微生物的实验室培养pptPPT学习教案

会计学1微生物的实验室培养微生物的实验室培养(piyng)ppt第一页，共63页。图1-1 常见的三种细菌(xjn)典型形态A.球菌 B.杆菌 C.弧菌第2页/共63页第二页，共63页。第3页/共63页第三页，共63页。伤寒杆菌细胞壁中含毒素第4页/共63页第四页，共63页。 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如(lr)，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.第5页/共63页第五页，共63页。第6页/共63页第六页，共63页。菌落(jnlu)细菌(xjn)的菌落特征因种而异 第7页/共63页第七页，共63页。1、结构：单细胞原核(yun h)分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）第8页/共63页第八页，共63页。链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现(fxin)了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产生的 应用(yngyng):第9页/共63页第九页，共63页。病毒(bngd)的结构第10页/共63页第十页，共63页。病毒(bngd) 第11页/共63页第十一页，共63页。SARS病毒(bngd)、 禽流感病毒(bngd)第12页/共63页第十二页，共63页。第13页/共63页第十三页，共63页。2、病毒(bngd)的增殖：第14页/共63页第十四页，共63页。真菌(zhnjn)第15页/共63页第十五页，共63页。如图是酵母菌电子显微镜下的形态(xngti)结构酵母菌和霉菌(mjn)青霉第16页/共63页第十六页，共63页。生殖(shngzh)直立(zh l)菌丝 营养菌丝腐生(fshng)生活孢子生殖第17页/共63页第十七页，共63页。第18页/共63页第十八页，共63页。第19页/共63页第十九页，共63页。 了解有关(yugun)培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 一、课题(kt)目标： 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌(mi jn)和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：第20页/共63页第二十页，共63页。一、基础知识：（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖(fnzh)使用的混合营养液。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然(tinrn)培养基和合成培养基。1.培养基的类型(lixng)和用途第21页/共63页第二十一页，共63页。 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(pi fng) (参考教材附录内容) 3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如(lr):生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 第22页/共63页第二十二页，共63页。加入(jir)青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌加入(jir)高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物加入(jir)青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞加入(jir)氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞第23页/共63页第二十三页，共63页。 根据(gnj)细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 合成(hchng)培养基:第24页/共63页第二十四页，共63页。 天然培养基有血清(xuqng)、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：营养成分丰富，培养效果好缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;天然(tinrn)培养基：第25页/共63页第二十五页，共63页。血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种金属离子； 激素；促贴附物质(wzh)，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。各种生长因子转移蛋白不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长(shngzhng)和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。第26页/共63页第二十六页，共63页。液体(yt)培养基：表面(biomin)生长均匀混浊(hnzhu)生长沉淀生长第27页/共63页第二十七页，共63页。固体(gt)培养基：菌落，菌苔第28页/共63页第二十八页，共63页。半固体(gt)培养基：无动力(dngl) 有动力(dngl)(弥散)(是否(sh fu)运动) 第29页/共63页第二十九页，共63页。4.培养基的用途(yngt)液体培养基：增菌固体(gt)培养基：纯化，增菌半固体(gt)培养基：动力检测，保种第30页/共63页第三十页，共63页。1.无菌技术(jsh)的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染(wrn)的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染(wrn)。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 第31页/共63页第三十一页，共63页。（）消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程(guchng)。区分为高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection）三种方式。2.消毒与灭菌的概念(ginin)及两者的区别 第32页/共63页第三十二页，共63页。（2）灭菌(mi jn)的定义：以化学剂或物理方法消灭(xiomi)所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。第33页/共63页第三十三页，共63页。1、煮沸消毒(xio d)法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒(xio d)法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化学药剂消毒(xio d)法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒(xio d);氯气消毒(xio d)水源4、紫外线消毒(xio d)(1)消毒(xio d)的方法：3.常用的消毒(xio d)与灭菌的方法第34页/共63页第三十四页，共63页。1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170 下加热1-2h。3、高压蒸气(zhn q)灭菌：100kPa、121 下维持15-30min.(2)灭菌(mi jn)的方法：第35页/共63页第三十五页，共63页。 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 而平皿是由正反两平面(pngmin)板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 第36页/共63页第三十六页，共63页。分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖体杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子第37页/共63页第三十七页，共63页。1、器具的灭菌2、培养(piyng)基的配制3、培养(piyng)基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养(piyng)7、菌种的保存第38页/共63页第三十八页，共63页。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养(piyng)物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否(sh fu)需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身(zshn)被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。第39页/共63页第三十九页，共63页。三、实验(shyn)操作 1.制备牛肉膏蛋白(dnbi)胨培养基（用于培养细菌）第40页/共63页第四十页，共63页。1计算、称量2溶化3调pH：pH764过滤：这一步可以省去。5分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶(shopng)的量以不超过三角烧瓶(shopng)容积的一半为宜。6加塞7包扎操作步骤第41页/共63页第四十一页，共63页。 8灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。 9倒平板(pngbn): 待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板(pngbn)。（倒平板(pngbn)操作见课本）2d后观察平板(pngbn)，无杂菌污染才可用来接种. 10无菌检查： 将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。第42页/共63页第四十二页，共63页。第43页/共63页第四十三页，共63页。 1.培养基灭菌(mi jn)后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度(wnd)下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第44页/共63页第四十四页，共63页。3.平板(pngbn)冷凝后，为什么要将平板(pngbn)倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来(yn li)培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度(shd)也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第45页/共63页第四十五页，共63页。2、纯化(chn hu)大肠杆菌接种方法有：平板划线(hu xin)法和稀释涂布平板法 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面. 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖(fnzh)而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.第46页/共63页第四十六页，共63页。第47页/共63页第四十七页，共63页。第48页/共63页第四十八页，共63页。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然(rngrn)需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染(wrn)培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染(wrn)环境和感染操作者。第49页/共63页第四十九页，共63页。 2.在灼烧接种(jizhng)环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种(jizhng)环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及(yj)其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第50页/共63页第五十页，共63页。第51页/共63页第五十一页，共63页。第52页/共63页第五十二页，共63页。 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释(xsh)的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作(cozu)的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。第53页/共63页第五十三页，共63页。第54页/共63页第五十四页，共63页。第55页/共63页第五十五页，共63页。 1、临时保藏：接种到固体斜面(ximin)培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法第56页/共63页第五十六页，共63页。四、课题(kt)成果评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程(guchng)中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。第57页/共63页第五十七页，共63页。本课题(kt)知识小结:第58页/共63页第五十八页，共63页。【典例解析(ji x)】 例1关微生物营养物质(wzh)的叙述中，正确的是A.是碳源的物质(wzh)不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供(tgng)无机盐。对于D选项，无机氮源提供(tgng)能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供(tgng)能量和氮源。答案：D第59页/共63页第五十九页，共63页。例2下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A.防止杂菌污染(wrn) B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前答案(d n)：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的(md)，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的(md)是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。第60页/共63页第六十页，共63页。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2OO100ml100ml例3右表是某微生物培养基成分(chng fn)，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入 .自养(z yn)型微生物 含碳有机物 第61页/共63页第六十一页，共63页。（3）若除去成分，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。（4）表中营养成分共有 类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装(fn zhun)前，要进行的是 。（6）右表中各成分重量确定的原则是 。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。固氮( dn)微生物 3 调整(tiozhng)pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂） 第62页/共63页第六十二页，共63页。感谢您的观看(gunkn)！第63页/共63页第六十三页，共63页。