第九章__溶血性贫血PPT学习教案

会计学1第九章第九章_溶血性贫血溶血性贫血1溶血性贫血的定义和临床表现2溶血性贫血的分类、发病机制、实验室检查和过筛试验3红细胞膜缺陷疾病的实验室检查及应用4红细胞酶缺陷的实验室检查及应用5血红蛋白的实验室检查及应用编辑制作杨晓斌第1页/共136页由于某种原因使红细胞寿命缩短、破坏增加，由于某种原因使红细胞寿命缩短、破坏增加，超过骨髓造血代偿能力超过骨髓造血代偿能力所致的一类贫血。所致的一类贫血。溶血性贫血溶血性贫血若红细胞寿命缩短、破坏增加，若红细胞寿命缩短、破坏增加，但尚未超过但尚未超过骨髓造血的代偿能力时，临床上不表现贫血骨髓造血的代偿能力时，临床上不表现贫血。代偿性溶血性疾病代偿性溶血性疾病第2页/共136页第3页/共136页第4页/共136页第5页/共136页第6页/共136页第7页/共136页红细胞在单核-巨噬细胞中破环在血管内破环血管外溶血血管内溶血第8页/共136页第9页/共136页特征特征血管内溶血血管内溶血血管外溶血血管外溶血病因获得性多见遗传性多见红细胞主要破坏场所 血管内单核-吞噬细胞系统病程多为急性常为慢性，急性加重贫血、黄疸常见常见肝、脾大少见常见红细胞形态异常正常或轻微异常明显异常红细胞脆性改变变化小多有改变血浆游离血红蛋白增加正常或轻度增高高铁血红素白蛋白增加正常血红蛋白尿常见无或轻度尿含铁血黄素慢性可见一般阴性骨髓再障危象少见急性溶血加重时可见LDH增高轻度增高第10页/共136页部位部位溶血性贫血疾病名称溶血性贫血疾病名称筛选筛选/排除试验排除试验确诊试验确诊试验血管外溶血血管外溶血 遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症红细胞形态检查红细胞形态检查高渗冷溶血试验高渗冷溶血试验遗传性椭圆形红细胞增多遗传性椭圆形红细胞增多症症渗透脆性试验、酸化甘油溶血试验渗透脆性试验、酸化甘油溶血试验膜蛋白电泳分析、膜脂质分析膜蛋白电泳分析、膜脂质分析遗传性口形红细胞增多症遗传性口形红细胞增多症自身溶血试验、红细胞腺苷三磷酸活性、自身溶血试验、红细胞腺苷三磷酸活性、Coombs试验试验膜蛋白基因分析、家系调查膜蛋白基因分析、家系调查G-6-PD-CNSHA高铁血红蛋白还原试验、高铁血红蛋白还原试验、G-6-PD荧光斑荧光斑点试验、硝基四氮唑蓝试验、点试验、硝基四氮唑蓝试验、Heinz小体小体生成试验生成试验红细胞红细胞G-6-PD活性测定活性测定基因分析基因分析丙 酮 酸 激 酶 缺 乏 症丙 酮 酸 激 酶 缺 乏 症 红细胞形态检查、红细胞形态检查、PK荧光斑点试验荧光斑点试验PK活性定量测定活性定量测定嘧啶嘧啶-核苷酶缺乏症核苷酶缺乏症红细胞形态检查、红细胞形态检查、Ret、嘧啶核苷酸比率、嘧啶核苷酸比率中间代谢产物测定、嘧啶中间代谢产物测定、嘧啶-核苷酶活核苷酶活性测定性测定珠蛋白生成障碍性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、血红蛋白病血红蛋白病红细胞形态检查、红细胞包涵体试验、红细胞形态检查、红细胞包涵体试验、异丙醇沉淀试验、热变性试验、异丙醇沉淀试验、热变性试验、Heinz小小体生成试验体生成试验红细胞镰变试验、血红蛋白电泳、珠红细胞镰变试验、血红蛋白电泳、珠蛋白肽链分析、基因分析、吸收光谱蛋白肽链分析、基因分析、吸收光谱测定测定温抗体型自身免疫性溶贫温抗体型自身免疫性溶贫红细胞形态检查红细胞形态检查Coombs试验试验冷凝集素综合征冷凝集素综合征红细胞形态检查、红细胞形态检查、Coombs试验试验冷凝集素试验冷凝集素试验药物致免疫性溶血性贫血药物致免疫性溶血性贫血红细胞形态检查、红细胞形态检查、Coombs试验试验加药后加药后IAGT新生儿同种免疫性溶血症新生儿同种免疫性溶血症红细胞形态检查、红细胞形态检查、Ret、胆红素代谢检查、胆红素代谢检查、血型鉴定血型鉴定Coombs试验、孕妇产前免疫性抗体试验、孕妇产前免疫性抗体检查检查迟发性溶血性输血反应迟发性溶血性输血反应红 细 胞 形 态 检 查 、红 细 胞 形 态 检 查 、 R e t 、 血 型 鉴 定、 血 型 鉴 定 Coombs试验、凝聚胺试验试验、凝聚胺试验血管内溶血血管内溶血PNHRous试验、尿隐血试验、蔗糖溶血试验试验、尿隐血试验、蔗糖溶血试验Ham试验、蛇毒溶血因子试验、补体试验、蛇毒溶血因子试验、补体敏感性试验敏感性试验蚕豆病蚕豆病高铁血红蛋白还原试验、高铁血红蛋白还原试验、G-6-PD荧光斑荧光斑点试验、硝基四氮唑蓝试验、点试验、硝基四氮唑蓝试验、Heinz小体小体生成试验生成试验红细胞红细胞G-6-PD活性测定、基因分析活性测定、基因分析不同类型溶血性贫血试验选择不同类型溶血性贫血试验选择第11页/共136页以鉴以鉴别溶别溶血的血的部位部位是血管内溶血还是血管外是血管内溶血还是血管外溶血？溶血？第12页/共136页常用邻常用邻-甲苯胺法检测，血红蛋白结构中的亚铁血红素有甲苯胺法检测，血红蛋白结构中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，催化过氧化氢释放新生态氧，使类似过氧化物酶的作用，催化过氧化氢释放新生态氧，使无色的邻无色的邻-联甲苯胺氧化为蓝色。根据显色深浅，即可测联甲苯胺氧化为蓝色。根据显色深浅，即可测出血浆游离血红蛋白的量。出血浆游离血红蛋白的量。血红蛋白结构中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用血红蛋白结构中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用H2O2新生态新生态O无色的邻无色的邻-联甲苯胺联甲苯胺氧化为蓝色氧化为蓝色【参考区间参考区间】 040mg/L第13页/共136页【应用评价应用评价】正常情况，血浆中正常情况，血浆中血红蛋白大部分血红蛋白大部分与结合珠蛋白结合，与结合珠蛋白结合，仅有微量游离血红蛋白。测仅有微量游离血红蛋白。测定血浆游离血红蛋白可判断红细胞的破坏程度。