几种常见的鱼类致病菌及其培养鉴定方法

爱德华氏菌属1. 迟缓爱德华氏菌特征：迟缓爱德华氏菌为革兰氏阴性病原菌，短杆菌，大小多在（0.5 1） （1-3） ，无荚膜，亦不形成芽孢，为周毛菌，能运动。生长温度范围为15-42，最适为37，适宜pH值范围为5.5-9.0。但以pH 7.2较好，耐食盐浓度为0-4%，培养：该菌在普通营养琼脂培养基上25培养24，能形成圆形隆起灰白色湿润并带有光泽呈半透明状的菌落直径约为0.5-1mm， 在含5%-10%血液的普通营养琼脂培养基平板常用绵羊或家兔脱纤血液上的菌落与在普通营养琼脂上的基本一致，但稍大些。在麦康凯琼脂、SS琼脂、胆盐硫化氢乳糖琼脂（DHL）、 木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐（XLD）琼脂等肠道菌选择性培养基上可形成较小菌落因其产生硫化氢能使菌落中央为黑色。在普通营养肉汤中呈均匀混浊生长。危害：德华氏菌感染症，鳖发生白板病，鳗鲡红头病，鳝鱼的红病和渠道鲇鱼的气肿性腐烂病等感染：感染可发生于全年缺乏明显的季节性，在水温20以上时均可发生，但一般认为水温在15时，就能发生高峰期多出现在水温25-30时，一般于春季和夏季易发流行。人工养殖的淡水鱼和海水鱼中均发现有该菌感染的发生如鲫、金鱼、虹鳟、大鳞大马哈鱼、黑鲈、真鲷、丽鲷、黑鲷、鲻鱼、川鲽、牙鲆等均可被感染发病，实验性可感染鲤鱼和青蛙。分离培养：对于迟钝爱德华氏菌的分离培养，常见的临床标本材料是表皮肌肉坏死组织及内脏器官组织等。通常将被检材料接种于普通营养琼脂血液琼脂及某种肠道菌选择性培养基（如SS琼脂、DHL琼脂、XLD琼脂、麦康凯琼脂等）平板，置28或37恒温培养18-24h。形态特征检查：包括对标本材料中及纯培养物的爱德华氏菌形态检查，常采用革兰氏染色镜检，按该菌相应形态特征予以判定。2. 鲇鱼爱德华氏菌特征：鲇鱼爱德华氏菌属于爱德华氏菌属，在该属细菌中最难培养。菌体大小约1um（2-3） um，为小直杆菌，革兰氏染色阴性，无荚膜，不形成芽孢，兼性厌氧，25时有动力，在37时无动力。菌落大小为0.5mm 左右，圆形光滑、边缘整齐、稍隆起。由鲇鱼爱德华氏菌所引起的鱼类爱德华氏菌病主要是鲇鱼肠道败血症。该病有季节性，常发生于春季和秋季，鳙等可被感染发病，病鱼在咽部及口腔附近出现皮肤出血或淤血、鳃色变淡、突眼症状，解剖可见肾脏和脾脏肿胀，肝脏出血且有坏死灶，腹膜内有血性腹水。培养：鲇鱼爱德华氏菌除为该属细菌中难养的。在培养基平板上生长较缓慢常需培养约48h才能形成直径1-2mm圆形光滑边缘整齐稍隆起的无色小菌落；二是尽管爱德华氏菌的生化特性都是以37培养为明显，但鲇鱼爱德华氏菌则更喜欢较低的温度其最适一般为25-30，在37时生长缓慢或完全不能生长，尤其是运动力只有在约28时才能表现出来且是微弱的。弧菌属特征：河流弧菌属于弧菌属，菌体大小为（0.5-0.8） （1.8-2.5 ） ，为革兰氏阴性、直或弧状短杆菌，无芽孢，无荚膜，以极生单鞭毛（有鞘膜）运动，单个或成双相连（有时 个排列成短链），亦可呈多形性，细菌运动呈活泼的穿梭状。