室建设及设备仪器,1.1 实验室建设 1.2 实验环境控制 1.3 常用仪器及其使用要领 1.4 常用器皿 1.5 型微生物厂主要仪器及设备,1.1 实验室建设,1.1.1 微生物实验室设计 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。,1.1 实验室建设,1.1.2 微生物实验室基本要求 （一）准备室 准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。 （二）洗涤室 洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。,1.1 实验室建设,（三）灭菌室 灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。 （四）无菌室 无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。,1.1 实验室建设,1. 无菌室的设置 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点： （1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。内间面积22.55m2，外间面积122m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。 （2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。,1.1 实验室建设,（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。 （4）无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台最远的位置），最好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。,1.1 实验室建设,2. 无菌室内设备和用具 （1）无菌室内的工作台，不论是什么材质、用途的，都要求表面光滑和台面水平。 （2）在内室和外室各安装一个紫外灯（多为30W）。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方，离地面2m，外室的紫外线灯可安装在外室中央。 （3）外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏儿水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。 （4）内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻璃片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。,1.1 实验室建设,3. 无菌室的灭菌消毒 （1）薰蒸：这是无菌室彻底灭菌的措施。无菌室使用了较长时间，污染比较严重时，应进行薰蒸灭菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。 （2）喷雾：在每次使用无菌室前进行。喷雾可促使空气中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微尘飞场，并有杀菌作用。可用5%石炭酸喷雾。 （3）紫外线照射：在每次使用无菌室前进行。紫外线有较好的杀菌效果。通常应开启紫外线灯照射3060min。,1.1 实验室建设,4. 无菌室工作规程 （1）无菌室灭菌。每次使用前开启紫外线灯照射30min以上，或在使用前30min，对内外室用5%石炭酸喷雾。 （2）用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室换上已灭菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液将手浸洗2分钟。 （3）将各种需用物品搬进内室清点、就位，用5%石炭酸在工作台面上方和操作员站位空间喷雾，返回外室，510min后再进内室工作。,1.1 实验室建设,（4）接种操作前，用70%酒精棉球擦手；进行无菌操作时，动作要轻缓，尽量减少空气波动和地面扬尘。 （5）工作中应注意安全。