定血浆游离血红蛋白可判断红细胞的破坏程度。增高增高是判断血管内溶血的指征。蚕豆病、是判断血管内溶血的指征。蚕豆病、PNH、阵、阵发性寒冷性血红蛋白尿、冷凝集素综合征、溶发性寒冷性血红蛋白尿、冷凝集素综合征、溶血性输血反应等明显增高；自身免疫性溶血性血性输血反应等明显增高；自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻到中度增高贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻到中度增高。不增高不增高 血管外溶血、红细胞膜缺陷不增高。血管外溶血、红细胞膜缺陷不增高。（一）血浆游离血红蛋白测定第14页/共136页结合珠蛋白（结合珠蛋白（Hp）是由肝脏合成的一种是由肝脏合成的一种2糖蛋白，合成糖蛋白，合成速度较慢；速度较慢； Hp具有结合游离血红蛋白的能力，在血红蛋具有结合游离血红蛋白的能力，在血红蛋白降解为胆红素的代谢过程中具有重要的作用，在此过程白降解为胆红素的代谢过程中具有重要的作用，在此过程中中Hp本身也被分解，溶血性贫血时本身也被分解，溶血性贫血时Hp因消耗而降低。因消耗而降低。用醋酸纤维薄膜电泳法检测，由于用醋酸纤维薄膜电泳法检测，由于Hp具有结合游离血红具有结合游离血红蛋白的能力，故在测定血清蛋白的能力，故在测定血清Hp时，于待测血清中加入一时，于待测血清中加入一定量的血红蛋白液，使之与待测血清中的定量的血红蛋白液，使之与待测血清中的Hp形成形成Hp-Hb复复合物；再通过电泳法将结合的合物；再通过电泳法将结合的Hp-Hb复合物与未结合的复合物与未结合的Hb分开，测定分开，测定Hp-Hb复合物的量，可测得血清中复合物的量，可测得血清中Hp的含量。的含量。【参考区间参考区间】 0.51.5gHb/L第15页/共136页【应用评价】正常情况下，血浆中的血红蛋白正常情况下，血浆中的血红蛋白与结合珠蛋白结合形成复合物，在单核与结合珠蛋白结合形成复合物，在单核-巨噬细巨噬细胞系统和肝内清除。溶血时血浆中的血红蛋白胞系统和肝内清除。溶血时血浆中的血红蛋白与与Hp结合增多，使血清中结合珠蛋白减少，测结合增多，使血清中结合珠蛋白减少，测定血清中结合珠蛋白的含量可反映溶血的情况定血清中结合珠蛋白的含量可反映溶血的情况。减低减低常见于各种溶血，尤其是血管内溶血。常见于各种溶血，尤其是血管内溶血。但严重肝病、先天性无珠蛋白血症、传染性单核但严重肝病、先天性无珠蛋白血症、传染性单核细胞增多症等细胞增多症等Hp也明显减低，故注意鉴别。也明显减低，故注意鉴别。增高增高常见于感染、创伤、常见于感染、创伤、SLE、恶性肿瘤、类固醇治、恶性肿瘤、类固醇治疗、妊娠、胆道阻塞等（疗、妊娠、胆道阻塞等（Hp为急性时相反应蛋白为急性时相反应蛋白）。此时如）。此时如Hp正常，不能排除合并溶血的可能。正常，不能排除合并溶血的可能。 （二）血清结合珠蛋白测定第16页/共136页当游离血红蛋白在血液中增多时，血红蛋白通过肾脏滤过当游离血红蛋白在血液中增多时，血红蛋白通过肾脏滤过形成血红蛋白尿；在此过程中，血红蛋白被肾小管上皮细形成血红蛋白尿；在此过程中，血红蛋白被肾小管上皮细胞部分或全部吸收，部分铁离子以胞部分或全部吸收，部分铁离子以含铁血黄素含铁血黄素的形式沉积的形式沉积于上皮细胞，并随尿液排出。于上皮细胞，并随尿液排出。【参考区间参考区间】 正常人为阴性正常人为阴性含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体，为含铁质的棕色色素，其中的体，为含铁质的棕色色素，其中的高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下产生蓝色的亚铁氰化铁沉性环境下产生蓝色的亚铁氰化铁沉淀，此反应称为淀，此反应称为普鲁士蓝反应普鲁士蓝反应。用用显微镜检查尿沉渣，细胞内外可见显微镜检查尿沉渣，细胞内外可见直径直径13的蓝色颗粒。的蓝色颗粒。第17页/共136页【应用评价】尿含铁血黄素尿含铁血黄素试验阳性提示试验阳性提示 慢性血管内溶血。慢性血管内溶血。 无论有无血红蛋白尿，只要存在慢性血管内无论有无血红蛋白尿，只要存在慢性血管内 溶血如溶血如PNH，本试验即呈阳性，本试验即呈阳性，并可持续数周并可持续数周。 但在溶血初期，虽然有血红蛋白尿，上皮细胞但在溶血初期，虽然有血红蛋白尿，上皮细胞 内尚未形成可检出的含铁血黄素，此时本试验内尚未形成可检出的含铁血黄素，此时本试验 可呈阴性反应。可呈阴性反应。（三）尿含铁血黄素试验第18页/共136页【参考区间参考区间】正常人呈阴性正常人呈阴性第19页/共136页【应用评价应用评价】血管内溶血时，血浆中游离血管内溶血时，血浆中游离血红蛋白大量增加，血浆中可检测出高铁血红蛋白大量增加，血浆中可检测出高铁血红素白蛋白。只有在严重溶血时，血红素白蛋白。只有在严重溶血时，Hp与与Hx均被耗尽，高铁血红素方与白蛋白结合均被耗尽，高铁血红素方与白蛋白结合成高铁血红素白蛋白；故血清中出现高铁成高铁血红素白蛋白；故血清中出现高铁血红素白蛋白是溶血严重的指标。血红素白蛋白是溶血严重的指标。（四）高铁血红素白蛋白试验第20页/共136页红细胞直径为红细胞直径为69m，呈双层凹面的圆盘状，呈双层凹面的圆盘状第21页/共136页低渗溶液中，血红蛋白逸出，红细胞残留的完整的红细胞膜，称为低渗溶液中，血红蛋白逸出，红细胞残留的完整的红细胞膜，称为影细胞影细胞红细胞膜蛋白质占、脂质红细胞膜蛋白质占、脂质42、糖类、糖类8蛋白质与脂质的比例约为蛋白质与脂质的比例约为1:1；比值变化与膜的功能相关，两者在很大程度上决定着膜的理化特征；比值变化与膜的功能相关，两者在很大程度上决定着膜的理化特征任何原因引起的溶血都必然有红细胞膜的缺陷或损伤任何原因引起的溶血都必然有红细胞膜的缺陷或损伤第22页/共136页红细胞膜红细胞膜膜蛋白膜蛋白膜脂质膜脂质膜糖类膜糖类与膜脂质形成糖脂与膜脂质形成糖脂与膜蛋白形成糖蛋白与膜蛋白形成糖蛋白糖链裸露膜外，有受糖链裸露膜外，有受体、抗原性、信息传体、抗原性、信息传递功能，称之细胞天递功能，称之细胞天线线磷脂磷脂糖脂糖脂胆固醇胆固醇甘油磷脂甘油磷脂鞘磷脂鞘磷脂胆固醇脂胆固醇脂游离胆固醇游离胆固醇鞘糖脂鞘糖脂与膜脂质形成脂蛋白与膜脂质形成脂蛋白与糖类形成糖蛋白与糖类形成糖蛋白外周蛋白外周蛋白内在蛋白内在蛋白胆固醇胆固醇/磷脂（磷脂（C/P）比值约为比值约为0.81.0一、概述第23页/共136页红细胞膜为脂质双层结构，蛋白质镶嵌在脂质双层内又相互红细胞膜为脂质双层结构，蛋白质镶嵌在脂质双层内又相互连续形成膜的骨架。