该菌在弧菌选择性培养基上生长良好，菌落呈黄色、黏稠、光滑、圆形、边缘整齐，直径1-1.5mm 。在血琼脂平板上菌落特点基本同上，但菌落周围呈现溶血.河流弧菌是淡水养殖鱼类（鲢、鳙等）细菌性败血症的一种致病菌.分离培养：取被检牙鲆病变组织材料无菌操作接种于含7兔血的普通营养琼脂培养基平板，置28培养24-48h做细菌分离，对所分离的细菌进行菌落数量、分布及同一性等方面的检查后，从每尾鱼的分离菌落各择一定数量分别移接于普通营养琼脂斜面(28培养24h)做纯培养后，置4冰箱保存供鉴定用。菌落在普通营养琼脂上的形状为圆形光滑、边缘整齐、稍隆起、透明至半透明、呈浅灰色的菌落，培养24h后检查，直径多在0.3mm左右；培养48h后检查直径多在1.2mm左右，生长中度。菌落在血液营养琼脂上的形状为圆形光滑、边缘整齐、稍隆起、呈乳白色，不溶于血、湿润闪光的菌落，培养24h后检查，直径多在0.5mm左右；培养48h后检查直径多在1.5mm左右，生长中度。(这株菌在许多培养基上均可生长，不过形态不一样)。在37下不生长，在28下生长。气单胞菌属1. 嗜水气单胞菌嗜水气单胞菌属于气单胞菌属，革兰氏染色阴性；兼性厌氧，具有呼吸和发酵代谢类型；能利用葡萄糖和其它糖类产酸，常产气无芽孢，不产生荚膜，散在或成双排列，端生单鞭毛（有运动性）的短杆菌，两端钝圆，大小多在（0.6-0.7） 1.4 。菌落特征为圆形光滑、边缘整齐、较隆起、不透明的浅灰黄白色。嗜水气单胞菌寄主广泛，可引起大宗淡水鱼等发生相应的细菌性败血症，危害鱼的种类最多、地区最广、损失最大。2. 温和气单胞菌温和气单胞菌属气单胞菌科、气单胞菌属，革兰氏阴性，杆菌（个别菌体稍弯曲），散在或成双排列、两端钝圆、无芽孢，大小多在（0.5-1.0） （1.0-2.0）危害的对象主要是鲫、鲢、鳙、鲤、草鱼、青鱼等。从夏花鱼种到成鱼均可感染，以2龄成鱼为主，引起细菌性败血症。流行时间为311月份，高峰期常为59月，10月份后病情有所缓和。该病是淡水养殖中危害最大，流行范围最大的一种急性传染病，我国20多个省、市、自治区均有发生。发病严重的养鱼场发病率高达100%，重病鱼池死亡率高达95%以上。3. 斑点气单胞菌斑点气单胞菌属于气单胞菌属，为两端钝圆，多成对、少数单个排列，有动力，极端单鞭毛，无芽孢，大小为（0.4-0.5） （1.0-1.3） 的革兰氏阴性菌。4. 肠型点状气单胞菌肠型点状气单胞菌属气单胞菌属，为嗜温的、有运动性的气单胞菌群，为革兰氏阴性短小杆菌，单端鞭毛，具有运动性，为条件性致病菌。可引起草鱼、青鱼出血性败血症。5. 荧光假单胞菌荧光假单胞菌是假单胞菌属中的常见致病种，为直或轻微弯曲的杆菌，但不是螺旋状的，大小在（0.5-1.0） （1.5-5.0） ，菌体一般较短且细，无菌柄也无鞘，革兰氏染色阴性，靠几根极生鞭毛运动。可引起赤皮病、烂鳃病、白云病。6. 水型点状假单胞菌水型点状假单胞菌属于假单胞菌属，短杆状，近圆形，单个排列，有动力，无芽孢，革兰氏阴性。