如遇棉塞着火，用手紧握或用湿布包裹熄灭，切勿用嘴吹，以免扩大燃烧；如遇有菌培养物洒落或打碎有菌容器时，应用浸润5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸润5%石炭酸的抹布擦拭台面或地面，用酒精棉球擦手后再继续操作。 （6）工作结束，立即将台面收拾干净，将不应在无菌室存放的物品和废弃物全部拿出无菌室后，对无菌室用5%石炭酸喷雾，或开紫外线灯照射30min。,1.1 实验室建设,（五）恒温培养室 1. 培养室的设置 （1）培养室应有内、外两间，内室是培养室，外室是缓冲室。房间容积不宜大，以利于空气灭菌，内室面积在3.24.414m2左右，外室面积在3.21.86m2左右，高以2.5m左右为宜，都应有天花板。 （2）分隔内室与外室的墙壁上部应设带空气过滤装置的通风口。 （3）为满足微生物对温度的需要，需安装恒温恒湿机。 （4）内外室都应在室中央安装紫外线灯，以供灭菌用。,1.1 实验室建设,2. 培养室内设备及用具 （1）内室通常配备培养架和摇瓶机（摇床）。常用的摇瓶机有旋转式、往复式两种。 （2）外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、手持喷雾器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。 3. 培养室的灭菌、消毒 同无菌室的灭菌、消毒措施。 小规模的培养可不启用恒温培养室，而在恒温培养箱中进行。,1.1 实验室建设,（六）普通实验室 进行微生物的观察、计数和生理生化测定工作的场所。室内的陈设因工作侧重点不同而有很大的差异。一般均配备实验台、显微镜、柜子及凳子。实验台要求平整、光滑，实验柜要足以容纳日常使用的用具及药品等。 （七）实验室其他要求 水、电、气等的容量、布设、性能均应满足实验室工作的需要。,返回,1.2 实验环境控制,1.2.1 检验的方法 （一）平板检验法 用培养微生物主要类群的常规培养基，如牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏1号培养基、马丁氏培养基、马铃薯葡萄糖培养基，分别倒成平板，每种两个，都放入无菌室内。检验时，按无菌操作各将其中一个平板的盖子打开，经过预定时间后再行盖好；另外一个不开盖子的作为对照，一起放入30环境培养，48小时后检验有无菌落生长。,1.2 实验环境控制,（二）斜面检验法 将常用的牛肉膏蛋白胨培养基斜面(与上相同)各取2管，放入无菌室。按无菌操作各将其中的一管打开棉塞，将棉塞放入灭菌的培养皿内。经过预定时间后，再将棉塞通过火焰塞好试管。连同对照一起培养，48小时后检验有无杂菌生长。,1.2 实验环境控制,1.2.2 检验时间 （一）空气灭菌后的检验 无菌室用甲醛或其它药剂熏蒸后，在开始使用前30min或1小时打开培养皿盖子，至使用无菌室时盖好，其目的是为了检验无菌室内空气灭菌的效果。 （二）紫外线灭菌效果的检验 无菌室用紫外线灯照射后，可在不同高度和不同位置用琼脂平板检验空气中的杂菌，以判断紫外线的灭菌效果。必要时应调整照射时间或紫外线灯的高度。,1.2 实验环境控制,（三）操作过程中空气污染情况的检验 为了检验在使用无菌室的过程中，由于人员的进出、器材的搬放、接种操作的动作等原因造成的空气污染的情况，可在准备工作结束后接种操作开始时打开盖子，经5min、30min或直到工作结束时再盖好，以检验在不同的使用时间内空气污染的程度。,1.2 实验环境控制,1.2.3 检验结果分析 检验用的平板或斜面，在30培养48小时后，检验是否长有菌落、菌落的数量，并由菌落形态判断杂菌的种类。一般要求平板开盖5min者应不超过3个菌落；斜面开塞30min者应不长菌落为合格。从空气中杂菌的种类可以考虑采取有效措施，增进灭菌效果。如霉菌较多，可先用5%石炭酸灭菌后，再用甲醛熏蒸；如细菌较多时，可采用乳酸与甲醛交替熏蒸的办法。,返回,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.1 显微镜 （一）显微镜的基本结构 普通光学显微镜由机械和光学两大部分组成。机械部分包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒和调节器等；光学部分包括目镜、物镜、聚光器、虹彩光圈及反光镜。显微镜结构的各部分见图1-1。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-1 显微镜构造示意图,1.