电镜下观察红细胞膜呈三层暗连续形成膜的骨架。电镜下观察红细胞膜呈三层暗-亮亮-暗区带暗区带，外层含糖脂、糖蛋白和蛋白质，具亲和水性；中间层含磷，外层含糖脂、糖蛋白和蛋白质，具亲和水性；中间层含磷脂、胆固醇、蛋白质为疏水性；内层主要包含蛋白质，呈亲脂、胆固醇、蛋白质为疏水性；内层主要包含蛋白质，呈亲水性。水性。液态镶嵌模型液态镶嵌模型带3带4.2锚蛋白膜收缩蛋白膜收缩蛋白肌动蛋白带4.1血型蛋白C膜脂质双层第24页/共136页红细胞膜结红细胞膜结构的两个基构的两个基本的特征本的特征膜的不对称膜的不对称性性膜的流动性膜的流动性膜的内外两层的组分膜的内外两层的组分和功能有明显的差异和功能有明显的差异称为膜的不对称性。称为膜的不对称性。红细胞膜结构第25页/共136页运输物质运输物质变形性变形性免疫功能免疫功能抗原性抗原性血型抗原血型抗原老化抗原老化抗原影响变形性因素：影响变形性因素：膜骨架蛋白组分和功能状态膜骨架蛋白组分和功能状态膜脂质流动性大有利于变形膜脂质流动性大有利于变形细胞表面积与体积比值细胞表面积与体积比值血红蛋白的质和量血红蛋白的质和量膜的离子通透性膜的离子通透性第26页/共136页红细胞渗透脆性试验红细胞渗透脆性试验红细胞膜蛋白电泳分析红细胞膜蛋白电泳分析血细胞表型分析血细胞表型分析红细胞孵育渗透脆性试验红细胞孵育渗透脆性试验酸化血清溶血试验酸化血清溶血试验蔗糖溶血试验蔗糖溶血试验红细胞自身溶血试验及其纠正试验红细胞自身溶血试验及其纠正试验常见实常见实验室检验室检查查酸化甘油溶血试验酸化甘油溶血试验第27页/共136页红细胞在不同浓度的低渗盐溶液中，水红细胞在不同浓度的低渗盐溶液中，水分通过红细胞膜进入细胞内，当水渗透分通过红细胞膜进入细胞内，当水渗透达一定程度时，红细胞发生膨胀破裂。达一定程度时，红细胞发生膨胀破裂。根据不同浓度的低渗盐溶液中红细胞溶根据不同浓度的低渗盐溶液中红细胞溶血的情况，反映红细胞对低渗盐溶液的血的情况，反映红细胞对低渗盐溶液的抵抗能力。抵抗能力。低渗盐低渗盐低渗盐低渗盐红细胞对低渗的抵红细胞对低渗的抵抗能力与其表面积抗能力与其表面积与容积的比值有关与容积的比值有关，比值小，说明红，比值小，说明红细胞容积已胀大，细胞容积已胀大，对低渗抵抗力小，对低渗抵抗力小，渗透脆性增加；反渗透脆性增加；反之抵抗力增大，渗之抵抗力增大，渗透脆性降低。透脆性降低。第28页/共136页【参考区间参考区间】 简易半定量法：简易半定量法： 开始溶血：开始溶血：3.84.6g/L 完全溶血：完全溶血：2.83.2g/L增加增加主要见遗传性球形红细胞增多症、椭圆形红细胞主要见遗传性球形红细胞增多症、椭圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血性贫血。增多症和部分自身免疫性溶血性贫血。降低降低主要见于珠蛋白生成障碍性贫血、血红蛋白主要见于珠蛋白生成障碍性贫血、血红蛋白C、D、E病，低色素性贫血、阻塞性黄胆、脾切除术病，低色素性贫血、阻塞性黄胆、脾切除术后等。后等。（一）红细胞渗透脆性试验第29页/共136页血液置于血液置于37温箱孵温箱孵育育24h葡萄糖的消葡萄糖的消耗，贮备的耗，贮备的ATP减少减少膜对阳离子膜对阳离子的主动传递的主动传递受阻，受阻，Na在在红细胞内聚红细胞内聚集集红细胞膨胀红细胞膨胀，孵育渗透，孵育渗透脆性增加脆性增加正常人的红细胞经孵育处理后，其正常人的红细胞经孵育处理后，其渗透脆性变化不明显，而有渗透脆性变化不明显，而有细胞膜细胞膜缺陷或某些酶缺陷的红细胞，缺陷或某些酶缺陷的红细胞，由于由于其内的葡萄糖和其内的葡萄糖和ATP很快被消耗，孵很快被消耗，孵育后脆性明显增加。育后脆性明显增加。第30页/共136页【参考区间参考区间】 未孵育未孵育50%溶血：溶血：4.004.45g NaCL/L； 37孵育孵育24h 50%溶血：溶血：4.655.90g NaCL/L增加 见于轻型遗传性红细胞增多症，见于轻型遗传性红细胞增多症， 遗传性非球形红细胞溶血性贫血。遗传性非球形红细胞溶血性贫血。降低 见于珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血、见于珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血、 镰状细胞性贫血、脾切除手术后。镰状细胞性贫血、脾切除手术后。 本试验用于轻型遗传性红细胞增多症，遗传性本试验用于轻型遗传性红细胞增多症，遗传性 非球形红细胞溶血性贫血的诊断和鉴别诊断。非球形红细胞溶血性贫血的诊断和鉴别诊断。（二）红细胞孵育渗透脆性试验第31页/共136页血液置于血液置于37温箱孵育温箱孵育24h葡萄糖的消耗，贮备的葡萄糖的消耗，贮备的ATP减少减少膜对阳离子的主动传递受阻，膜对阳离子的主动传递受阻，Na在红细胞内聚集在红细胞内聚集红细胞膨胀，孵育渗透脆性增加红细胞膨胀，孵育渗透脆性增加在孵育时，加入葡萄糖在孵育时，加入葡萄糖和和ATP作为纠正物，观作为纠正物，观察溶血可否有一定的纠察溶血可否有一定的纠正，称为纠正试验。正，称为纠正试验。【参考区间参考区间】 正常人红细胞孵育正常人红细胞孵育48小时，不加纠正物的小时，不加纠正物的 溶血率溶血率4.0%，加葡萄糖的溶血率，加葡萄糖的溶血率1.0%， 加加ATP纠正物的溶血率纠正物的溶血率290s【应用评价应用评价】遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症AGLT50明显缩明显缩 短（短（1525s）。