琼脂菌落呈圆形，24h 培养后中等大小，略黄而稍灰白，迎光透视略呈培养基色。该菌可引起竖鳞病，为水中常在菌，是条件致病菌，当水质污浊、鱼体受伤时经皮肤感染。主要危害鲤、鲫、草鱼、鲢等，从较大的鱼种至亲鱼均可受害。主要流行于静水养鱼池和高密度养殖条件下，流水养鱼池中较少发生。本病主要发生在春季，发生时鱼体鳞片竖起。分离培养：病原菌分离无菌采取发病细鳞鱼体表溃烂处、 背鳍基部、肝脏、 脾脏、肾脏等组织分别接种于普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂和TSA（胰蛋白胨大豆琼脂）平板上， 28培养24h， 挑取单个优势菌落再次划线， 将获得的纯培养菌株4保存备用。鉴定方法：气单胞菌的鉴定方法有免疫学鉴定法、生化鉴定法和分子鉴定法。细菌的分离培养28培养24h后，在普通营养琼脂上长出圆形光滑、边缘整齐、隆起、不透明、灰白色中等大小的菌落。在麦康凯琼脂上仅划线起始部见微弱生长、薄层的菌苔及无色小菌落。 在TSA上菌落圆形光滑、边缘整齐、浅灰白色，未见水溶性褐色色素产生。革兰氏染色可见大量的革兰氏阴性菌，细菌形态呈球杆菌，成双、短链或成丛排列，无鞭毛，无荚膜。柱状噬纤维细菌特征：柱状噬纤维菌为噬纤维菌属细菌中常见的致病种，为中等大小但偏长的杆菌，菌体长为2-12um ，宽为0.4um左右，两端不尖，无荚膜及芽孢，适宜生存温度为25-30。在噬纤维菌培养基中能良好生长可形成黄色菌落，在液体培养基中静止培养时可形成黄色菌膜、若震荡培养则呈均匀混浊生长，菌体一般培养到第4天后开始老化，最高耐NaCl浓度为5g/L，在海水培养基中不能生长。在pH6.5-7.5生长良好，危害：该菌引起的烂鳃病在草鱼、青鱼、鳙、鲤等均可发生，但主要是危害草鱼。全国各地均有该病发生在水温15以下一般少见，约20时开始流行，流行的最适水温为28-35。柱状噬纤维菌为我国草鱼烂鳃病、白皮病、白头白嘴病等的病原菌。水中病原菌的浓度越大，鱼的密度越高，鱼的抵抗力越小，水质越差，则越易暴发流行。本病常和传染性肠炎、出血病、赤皮病并发。一般流行于410月，尤以夏季流行为多。白皮病为鲢、鳙的主要病害之一。此病主要发生在饲养2030天的鲢、鳙鱼苗及夏花阶段。常可形成急性流行病，1龄及2龄以上的成鱼偶然可以发病。病程较短，病势凶猛，死亡率很高，发病后23天就会造成大批死亡。分离培养：平板划线分离。取病鱼鳃丝小块，置于滴有无菌水的载玻片的边缘约l0 min，用接种环蘸水，在胰胨琼脂培养基平板上划线。采用平板划线方法，不重复的划线，尽量产生单个分散的菌落，在恒温培养箱中25温度条件下培养23 d。纯培养。用无菌接种环挑取单个菌落，接种到普通营养琼脂培养基斜面试管上，在恒温培养箱中2830温度条件下培养24 h。病原体检测方法：菌落形态观察。用接种环挑取菌落，接种在胰胨琼脂培养基平板上，在恒温培养箱中25温度条件下培养2 d左右。革兰氏染色：菌落革兰氏染色为阴性。生化检验：免疫学检测：血清学检验，涂片上有棕色 细长颗粒，颗粒大小与杆菌一致