物镜转换器；2.物镜；3.游标卡尺；4.载物台；5.聚光器；6.虹彩光圈 7.光源；8.镜座；9.点源开关；10.光源滑动变阻器；11.粗调螺旋； 12.微调螺旋；13.镜臂；14.镜筒；15.目镜；16.标本移动螺旋,1.3 常用仪器及其使用要领,1. 镜筒 镜筒上端装目镜，下端接转换器。镜筒有单筒和双筒两种。单筒有直立式和后倾式两种。双筒全是倾斜式的，其中一个筒有屈光度调节装置，以备两眼视力不同者调节使用。两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用。 2. 物镜转换器 转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔，用于安装不同规格的物镜。,1.3 常用仪器及其使用要领,3. 载物台 又称镜台，是放置标本的地方，多数为方形和圆形的平台，中央有一通光孔；载物台上有移动器，作用是夹住和移动标本，转动螺旋可使标本前后和左右移动，其上的刻度标尺可指明标本所在位置。 4. 镜臂 镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式（可改变倾斜度）两种。,1.3 常用仪器及其使用要领,5. 镜座 镜座连接镜臂，支撑整台显微镜，其上有反光镜。 6. 调焦装置 调节物镜和被观察物体之间距离的机件。有镜臂调节器和镜台调节器两种，前者通过升降镜臂来调焦距，后者通过升降载物台来调焦距。包括大、小螺旋调节器各一个，前者又称粗调节器，后者也叫微调节器，通过调节器调焦，可清晰地观察到标本。,1.3 常用仪器及其使用要领,7. 物镜 是接近被观察物品（标本）的镜头，亦称接物镜。根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜、高倍物镜和油镜三种，低倍物镜有4、10、20；高倍物镜有40和45；油镜有90、95和100等。数字越大，放大倍数越高。 8. 目镜 是接近观察者的眼睛的镜头，亦称接目镜。把经物镜放大的实像再放大一次，并映入观察者的眼中。通常有5、10、16等规格。,1.3 常用仪器及其使用要领,9. 聚光器 安装在载物台下，能将平行的光线聚焦于标本，增强照明度。聚光器可以升降。 10. 反光镜 是普通光学显微镜的取光设备，使光线射向聚光镜，分平、凹两面。 11. 内光源 是较好的光学显微镜自身带有的照明装置，安装在镜座内部，由强光灯泡发出光线，通过安装在镜座的集光镜射入聚光镜。,1.3 常用仪器及其使用要领,（二） 显微镜的使用方法 1. 显微镜的放置 从显微镜箱或柜内取出或放入显微镜时，应一手提镜臂，另一手托镜座，让显微镜直立，防止目镜从镜筒中脱落。显微镜应直立放置在桌上。离桌缘3cm，检查各部件是否完好，镜身、镜头必须清洁。 2 .标本放置 下降载物台或升高镜筒，使物镜远离载物台，将标本玻片置于载物台上，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下方。,1.3 常用仪器及其使用要领,3 .低倍镜观察 将低倍镜对正下方，侧面注视，用粗调节器调节上升载物台或下降镜筒，使物镜与玻片接近，距离约0.5cm处，开放光圈，下降聚光器。如有内置光源灯可通过调节电压以获取适当的照明亮度；如使用反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数，选用凹面或平面反光镜并调节其角度。 再由目镜观察，同时转动粗调节器下降载物台或升高镜筒使物镜缓缓远离玻片，标本在视野中显现后，再使用微调节器调节至图像清晰。,1.3 常用仪器及其使用要领,4 .高倍镜观察 在低倍镜下找到合适的目标并将其移至视野中心后，侧面注视，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至正下方。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后，用微调节器使物像清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录所观察到的结果。 在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦状态，这种现象称为物镜的同焦。,1.3 常用仪器及其使用要领,5 .