自身免疫性溶血性贫血、）。自身免疫性溶血性贫血、 肾功能衰竭、妊娠等肾功能衰竭、妊娠等AGLT50也可缩短。也可缩短。第34页/共136页正常人的血清，在条件下正常人的血清，在条件下酸化，补体被激活酸化，补体被激活PNH患者体内存在对补体敏患者体内存在对补体敏感的红细胞，在此条件下发感的红细胞，在此条件下发生溶血。而正常人的红细胞生溶血。而正常人的红细胞不被溶解。将血清加热不被溶解。将血清加热5630min灭活补体后，血灭活补体后，血清失去溶血作用。清失去溶血作用。 本实验是本实验是PNH的确证实验的确证实验；其假阳性和假阴性较少见，；其假阳性和假阴性较少见， 但如患者多次输血而使其补体敏感红细胞相对减少时，可但如患者多次输血而使其补体敏感红细胞相对减少时，可 呈弱阳性或阴性。某些自身免疫性溶血性贫血患者溶血发呈弱阳性或阴性。某些自身免疫性溶血性贫血患者溶血发 作严重时也偶呈阳性，此时，作严重时也偶呈阳性，此时，如果血清加热破坏补体后，如果血清加热破坏补体后， 试验结果由阳性转变为阴性，那么更支持试验结果由阳性转变为阴性，那么更支持PNH的诊断。的诊断。第35页/共136页第36页/共136页PNH患者因红细胞膜有缺陷而对补体敏感在离低子强度的蔗糖溶液中，补体与细胞膜的结合加强使对补体敏感的红细胞膜造成缺损，红细胞溶解破损【参考区间参考区间】 正常人为阴性正常人为阴性【应用评价应用评价】本试验比酸溶血试验敏感，但特异性本试验比酸溶血试验敏感，但特异性 较差，是较差，是PNH简易过筛试验。再生障碍简易过筛试验。再生障碍 性贫血、巨幼红细胞性贫血和自身免疫性贫血、巨幼红细胞性贫血和自身免疫 性溶血性贫血患者也可出现阳性，故必性溶血性贫血患者也可出现阳性，故必 要时需做酸化血清溶血试验加以鉴别。要时需做酸化血清溶血试验加以鉴别。第37页/共136页血细胞表型分析PNH是一种获得性基因突变导致的克隆性疾病，其异常的血细胞膜糖化肌醇磷脂锚（GPI-anchor）连接蛋白如CD59,CD55等表达明显减低或缺乏，细胞膜对补体的敏感性增强而引起溶血性贫血。用GPI连接蛋白如CD59的单克隆抗体作分子探针，流式细胞术分析红细胞和白细胞膜CD59等分子的表达量和计数其缺乏表达（阴性）细胞的数量。【参考范围参考范围】PNH诊断的临界值：CD59阴性的红细胞大于5%和CD59阴性的中性粒细胞大于10%，非PNH者均小于5%；PNH患者CD59阴性的红细胞大于9%，多数患者大于20%；CD59阴性的中性粒细胞均大于16%。【应用评价应用评价】 该实验的灵敏度和特异性可达100，而Ham实验的灵敏度为50左右，但实验需要的流式细胞仪其价格比较贵，实验价格也较高。第38页/共136页将制备的红细胞膜样品进行SDS-PAGE电泳，根据样品中各种蛋白相对分子质量的不同，分离得到红细胞膜蛋白的电泳图谱，从而可见各膜蛋白组分百分率。红细胞各种膜蛋白组分百分率变化较大，与正常红细胞膜蛋白电泳图谱作比较。或以带3蛋白为基准，各膜蛋白含量与带3蛋白的比例表示。许多先天性和后天性溶血性贫血都伴有红细胞膜蛋白异常，各种膜缺陷疾病如遗传球形红细胞增多症有收缩蛋白等含量减低或结构异常。某些血红蛋白病骨架蛋白等可明显异常。第39页/共136页第40页/共136页第41页/共136页遗传性球形红细胞增多症是一种红细胞膜蛋白结构异常所致的遗传性溶血 病，其特点是外周血中出现较多小球形红细胞。其特点是外周血中出现较多小球形红细胞。多呈常染色体显性遗传，少数呈常染色体隐性遗 传的HS常合并新的基因突变而发病，研究显示 HS有第8号染色体短臂缺失。贫血、黄疸和脾肿大，是最常见的临床表现红细胞膜收缩蛋白自身聚合位点及其结构的区域异常膜结构与功能的异常钠泵功能亢进，钠、水进入细胞增多红细胞呈球形红细胞内的ATP相对缺乏钙-ATP酶受抑制，钙沉积膜上，膜的柔韧性降低该红细胞通过脾脏被截留，于巨噬细胞内破坏破坏不能被机体代偿时出现溶血性贫血第42页/共136页遗传性球形红细胞增多症1血象 血红蛋白和红细胞量多为正常或轻度降低，血片中出现 小球形红细胞为本病的血液形态学特征；网织红细胞增 加，一般为5%10%，急性溶血发作时可高60%70%。 嗜多色性红细胞增多，外周血中可出现少数幼稚红细胞。2骨髓象 红细胞增生旺盛，粒红比值降低，红细胞系以中、晚 幼红细胞为主，可占有核细胞的25%60%；当发生再 障危象时，骨髓中红细胞系再生低下，有核红细胞减少。3渗透脆性试验 HS红细胞渗透脆性增高4红细胞膜电泳分析 SDS-PAGE电泳可得到红细胞膜蛋白各组 分的百分率，80%的患者可发现异常。5红细胞膜蛋白定量测定 绝大多数HS有一种或多种膜蛋白缺乏6分子生物学技术应用球形红细胞较正常红细胞小、厚，且深染，大小比较均一，直径变小（），厚度增加（），染色后细胞中央淡染区消失，小球形红细胞所占的比例在不同的患者中差别较大，多数患者在球形红细胞较正常红细胞小、厚，且深染，大小比较均一，直径变小（），厚度增加（），染色后细胞中央淡染区消失，小球形红细胞所占的比例在不同的患者中差别较大，多数患者在10%以上（正常人多以上（正常人多5%）。）。第43页/共136页第44页/共136页 HS无特异的临床表现和实验室检查，诊断时 应结合病史、临床表现和实验室检查综合分析。 血涂片中小球形细胞大于10%，红细胞渗脆性增加， 有阳性的家族史，本病的诊断可成立。 注意与自身免疫性溶血性贫血所致继发性球形 红细胞增多症相鉴别，后者Coombs（+）。 对Coombs试验多次阴性者，应作红细胞膜蛋白分析 和组分定量，必要时采用基因序列分析的方法，寻找 诊断依据和进行家系调查以鉴别诊断。第45页/共136页是一组由于红细胞膜蛋白异常引起的异质性家族遗传性溶血病，其共同特点是外周血中存在大量的椭圆形成熟红细胞。其共同特点是外周血中存在大量的椭圆形成熟红细胞。HE大多为常染色体显性遗传，极少数为常染色体隐性遗传。定义本病的原发病变是膜骨架蛋白异常，原发病变是膜骨架蛋白异常，其膜收缩蛋白结构有缺陷，膜骨架稳定性降低。