章免疫分析PPT学习教案

会计学1第1页/共54页酶免疫分析 发光免疫分析放射免疫分析免疫分析种类第2页/共54页第3页/共54页第4页/共54页第5页/共54页第6页/共54页第7页/共54页 光照发光光照发光：是指发光剂（荧光素）经短波是指发光剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可见光（荧光）。见光（荧光）。生物发光生物发光：是指发生在生物体内的发光现象，是指发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用荧光素酶的催化下，利用ATPATP能，生成激发态氧能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。的形式释放出来。第8页/共54页 化学发光化学发光：是指伴随化学反应过程所产生的光的是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。发射现象。某些物质某些物质(发光剂发光剂)在化学反应时，在化学反应时，吸收吸收了了反应过程中所产生的反应过程中所产生的化学能化学能，使反应的产物分子或，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。能量，这一现象称为化学发光。第9页/共54页第10页/共54页第11页/共54页 电化学发光免疫分析（ECLIA）是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。电化学发光免疫分析仪是采用电化学发光技术，生物素放大技术，以顺磁性微粒为固相载体，用三联吡啶钌标记抗原或抗体，三丙胺(TPA)为电子供体，而设计的一种自动化分析仪器。电化学发光稳定、持续时间长，易于控制并可根据待测分子的大小设计成多种反应模式如夹心法、竞争法等。第12页/共54页第13页/共54页三联吡啶钌三联吡啶钌第14页/共54页电化学发光剂反应原理电化学发光剂反应原理 第15页/共54页磁性微粒直径2.8m，表面的凸凹使包被面积放大。磁性微粒体积小，悬浮于反应体系中，形成均一稳定的液相，在磁场中易于分离。第16页/共54页在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体包被抗体(抗原抗原)，用三联吡啶钌标记抗体，用三联吡啶钌标记抗体(抗原抗原)，在，在反应体系内待测标本与相应的抗原反应体系内待测标本与相应的抗原 (抗体抗体)发生免疫发生免疫反应后，形成反应后，形成磁性微粒包被抗体磁性微粒包被抗体-待测抗原待测抗原-三联吡啶三联吡啶钌标记抗体复合物钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人同时引人TPATPA缓冲液缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPATPA在电极表面进在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。的浓度成正比。第17页/共54页标记磁颗粒在电场中发光工作示意图标记磁颗粒在电场中发光工作示意图第18页/共54页电化学发光免疫测定工作示意图电化学发光免疫测定工作示意图第19页/共54页第20页/共54页第21页/共54页4-甲基伞型酮磷酸盐（4-MUP）反应原理示意图 第22页/共54页第23页/共54页碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫测定示意图第24页/共54页2、荧光偏振免疫分析法 FPIA是根据抗原、抗体竞争结合反应的原理，通过测定荧光偏振度定量检测待测抗原的浓度。FPIA兼具荧光分析的灵敏度和均相免疫法专一、快速的特点，故测定结果重现性好，在免疫测定法中引人注目。在临床检验、毒品分析、农药残留量分析、环境和食品监测等方面 第25页/共54页第26页/共54页当光线通过偏振滤光片后，形成只有一个方向的电滋波，称之为偏振光。荧光物质经单一平面的偏振光（蓝色光，485nm）激发后，可吸收光能跃入激发态，在其恢复至基态时，释放能量并发射出单一平面的偏振荧光（绿色光，525nm550nm）。偏振荧光强度与荧光物质分子在液相中转动的速度呈反比，即分子大转动速度慢，荧光强度大，分子小转动速度快，荧光强度小。(一)原理第27页/共54页第28页/共54页偏振光和偏振荧光发生示意图荧光偏振免疫测定工作原理示意图荧光偏振免疫测定工作原理示意图第29页/共54页（二）仪器测定技术要点第30页/共54页 可用于内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标志物类、病毒标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢指标和贫血类等方面的检测，是目前免疫化学应用最为广泛的新技术。第31页/共54页第32页/共54页第33页/共54页第34页/共54页第35页/共54页第36页/共54页第37页/共54页第38页/共54页第39页/共54页第40页/共54页第41页/共54页第42页/共54页第43页/共54页第44页/共54页第45页/共54页第46页/共54页第47页/共54页激素名称分泌腺体或组织分类(化学本质)黄体生成素(LH)垂体前叶(腺垂体)糖蛋白卵泡刺激激素(FSH)垂体前叶(腺垂体)糖蛋白催乳素(PRL)垂体前叶(腺垂体)蛋白质雌二醇(E2)卵巢、胎盘类固醇孕酮(P)黄体、胎盘类固醇睾酮(T)睾丸类固醇生殖激素来源及化学本质 第48页/共54页第49页/共54页第50页/共54页第51页/共54页性别相关疾病检测项目女性性早熟FSH，LH，E2，P青春期发育延迟FSH，LH，E2，P继发性闭经FSH，PRL，E2，P多毛症FSH，LH，PRL，E2，P，T原发性闭经FSH，LH，E2，P高催乳素血症PRL更年前期和绝经FSH，LH，E2，P男性性早熟FSH，LH，T青春期发育延迟FSH，LH，T性腺机能减退FSH，LH，PRL，T乳腺过度发育T，E2，PRL精子缺乏FSH，LH，T生殖激素检测项目及相关疾病 第52页/共54页第53页/共54页