油镜观察 使用同焦显微镜时，在高倍镜或低倍镜下找到要观察的区域后，移开镜头，在待观察的区域滴加12镜油，将油镜转至油中，调节光强，使视野的亮度合适，用微调节器调节物像清晰为止。 对于不等焦的显微镜，用粗调节器下降载物台或升高镜筒使物镜逐渐远离玻片，在标本观察区滴加镜油，然后将油镜转至镜筒下方，须在侧面注视下，用粗调节器调节上升载物台或下降镜筒，使物镜与玻片接近，将油镜前端浸入镜油中，并几乎与标本相接,1.3 常用仪器及其使用要领,6 .显微镜用毕后的处理 用粗调节器使物镜远离玻片，取下载玻片。 用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许镜头清洗液擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的镜头清洗液。 切忌用手或其它纸擦拭镜头，以免使镜头沾上污渍或产生划痕，影响观察。 用擦镜纸清洁其它物镜及目镜；用绸布清洁显微镜的金属部件。,1.3 常用仪器及其使用要领,（三）显微镜的维护和保养 显微镜是贵重精密的光学仪器，正确的使用、维护与保养，不但观察物体清晰，而且延长显微镜的使用寿命。 1 .显微镜应放置在通风干燥，灰尘少，不受阳光直接曝晒的地方。不使用时，用有机玻璃或塑料布防尘罩罩起来。也可套上布罩后放入显微镜箱内或显微镜柜内，并在箱或柜内放置干燥剂。 2 .显微镜要避免与酸、碱及易挥发具腐蚀性的化学物品放在一起，以免显微镜受损。,1.3 常用仪器及其使用要领,3 .显微镜应防止震动和暴力。粗、微调节螺旋、聚光器螺旋和标本移动器等机械部分要灵活而不松动，如不灵活可在滑动部位滴加少许润滑油。 4 .透镜表面有污垢时，可用清洁的脱脂纱布或擦镜纸，沾上少许镜头清洗液（二甲苯或石油精）揩拭，切忌用酒精，否则透镜上的胶将被溶解，而使透镜脱落。 5 .用油镜观察后，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后用擦镜纸沾少许镜头清洗液擦拭，最后用干净的擦镜纸擦干。,1.3 常用仪器及其使用要领,6 .当显微镜以灯泡为光源，且需要更换时，可将仪器底部翻转，抓住灯座反时针转90取下灯座，拔下灯泡换上新的灯泡，然后把接插件卡脚对准底座上两槽口，顺时针转90即可。 7.换保险丝时，握住保险丝座，反时针旋下保险丝座，换上好的保险丝，顺时针旋上保险丝座即可。 8.仪器长期使用后应注意在各转动部分加些润滑脂，所用油脂宜应黏度适当，避免酸性。 9.显微镜结构精密，零件不宜随意拆卸。遇故障可送厂家或有关仪器厂修理。,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.2 恒温培养箱 恒温培养箱可分为两大类：即直热式恒温培养箱和隔水式恒温培养箱。 （一）直热式恒温培养箱 为直接加热空气方式的培养箱，采用“继电器控温电加热空气”技术，结构为：保温板材箱内装继电器控温电加热器。这种培养箱造价低，制造工艺简单，但恒温效果较差，温度波动大。,1.3 常用仪器及其使用要领,（二）隔水式恒温培养箱 为间接加热空气方式的培养箱，采用“继电器控温电加热水控制空气温度”技术，结构为：簿钢板外壳内衬玻璃棉，内置紫铜板水箱，水箱内装继电器控温电加热器，设双层门。这种培养箱制造工艺复杂，造价高，但由于先用电加热水层，再由水传热至箱内空气，因而温度上升和下降缓慢，加之可通过双层门的玻璃内门观察，对箱内温度影响小，故恒温效果好，调温为20600.5，很适于微生物培养之用。见图1-2。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-2 培养箱,1.3 常用仪器及其使用要领,使用注意事项： 1. 箱内不应放入过热过冷的东西，以免箱内温度急剧变化，阻碍培养物的生长。 2. 箱内应放入水容器一只，以维持培养箱内湿度或减少培养物中水分的大量蒸发。 3. 培养箱底部因接近电源，温度较高，故培养物不宜放在底层。 4. 箱内培养物不宜太挤，以免温空气不能流通，而使箱内温度不匀。 5. 箱内要保持清洁，并经常用3%来苏儿液消毒，再用清洁抹布擦净。,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.3 灭菌器 （一）干热灭菌箱 灭菌箱正面的侧边，装有温度指针，用于定温；温度指针下面有指示灯，用于指示是否达到定温；箱内有感温探头，用于探测温度。指针、指示灯、探头、电加热器均连接于“温度调节器”，通过温度调节器使箱内保持一定温度。