HE的红细胞在骨髓释放入血液循环后由于膜骨架的红细胞在骨髓释放入血液循环后由于膜骨架蛋白的缺陷，在通过微循环时由于切变力的作用变成椭圆形后不能蛋白的缺陷，在通过微循环时由于切变力的作用变成椭圆形后不能恢复正常，同时，红细胞由于膜骨架稳定性的降低容易破坏，大多恢复正常，同时，红细胞由于膜骨架稳定性的降低容易破坏，大多数椭圆形红细胞在脾脏被破坏。数椭圆形红细胞在脾脏被破坏。第46页/共136页遗传性椭圆形红细胞增多症1血象 有轻重不等的贫血，隐匿型可表现正常。血片中椭圆形 红细胞的比例大于25%。其形状呈椭圆形、卵圆形、棒状或其形状呈椭圆形、卵圆形、棒状或 腊肠形，椭圆形红细胞横径与纵径之比小于，腊肠形，椭圆形红细胞横径与纵径之比小于，硬度增 加，中心淡染区消失。2骨髓象骨髓象 骨髓红细胞系统增生活跃为增生性贫血骨髓象。骨髓红细胞系统增生活跃为增生性贫血骨髓象。3红细胞渗透脆性试验红细胞渗透脆性试验 红细胞渗透脆性试验和红细胞渗透脆性试验和 自身溶血试验多增高。自身溶血试验多增高。4红细胞膜蛋白电泳分析及低离子强度非变性凝胶电泳膜 收缩蛋白分析 其异常结果有助于膜分子病变的确定。5分子生物学方法 检测某些膜蛋白基因突变。 依据临床表现、家族调查和相关实验室检查多数病例可确诊，无阳性家族史时若椭圆形红细胞大于无阳性家族史时若椭圆形红细胞大于50%也可明确诊断。也可明确诊断。本病应与缺铁性贫血、巨幼细胞贫血、骨髓纤维化、骨髓病性贫血、骨髓增生异常综合征、珠蛋白生成障碍性贫血等鉴别。第47页/共136页第48页/共136页是一种罕见的常染色体显性遗传性慢性溶血性贫血。本病的本病的特征是血片中出现较多的口形红细胞，有轻重不一的溶血阳特征是血片中出现较多的口形红细胞，有轻重不一的溶血阳性家族史。性家族史。HST不是单一的疾病，而是发病机制、红细胞形态和临床表现都不同的一组综合征。定义在口形细胞中，钠离子浓度增高，钾离子浓度减低，从而使离子泵的在口形细胞中，钠离子浓度增高，钾离子浓度减低，从而使离子泵的负荷增至负荷增至610倍，但仍不足以代偿钠钾的失衡状态，导致细胞水肿、倍，但仍不足以代偿钠钾的失衡状态，导致细胞水肿、肿胀，体积增大，红细胞脆性增高。肿胀，体积增大，红细胞脆性增高。根据口形红细胞内钠、钾离子和阳离子总量的多少水肿细胞型又称水肿细胞增多症，其细胞内钠、钾离子和阳离子总量明显增多，致水分进入细胞内，使红细胞肿胀表现为口形；此型细胞渗透脆性增加，变形能力减弱，在脾扣留被巨噬细胞吞噬破坏。干细胞型又称干细胞增多症或脱水型细胞增多症，由于细胞脱水致红细胞边缘皱褶或不规则，有时可呈靶形；此种细胞变形能力降低，红细胞渗透脆性降低，主要在单核-巨噬细胞系统内破坏。其他细胞型第49页/共136页遗传性口形红细胞增多症血片中口形红细胞增多，可达血片中口形红细胞增多，可达10%50%。口形红细胞中心苍白区呈狭窄的裂缝，裂缝的中央较两端更为狭窄，缝的边缘清楚，类似微张的鱼口；而在湿血片中，红细胞双凹面消失而呈单面凹，形似碗状。正常人外周血中也可见到少量口形细胞，一般为小于。口形红细胞中心苍白区呈狭窄的裂缝，裂缝的中央较两端更为狭窄，缝的边缘清楚，类似微张的鱼口；而在湿血片中，红细胞双凹面消失而呈单面凹，形似碗状。正常人外周血中也可见到少量口形细胞，一般为小于4%。 贫血一般轻微，血红蛋白很少低于贫血一般轻微，血红蛋白很少低于80g/L，多数患者网织红，多数患者网织红细胞增多，约细胞增多，约1020；红细胞渗透脆性试验增高，也可正常或降低；自身溶血可呈阳性，可被葡萄糖或；红细胞渗透脆性试验增高，也可正常或降低；自身溶血可呈阳性，可被葡萄糖或ATP部分纠正。部分纠正。依据临床表现、外周血口形红细胞增多和家族史一般可作出诊断。但需要与继发性口形红细胞增多症相鉴别，继发性口形红细胞增多症除口形红细胞增多外，一般无溶血，缺乏家族史，外周血口形红细胞增多和家族史一般可作出诊断。但需要与继发性口形红细胞增多症相鉴别，继发性口形红细胞增多症除口形红细胞增多外，一般无溶血，缺乏家族史，并具有相应疾病的特征。第50页/共136页第51页/共136页是一种获得性造血干细胞基因突变引起红细胞膜缺陷所致的溶血病。出现细胞膜对自身补体（C3）敏感性增高的异常红细胞，引起慢性血管内溶血。睡眠时加重，可伴发作性血红蛋白尿和全血细胞减少症。定义骨髓造血组织受到损伤，而引起多能造血干细胞的基因突变，产生膜异常的干细胞克隆，异常造血干细胞不断增生、分化，形成具有PNH缺陷的细胞群；这种缺陷不仅累及红细胞，也累及患者的粒细胞、淋巴细胞和血小板。患者体内红细胞分三型型对补体的敏感性正常；型对补体中度敏感；型对补体高度敏感。与睡眠有关的间歇溶血发作，以血红蛋白尿为主要特征，多为慢性血管内溶血，伴有全血细胞减少和反复血栓形成。临床表现发病机制第52页/共136页阵阵发发性性睡睡眠眠性性血血红红蛋蛋白白尿尿症症1血象 贫血，呈正色素性或低色素性贫血，网织红细胞 常增高，可见有核红细胞及红细胞碎片。白细胞 和血小板多减少，半数患者呈全血细胞减少。2骨髓象 半数以上的患者三系增生活跃，尤以红系造血 旺盛。随病情变化表现不一，不同穿刺部位增 生程度可明显差异。3特殊溶血试验（1）溶血存在的依据：尿隐血试验或尿含铁血黄素试验阳性。（2）补体敏感的红细胞存在的依据：蔗糖溶血试验、 热溶血试验、酸化血清溶血试验。酸化血清溶血试验。4流式细胞术检测发现流式细胞术检测发现GPI锚连接蛋白锚连接蛋白（CD55或CD59） 低表达的异常细胞群，支持PNH诊断。本试验是目前是目前 诊断诊断PNH特异性和敏感性最高且可定量的特异性和敏感性最高且可定量的检测方法。第53页/共136页阵发性睡眠性血红蛋白尿阵发性睡眠性血红蛋白尿症症1诊断标准诊断标准 临床表现符合临床表现符合PNH或上述必须考虑为或上述必须考虑为PNH的表现情况；的表现情况； 有肯定的血红蛋白尿发作或血管内溶血的直接、间接证据；有肯定的血红蛋白尿发作或血管内溶血的直接、间接证据； 实验室检查证明有补体敏感的红细胞群存在和检测实验室检查证明有补体敏感的红细胞群存在和检测CD55及及CD59 这两种常见的血细胞表面锚蛋白相关抗原的表达情况是确诊试验。这两种常见的血细胞表面锚蛋白相关抗原的表达情况是确诊试验。