如温度未达定温，电加热器工作，箱内温度上升，如温度超过定温，“温度调节器”自动切断电加热器的电源，停止加热，箱内温度即可下降。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-3 干热灭菌箱,1.3 常用仪器及其使用要领,使用方法： 1. 适宜用干热灭菌箱灭菌的物品是玻璃器皿和金属器皿，而塑料制品、橡皮制品、天然和化学纤维制品、培养基等，均不适用干热灭菌。 2进箱，物品放在干热灭菌箱中的铁搁板上，关箱门。 3. 定温，常用灭菌温度为160或170。 4. 灭菌，接通电源，干热灭菌箱升温至定温灭菌，160维持2h，170维持11.5h。 5. 出箱，关断电源，待温度下降至50左右，开箱门取出被灭菌的物品。,1.3 常用仪器及其使用要领,注意： 1、灭菌时，温度不宜超过170，以免易燃物，如棉塞、包扎纸等被烧焦。 2、高温时，切勿开箱门，以免冷空气骤然进入使灭菌的玻璃器皿炸裂。 3、绝不允许先将温度上升到100以上再放器皿，以免玻璃器皿骤然在高温下炸裂。 干热灭菌箱用于烘干玻璃器皿时，定温120，持续30min即可。须打开顶部气孔，以利水蒸气散出。可启动箱内鼓风设备，加速干燥。,1.3 常用仪器及其使用要领,（二）高压蒸汽灭菌器 高压蒸汽灭菌器的灭菌效果比干热灭菌箱好，适用所有物品灭菌，通常用于培养基、生理盐水、废弃培养物、耐高热高压的药品、纱布等灭菌。高压蒸汽灭菌器有手提式、直立式和横卧式几种，它们的构造和灭菌原理是一样的，仅是容量不同而已。手提式高压蒸汽灭菌器容积最小，业务小的实验室大多使用它；横卧式高压蒸汽灭菌器容积大，只有大型实验室或生产上使用。一般实验室常使用直立式高压蒸汽灭菌器。直立式高压蒸汽灭菌器见图1-4。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-4 高压蒸汽灭菌器,1.3 常用仪器及其使用要领,使用方法： 1. 加水 立式锅可直接加水至锅内底部隔板以下2/3高处；有加水口和水位窗者，由加水口加水至止水线处。 2. 装锅 把需灭菌的器物放入锅内（器物不要装得太满，以免影响灭菌效果），盖好锅盖，将螺旋柄拧紧（对角式均匀拧紧），打开排气阀。 3. 点火 启动开关，电加热器工作。 4. 排放冷空气 锅内水沸腾后，蒸汽逐渐驱赶锅内冷空气，当温度计指针指向100时，证明锅内已充满蒸汽，冷空气被驱尽，关闭排气阀。,1.3 常用仪器及其使用要领,5. 升压、保压与灭菌 关闭排气阀以后，锅内成为密闭系统，蒸汽不断增多，压力计和温度计的指针上升，当压力达到0.1MPa，温度为121时，开始灭菌计时；控制热源，维持0.1Mpa、12130min即完成灭菌。 6. 降压与排气 完成灭菌后停止加热，任灭菌锅自然冷却降压。当压力降至0.025MPa以下后，可打开排气阀排除余汽。 7. 出锅 待锅内压力降至大气压时揭开锅盖，取出器物，排掉锅内剩余水。,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.4 冰箱 用于储存培养基和培养物的设备，储存病毒必须使用低温冰箱，储存一般培养基和培养物用普通冰箱即可。 低温冰箱整个箱壁内侧围绕冷却管，可保持2070左右的低温。 使用冰箱时，必须注意以下事项： 1.冰箱适用电压与所供电压一致。如所供电压为220V，而冰箱适用110V电压时，必须用变压器调压。 2.供电线路和保险丝满足冰箱的工作电流要求。,1.3 常用仪器及其使用要领,3.使用时，应将温度调节至所需要的温度。一般应使水在冷却室中结冰，使储藏箱下部温度为510左右。 4.当冰箱冷却室结冰太厚时，会导致温度调节器的不灵敏，此时，必须停电融冰后，再投入使用。 5.冰箱门打开时间愈短愈好，打开次数越少越好。 6. 不宜将温度过高的物品放入冰箱内，以免消耗电能过大、机件工作时间过长，缩短冰箱使用寿命。 7. 冰箱内应保持整洁，如箱内有霉菌生长，应清洗并用福尔马林熏蒸消毒。 8. 保存烈性病菌、病毒的冰箱，要专人保管，并要加锁。,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.5 水浴锅 水浴箱也叫水温箱，用于融化培养基和各种保温操作。该设备是金属制成的长方形箱，箱内盛水，箱底装有电热丝，并有自动调节温度装置控制温度恒定。如图1-5所示。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-5 水浴箱,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.6 细菌过滤器 目前常用的滤器有混合材质和全玻材质。