2鉴别诊断鉴别诊断 排除其他溶血病，全血细胞减少还应与再障鉴别。排除其他溶血病，全血细胞减少还应与再障鉴别。3再障再障-PNH综合症的诊断综合症的诊断 凡再障转化为凡再障转化为PNH，或，或PNH转化为再障，转化为再障， 或兼有两病特征者，均属再障或兼有两病特征者，均属再障PNH综合征。综合征。再障再障-PNH综合症再分为四种情况：综合症再分为四种情况：（1）再障）再障-PNH：指原有肯定的再障（而非未能诊断的：指原有肯定的再障（而非未能诊断的PNH早早期表期表 现），现），转为可确定的转为可确定的PNH，再障的表现已不明显。，再障的表现已不明显。（2）PNH-再障：再障： 指原有肯定的指原有肯定的PNH（而非下述的第（而非下述的第4类），类）， 转为明确的再障，转为明确的再障，PNH的表现已不明显。的表现已不明显。（3）PNH伴有再障特征：指临床及实验室检查所见均说明病情仍以伴有再障特征：指临床及实验室检查所见均说明病情仍以 PNH为主，但伴有一个或一个以上部位骨髓增生低下、为主，但伴有一个或一个以上部位骨髓增生低下、 巨核细胞减少、网织红细胞不增高等再障表现者。巨核细胞减少、网织红细胞不增高等再障表现者。（4）再障伴有）再障伴有PNH特征：指临床及实验室检查所见均说明病情仍以特征：指临床及实验室检查所见均说明病情仍以再再 障为主，但伴有障为主，但伴有PNH的实验诊断结果阳性者。的实验诊断结果阳性者。第54页/共136页临床症状与实验室检查临床症状与实验室检查 PNH再生障碍性贫血再生障碍性贫血出血较少，且程度较轻常有，程度较重感染较少较多巩膜黄染部分病例有无肝脾肿大部分病例有偶见全血细胞减少约半数病例有所有病例有血小板波动约半数病例有，可达正常少有波动感染时白细胞升高反应无少有网织红细胞常增高常减少骨髓增生活跃或明显活跃约90.5%约40.7%中性粒细胞碱性磷酸酶积分明显降低增高血清胆红素明显增高可轻度增高蔗糖溶血试验阳性阴性尿含铁血黄素试验均有罕见酸化血清溶血试验阳性阴性第55页/共136页定义红细胞酶缺陷是指参与红细胞代谢（主要是糖代谢）的酶由于基因突变导致的酶活性或性质改变所引起的溶血及（或）其他表现的疾病。第56页/共136页乳酸脱氢酶葡萄糖6-磷酸葡萄糖磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸乳酸5-磷酸核酮糖6-磷酸葡萄糖酸ADPATPNADHNAD-丙酮酸激酶NADPH+H+NADP+NADP+G-6-PD6PGD谷胱甘肽还原酶NADPH+H+氧化型谷胱甘肽谷胱甘肽还原型谷胱甘肽谷胱甘肽过氧化酶H2OH2O2参与核苷酸代谢或转变为3-磷酸甘油醛后参与糖酵解糖酵解途径糖酵解途径戊糖磷酸旁路途径戊糖磷酸旁路途径第57页/共136页（一）（一）高铁血红蛋白还原试验高铁血红蛋白还原试验G6PG-6-PDNADP还原型美蓝高铁血红蛋白（Fe3+）高铁血红蛋白还原酶6-磷酸葡萄糖酸NADPH氧化型美蓝血红蛋白（Fe2+）1. 加入亚硝酸盐使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化成高铁血 红蛋白，正常红细胞的G-6-PD催化戊糖旁路使NADP成 NADPH，其脱下的氢通过亚甲蓝试剂的递氢作用而使高铁血 红蛋白（Fe3+）还原成亚铁血红蛋白（Fe2+），比色测定。2.当当G-6-PD缺乏症时，由于缺乏症时，由于NADPH生成减少或缺乏，生成减少或缺乏， 高铁血红蛋白不被还原或还原速度减慢，高铁血红高铁血红蛋白不被还原或还原速度减慢，高铁血红 蛋白还原率下降。蛋白还原率下降。3. 正常人高铁血红蛋白还原率正常人高铁血红蛋白还原率75%（脐带血（脐带血77%）。）。4. G-6-PD缺乏时，高铁血红蛋白还原率下降。中间缺乏缺乏时，高铁血红蛋白还原率下降。中间缺乏 （杂合子）（杂合子） 为为31%74%，严重缺乏（半合子或纯合子），严重缺乏（半合子或纯合子）30%。第58页/共136页（二）（二）变性珠蛋白小体生成试验变性珠蛋白小体生成试验 G-6-PD缺乏的病人血样加入乙酰苯肼于缺乏的病人血样加入乙酰苯肼于37孵育孵育24小时，使血红蛋白变性，用煌焦油蓝等碱性染小时，使血红蛋白变性，用煌焦油蓝等碱性染料染色观察红细胞珠蛋白小体的生成情况，料染色观察红细胞珠蛋白小体的生成情况，计算含计算含5个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率。个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率。正常人含正常人含5个及以上珠蛋白小体的红细胞一般个及以上珠蛋白小体的红细胞一般30%。二、实验室检查二、实验室检查第59页/共136页1G-6-PD缺乏症常高于缺乏症常高于45%，可作，可作G-6-PD缺乏的筛检试验。缺乏的筛检试验。 但还原型谷胱甘肽缺乏症也增高；不稳定血红蛋白病含小体但还原型谷胱甘肽缺乏症也增高；不稳定血红蛋白病含小体 的细胞百分率为的细胞百分率为75%84%，HbH病和化学物质中毒时也增高。病和化学物质中毒时也增高。2变性珠蛋白小体，主要是变性珠蛋白小体，主要是、珠蛋白链的病变而引起的珠蛋白链的病变而引起的 溶解度和稳定性降低所致；是一种变性血红蛋白颗粒，一溶解度和稳定性降低所致；是一种变性血红蛋白颗粒，一 般附着在细胞膜上，故又称血红蛋白包涵体，变性珠蛋白般附着在细胞膜上，故又称血红蛋白包涵体，变性珠蛋白 小体可被碱性染料着色。该实验与异丙醇试验和热不稳定小体可被碱性染料着色。该实验与异丙醇试验和热不稳定 实验一样可作为不稳定血红蛋白存在的一种证据。实验一样可作为不稳定血红蛋白存在的一种证据。3G-6-PD活性正常时，红细胞通过磷酸戊糖旁路形成活性正常时，红细胞通过磷酸戊糖旁路形成NADPH 使使MHb还原成亚铁血红蛋白，因而含变性珠蛋白小体的红细还原成亚铁血红蛋白，因而含变性珠蛋白小体的红细 胞减少，而胞减少，而G-6-PD活性减低时，活性减低时，NADPH减少，减少，MHb增多，增多， 导致含变性珠蛋白小体的红细胞增多，不稳定血红蛋白由于导致含变性珠蛋白小体的红细胞增多，不稳定血红蛋白由于 血红蛋白分子结构发生改变，稳定性减低易被氧化，含变性血红蛋白分子结构发生改变，稳定性减低易被氧化，含变性 珠蛋白小体的红细胞可增多，伯氨喹啉型溶血性贫血，含变珠蛋白小体的红细胞可增多，伯氨喹啉型溶血性贫血，含变 性珠蛋白小体的红细胞也可增多。性珠蛋白小体的红细胞也可增多。（二）（二）变性珠蛋白小体生成试验变性珠蛋白小体生成试验第60页/共136页在在G-6-PD和和NADP+存在下，存在下，G-6-PD能使能使NADP+还原成还原成NADPH，后者在紫外线照射下会发出荧光。，后者在紫外线照射下会发出荧光。NADPH的吸收的吸收峰在波长峰在波长340nm处，可通过单位时间生成的处，可通过单位时间生成的NADPH的量来的量来测定测定G-6-PD活性。活性。（三（三）G-6-PD荧荧光斑光斑点试点试验和验和活性活性测定测定G-6-PD缺陷见于蚕豆病、伯氨喹啉型药物性溶血性贫血。缺陷见于蚕豆病、伯氨喹啉型药物性溶血性贫血。利用此实验可对高发区域人群或疑诊的新生儿进行筛查。利用此实验可对高发区域人群或疑诊的新生儿进行筛查。正常人有很强荧光。正常人酶活性为：正常人有很强荧光。正常人酶活性为： （）（）U/gHb（37） （ICSH推荐的推荐的Glock与与McLean法）法）（）（）U/gHb（37）（）（WHO推荐的推荐的Zinkham法）法） G-6-PD缺陷者的荧光很弱或无荧光；杂合子或某些缺陷者的荧光很弱或无荧光；杂合子或某些 G-6-PD变异者则可能有轻到中度荧光。变异者则可能有轻到中度荧光。二、实验室检查二、实验室检查第61页/共136页（四）（四）丙酮酸激酶荧光斑点试验和活性测定丙酮酸激酶荧光斑点试验和活性测定在在ADP存在的条件下催化存在的条件下催化PEP转化成丙酮酸，在转化成丙酮酸，在NADH的作用下，丙酮酸被的作用下，丙酮酸被LDH转化为乳酸，荧光标记转化为乳酸，荧光标记NADH上，此时有荧光的上，此时有荧光的NADH变为无荧光的变为无荧光的NAD，检测以上过程荧光消失的时间反应，检测以上过程荧光消失的时间反应PK的活性。的活性。荧光斑点不消失或时间延长说明丙酮酸激酶活性缺乏，中间缺乏（杂合子）时，荧光荧光斑点不消失或时间延长说明丙酮酸激酶活性缺乏，中间缺乏（杂合子）时，荧光2560分钟消失，严重缺乏（纯合子）时，分钟消失，严重缺乏（纯合子）时， 荧光荧光60分钟不消失。分钟不消失。正常人丙酮酸激酶活性斑点在正常人丙酮酸激酶活性斑点在25分钟内消失。分钟内消失。 酶活性（）酶活性（）U/gHb。PEPADPLDH乳酸丙酮酸PKATP荧光标记NADHNAD+二、实验室检查二、实验室检查第62页/共136页红细胞红细胞G-6-PD基因突变致活性降低和基因突变致活性降低和/或酶性质改变，是一种或酶性质改变，是一种X性连锁隐性或不完全显性遗传性疾病。性连锁隐性或不完全显性遗传性疾病。G-6-PD缺乏时，红细胞膜脂质和膜蛋白巯基的氧化，引起红细胞僵硬，易被脾脏和肝脏中的巨噬细胞破坏导致溶血。缺乏时，红细胞膜脂质和膜蛋白巯基的氧化，引起红细胞僵硬，易被脾脏和肝脏中的巨噬细胞破坏导致溶血。（一）红细胞葡萄糖（一）红细胞葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺陷症磷酸脱氢酶缺陷症第63页/共136页第64页/共136页第65页/共136页（二）丙酮酸激酶缺陷症（二）丙酮酸激酶缺陷症基因缺陷，常染色体隐性遗传，仅次于基因缺陷，常染色体隐性遗传，仅次于G-6-PD缺陷症缺陷症缺陷时，缺陷时，ATP产生减少，引起血管外溶血，表现为产生减少，引起血管外溶血，表现为 慢性溶血性贫血。慢性溶血性贫血。检验检验1筛检试验筛检试验 红细胞自溶血试验、红细胞自溶血试验、 PK荧光斑点试验荧光斑点试验2酶活性定量试验酶活性定量试验 PK活性检测活性检测3ATP测定测定4中间代谢产物测定中间代谢产物测定 2，3-二磷酸甘油酸（二磷酸甘油酸（2，3-DPG） 磷酸烯醇式丙酮酸（磷酸烯醇式丙酮酸（PEP） 2-磷酸甘油酸（磷酸甘油酸（2-PG）诊断和鉴别诊断诊断和鉴别诊断1红细胞红细胞PK缺乏的实验室诊断标准缺乏的实验室诊断标准2遗传性红细胞丙酮酸激酶缺乏症主要通过遗传性红细胞丙酮酸激酶缺乏症主要通过 红细胞红细胞PK活性的测定进行诊断。活性的测定进行诊断。 三、红细胞酶缺陷检查的应用三、红细胞酶缺陷检查的应用第66页/共136页成熟红细胞内的主要蛋白质是血红蛋白（成熟红细胞内的主要蛋白质是血红蛋白（Hb），占细胞干），占细胞干重的重的96%，占细胞容积的，占细胞容积的35%。正常血红蛋白由两对珠蛋。正常血红蛋白由两对珠蛋白肽链和白肽链和4个亚铁血红素构成的个亚铁血红素构成的4个亚基组成的四聚体，形个亚基组成的四聚体，形状近似球形的结合蛋白。状近似球形的结合蛋白。血红蛋白的合成受铁的供应、原血红蛋白的合成受铁的供应、原卟啉和珠蛋白合成的影响。卟啉和珠蛋白合成的影响。分子结构：分子结构：由血红素和珠蛋白构成由血红素和珠蛋白构成，其分子由四个亚基构，其分子由四个亚基构成，即两个成，即两个亚基和两亚基和两个个亚基，可组装成亚基，可组装成22结构结构血红蛋白血红蛋白合成：合成：65%合成于有核红细胞期，合成于有核红细胞期，35%合成合成 于网织红细胞期。血红蛋白是一种结于网织红细胞期。血红蛋白是一种结 合蛋白，合蛋白，分子量约为分子量约为64458每个亚基由：每个亚基由：一条珠蛋白肽链一条珠蛋白肽链和一个血红素分和一个血红素分子构成子构成血红素是铁原子和原卟啉血红素是铁原子和原卟啉的复合物。为含铁卟啉的复合物。为含铁卟啉衍生物，铁原子位于原卟衍生物，铁原子位于原卟啉啉的卟啉环中心的卟啉环中心珠蛋白肽链有珠蛋白肽链有6种：种：、。出生后白主要出生后白主要有有、四种珠蛋白四种珠蛋白肽链。肽链。第67页/共136页正常血红蛋白由两对珠蛋白肽链和正常血红蛋白由两对珠蛋白肽链和4个亚铁血红素构成的个亚铁血红素构成的4个亚基组成的四聚体，形状近似球形的结合蛋白。