如图1-6所示。 （一）蔡氏滤器 蔡氏滤器为金属制成的杯状漏斗，在杯的底部夹一层石棉滤板，滤板下有一块金属筛板，防止抽气时石棉滤板下陷。 按滤孔的大小，石棉板分为三种： 1. K号，滤孔最大，可滤除一般颗粒物。 2. KK号，滤孔较小，为滤除大多数细菌。 3. EKS号，滤孔更小，可滤除较大病毒。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-6 细菌过滤器,1.3 常用仪器及其使用要领,（二）玻璃滤器 该器组件全部为玻璃质，其中，滤板由玻璃细纱加热压成，分1、2、3、4、5、6共六级。号码愈大，孔径愈小，孔径0.152.0m不等，5和6级可阻止细菌通过。 玻璃滤器用后要立即处理。过滤病原微生物后的滤器，要先用不凝固蛋白质的消毒药剂浸泡3天，以免堵塞滤孔；消毒后的滤器，用蒸馏水倒抽；再在滤器内加入三分之二洗涤液，自然流出氧化残留物；再先后用自来水、蒸馏水抽吸过滤至滤液呈中性为止。,1.3 常用仪器及其使用要领,如果滤器的滤孔被凝固的蛋白质颗粒堵塞，可将滤器浸泡于37的1%胰蛋白酶溶液（pH7.47.6）中消化24h，再按上法抽洗清洁。 滤器为负压过滤，需要连接一抽滤瓶，将滤瓶嘴用橡皮管连接于抽气机上抽气过滤。过滤负压不宜低于（46.666.6）KPa（350500mmHg），可用水银真空计指示，也可观察滤瓶内滤出液情况判断。如滤液出现大量气泡，说明负压过高，宜关闭抽气机，停止抽气，待气泡消逝后再抽。抽滤瓶的嘴应塞入少量棉花，以防放气时空气中细菌冲入瓶内。,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.7 超净工作台 用于创造局部无菌环境的设备。超净工作台是一个由预过滤器、高效过滤器、空气幕风机有效排除空气中的悬浮灰尘、微生物，由紫外灯或喷雾灭菌，装有照明灯、操作台面板、配电装置，并有消音、减震设备的箱体，如图1-7所示。超净工作台是没有建设无菌室的微生物实验室的必备设备，也可用于有更严格无菌要求或其他小环境条件要求的微生物接种、分离和鉴定等操作。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-7 超净工作台,1.3 常用仪器及其使用要领,使用超净工作台应注意以下几点： 1清除工作台内的灰尘、杂物。 2在使用超净工作台进行无菌操作前30min启动过滤、通风装置，检测操作区气流速度、洁净度，并灭菌。 3穿紧口工作服，戴紧口帽。 4. 严禁在超净工作台前做任何可能增加空气灰尘量的动作。 5. 必须在超净工作台内使用的物品要放在下风侧。 6. 在超净工作台内使用的物品必须是不易起纤尘的。 7. 在全部无菌操作结束后，才能停止工作台运转。 8. 定期进行性能检测。,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.8 电动抽气机 电动抽气机又叫真空泵，由电动机转轮、轮带和偏心轮等组成。通电后，电动机带动偏心轮，即可将与其相关的容器内的空气抽出。如图1-8所示。 电动抽气机主要供细菌过滤器、厌氧培养、培养基过滤和真空干燥时抽气用。使用抽气机时，应注意以下事项： 1. 抽气机的适用电压要与所供电压一致，否则，要经变压器变压后才能使用。,1.3 常用仪器及其使用要领,2. 要保持机油箱内的油量，防止机器损坏。 3. 必须使用硬质的连接管，保证气路畅通以确保器皿内抽真空效果。 4被抽气的器皿，必须有良好的抗压性能，以防内部真空后被外部空气破碎。 5如果在抽滤过程中滤液出现大量气泡，可以暂时停机，待气泡消失后，再开机继续抽气。 6如果要作冷冻干燥，则需用精密度高、功率大的抽气机。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-8 电动抽气机,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.9 电动离心机 离心机为进行病菌病毒检验鉴定中不可缺少的工具。离心机的种类很多，实验室常用小型倾斜电动离心机。小型倾斜电动离心机机顶正中有孔盖，以便放入和取出离心试管，内有离心管座四或六个，均匀地绕离心轴排列，底座上装有开关和调速器。如图1-9所示。,1.3 常用仪器及其使用要领,图1-9 小型倾斜电动离心器,A-离心机断面 1.