血红蛋白的合成受铁的供应、原卟啉和珠蛋白合成的影响。个亚基组成的四聚体，形状近似球形的结合蛋白。血红蛋白的合成受铁的供应、原卟啉和珠蛋白合成的影响。血红蛋白由四条非共价结合的球蛋白链组成，每条链结合一血红素基团，亦即血红蛋白分子的氧结合位点。血红蛋白由四条非共价结合的球蛋白链组成，每条链结合一血红素基团，亦即血红蛋白分子的氧结合位点。第68页/共136页血红素是铁原子和原卟啉血红素是铁原子和原卟啉的复合物，是含铁卟啉衍生物，铁原子位于原卟啉的复合物，是含铁卟啉衍生物，铁原子位于原卟啉的卟啉环中心。血红素是血红蛋白的组成成分，是的卟啉环中心。血红素是血红蛋白的组成成分，是Hb、Mb、多种酶和多种细胞色素的辅基，其合成于有核红细胞和肝细胞的线粒体内。血红素合成后，离开线粒体，在胞质内与珠蛋白肽链结合为血红蛋白；血红素由脾脏、骨髓、肝脏中的巨噬细胞吞噬降解。在血红素合成过程中酶的缺陷引起卟啉或其前体在体内蓄积可导致卟啉病。、多种酶和多种细胞色素的辅基，其合成于有核红细胞和肝细胞的线粒体内。血红素合成后，离开线粒体，在胞质内与珠蛋白肽链结合为血红蛋白；血红素由脾脏、骨髓、肝脏中的巨噬细胞吞噬降解。在血红素合成过程中酶的缺陷引起卟啉或其前体在体内蓄积可导致卟啉病。珠蛋白按四级结构与血红素形成血红蛋白，血红蛋白的每个亚基由一条珠蛋白肽链和一个血红素分子构成，肽链在生理条件下成球形，把血红素分子包在里面，这条肽链盘绕成的球形结构又被称为珠蛋白。珠蛋白按四级结构与血红素形成血红蛋白，血红蛋白的每个亚基由一条珠蛋白肽链和一个血红素分子构成，肽链在生理条件下成球形，把血红素分子包在里面，这条肽链盘绕成的球形结构又被称为珠蛋白。胚胎期：胚胎期：Hb Gower1（22）Hb Gower2（22）Hb Porthland（22）3周出现，周出现，12周完全消失周完全消失出生后：出生后：HbA(22)：占总量的：占总量的96%98%；HbA2(22)：占总：占总量的量的1.2%3.5%；HbF(22)：出生后迅速下降，出生后迅速下降，2岁时接近成人岁时接近成人，占总量的，占总量的2%以下。以下。胎儿后胎儿后2/3期和期和新生儿期：新生儿期：HbF(22)：胎：胎儿血红蛋白儿血红蛋白（一）血红蛋白的结构第69页/共136页第70页/共136页第71页/共136页（一一）血血红红蛋蛋白白电电泳泳根据不同的血红蛋白带有不同的电荷，等电点不同，在一根据不同的血红蛋白带有不同的电荷，等电点不同，在一定的定的pH缓冲液中，缓冲液的缓冲液中，缓冲液的pH大于大于Hb的等电点时其带负的等电点时其带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动；反之，电荷，电泳时在电场中向阳极泳动；反之，Hb带正电荷向带正电荷向阴极泳动，不同的血红蛋白所带电荷和相对分子量不同，阴极泳动，不同的血红蛋白所带电荷和相对分子量不同，可分离出各自的区带。可分离出各自的区带。1通过与正常人的血红蛋白电泳图谱进行比较，可发现通过与正常人的血红蛋白电泳图谱进行比较，可发现 异常血红蛋白区带。如异常血红蛋白区带。如HbH、HbE、Hb Barts、HbS、 HbD和和HbC等异常血红蛋白。等异常血红蛋白。2HbA2增多，见于增多，见于珠蛋白生成障碍性贫血，为杂合子的重要珠蛋白生成障碍性贫血，为杂合子的重要 实验室诊断指标。实验室诊断指标。HbE病时也在病时也在HbA2区带位置处增加，但含区带位置处增加，但含 量很大。量很大。HbA2轻度增加亦可见于肝病、肿瘤和某些血液病。轻度增加亦可见于肝病、肿瘤和某些血液病。1缓冲液醋酸纤维膜电泳缓冲液醋酸纤维膜电泳 ，适合于检出，适合于检出HbA、 HbA2、HbS、HbC，但，但HbF不易与不易与HbA分开，分开，HbH与与 Hb Barts不能分开和显示。不能分开和显示。2缓冲液醋酸纤维膜电泳缓冲液醋酸纤维膜电泳 主要用于主要用于HbH和和 Hb Barts的检出。的检出。二、实验室检查二、实验室检查第72页/共136页（二（二）抗碱抗碱血红血红蛋白蛋白检测检测 胎儿血红蛋白（胎儿血红蛋白（HbF）具有比具有比HbA更强的抗碱作用，将更强的抗碱作用，将待检的溶血液与一定量的待检的溶血液与一定量的NaOH溶液混合，作用溶液混合，作用1分钟分钟后加入半饱和硫酸铵中止碱变性反应。后加入半饱和硫酸铵中止碱变性反应。HbF抗碱变性作抗碱变性作用强，没有变性存在于上清中，而用强，没有变性存在于上清中，而HbA变性沉淀，变性沉淀，取上取上清液于清液于540nm处测定吸光度，检测出处测定吸光度，检测出HbF的浓度。的浓度。【应用评价应用评价】1HbF绝对增多绝对增多 珠蛋白生成性贫血时珠蛋白生成性贫血时HbF增加，重型者增加，重型者 达达30%90%，中间型常为，中间型常为5%30%，轻型小于，轻型小于5%。遗传。遗传 性胎儿血红蛋白持续综合征患者，性胎儿血红蛋白持续综合征患者，HbF可高达可高达100% 。2HbF相对增多相对增多 某些血液疾病某些血液疾病3HbF生理性增多生理性增多 多见于孕妇及新生儿。多见于孕妇及新生儿。【参考区间参考区间】 成人成人2%，新生儿，新生儿40%二、实验室检查二、实验室检查第73页/共136页（三（三）血红血红蛋白蛋白F酸酸洗脱洗脱试验试验HbF具有抗碱和抗酸作用，其抗酸能力比HbA强。将血涂片于酸性缓冲液中孵育，含含HbF的红细胞的红细胞不被酸洗脱，可被伊红染成红色，而含不被酸洗脱，可被伊红染成红色，而含HbA的红的红细胞均被酸洗脱，不能被伊红着色。细胞均被酸洗脱，不能被伊红着色。【应用评价应用评价】 珠蛋白生成障碍性贫血着色细胞增加，重型患者大多数 红细胞染成红色，轻型患者可见少数染成红色的细胞。 遗传性胎儿血红蛋白持续综合征全部红细胞均染为红色。【参考区间参考区间】 正常血片含正常血片含HbF的着色红细胞的着色红细胞（2%）；孕妇可有轻度增加。）；孕妇可有轻度增加。二、实验室检查二、实验室检查第74页/共136页（四（四）异丙异丙醇沉醇沉淀试淀试验验 在异丙醇这种能降低血红蛋白分子内部氢键 的非极性溶剂中，不稳定血红蛋白更快地裂 解沉淀。