转速调节器 2.电动机 3.金属套管 4.护盖 5.玻管； B-离心器全形 6.盖,1.3 常用仪器及其使用要领,使用离心机时应注意： 1. 应放在平稳的地方，并保持水平。 2将装有标本的离心试管放入离心管座的金属套管内，两两成对，每个重量基本平衡。 3放好试管后，盖上孔盖。 4开启电源开关，先用最低转速，逐渐调节到最高转速。 5. 达到离心时间后，逐步降低转速，待降到最低转速后，关闭电源开关。 6待离心机自然停止转动，打开孔盖，取出离心试管。 7. 离心试管须加棉塞时，离心前应将棉塞上端用橡皮圈扎紧在试管外或用大头针别住，以免离心时棉塞沉入管内。 8. 应经常保持转轴润滑。,1.3 常用仪器及其使用要领,1.3.10 天平 (一)粗天平 粗天平又称工业天平或药物天平，是用于粗略称量的仪器。常用的有100g、200g、500g、1000g四种，感量为千分之一，供配制普通试剂和粗略称量之用。 (二)电子天平 这类天平只有一个盘，构造比一般天平复杂，但使用起来却十分方便。,返回,1.4 常用器皿,1.4.1 常用的玻璃器皿 微生物实验室常用的玻璃器皿见表1-1所示。,表1-1 常用的玻璃器皿,1.4 常用器皿,1.4.2 常用的玻璃器皿的洗涤与消毒 微生物学实验中常用的培养皿、试管和三角瓶等的洗涤、消毒质量，直接影响实验结果，因此，这项工作不容忽视。 （一）新玻璃器皿的洗涤法 新购置的玻璃器皿含有游离碱，应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，再用水充分冲洗干净。,1.4 常用器皿,（二）含有琼脂培养基的玻璃器皿的洗涤法 先用小刀或铁丝将器皿中的琼脂培养基刮下。如果琼脂培养基已经干燥，可将器皿放在水中蒸煮，使琼脂熔化后趁热倒出，用水洗涤，并用刷子沾肥皂擦洗内壁，然后用自来水洗去肥皂。是否已将油垢完全除去，可以这样检查：即将瓶子或试管的外壁擦干，如果水在内壁是均匀地分布一薄层，可以认为是将油垢除去了。如果经过这样洗涤的器皿，油垢还未洗净，就需用洗涤液来清洗。,1.4 常用器皿,（三）载玻片及盖玻片的洗涤法 新载玻片和盖玻片先在2%的盐酸溶液中浸1h，以后用自来水冲洗23次，最后用蒸馏水换洗23次。也可用1%的洗衣粉洗涤，新载玻片用洗衣粉洗涤时，先将洗衣粉液煮沸，然后将要洗的新载玻片散入煮沸液中，持续煮沸1520min(注意煮沸液一定要浸没玻片，否则会使玻片钙化变质)，待冷后用自来水冲洗至中性。新盖玻片用洗衣粉洗涤时，将盖玻片散入1%的洗衣粉液中，煮沸lmin，待沸点泡平下后，再煮沸1min，。,1.4 常用器皿,1.4.3 常用的玻璃器皿的包装 玻璃器皿使用前必须经过灭菌，而灭菌前应预先将玻璃器皿包装好。 （一）棉塞的制作 常见的做法有：将棉花铺成方形，对角方向不完全对折，垂直于对折线方向卷起来，如图1-10所示；或将棉花铺成方形，于其中央衬以小块棉花，再将四边棉花包拢。制作好的棉塞最好用纱布包好，以利于使用和保存。另外，也可根据需要，购买市售的泡沫塑料塞。,1.4 常用器皿,图1-10 棉塞的制作过程,1.4 常用器皿,制作质量好的棉塞的形状、大小、松紧，应与试管口(或三角瓶口)完全适合。过紧会妨碍空气流通，不便塞拔，过松则达不到滤菌的目的。棉塞过大，塞不进试管口(或三角瓶口)，过小则容易掉进试管内。正确的棉塞，塞头较大，约占棉塞总长的1/3，留在管外，塞体约占棉塞总长的2/3，塞在管内，如图1-11所示。 棉塞应塞在试管内，用报纸或牛皮纸包装后一道灭菌。,1.4 常用器皿,图1-11 试管帽和棉塞,1.试管帽；2.正确的棉塞；3.4.不正确的棉塞,1.4 常用器皿,（二）吸管的包扎 将非脱脂棉塞入管尾，长度约2cm，后端距尾口1.5cm，松紧要适当，以吹气时通气流畅而不滑动为度。将吸管尖端以30角放在宽45cm、长55cm的纸条(报纸或牛皮纸)的一端，折返纸头包住管尖后，以螺旋形式包裹吸管，将包裹卷紧的纸棒在管尾端打一个结，以防吸管脱出。如图1-12所示，包好后等待灭菌。,1.4 常用器皿,图1-12 单支刻度吸管的包扎,1.4 常用器皿,（三）培养皿的包扎 培养皿可按4套或8套为一叠，用纸包扎好，如图1-13所示，待灭菌。或直接将培养皿装入金属筒内进行干热杀菌。,图1-13 培养皿的包扎,返回,1.5 小型微生物厂主要仪器及设备,小型微生物厂的主要仪器及设备见表1-2。 表1-2 小型微生物厂的主要仪器及设备一览表,1.5 小型微生物厂主要仪器及设备,表1-2(续)小型微生物厂的主要仪器及设备一览表,