实验室常用溶液的配制

实验室常用溶液的配制130%丙烯酰胺溶液（100ml）【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的蒸馏水中。加热至37溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45m孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于4温度。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸，因此大于1年的溶液应该被丢弃。240%丙烯酰胺（用于DNA测序，1L）【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N,N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。置棕色瓶中保存于室温。【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。30.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液（1ml）【配制方法】在0.8ml蒸馏水中溶解60mg ATP，用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水稀释1ml【注意】分装成小份保存于-70410mol/L乙酸铵溶液（1L）【配制方法】把770g乙酸铵溶解于800ml蒸馏水中，加水稀释至1L后过滤除菌。在4C储存。【注意】乙酸铵是热不稳定的。不要高压灭菌。510%过硫酸铵溶液（10ml）【配制方法】把1g过硫酸铵溶于8ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至10ml。该溶液可在4保存数周。61mol/L CaCl2溶液（200ml）【配制方法】称取54g CaCl26H2O并溶解在170ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至200 ml。用0.22m滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20。【用法】制备感受态细胞时，将等分试样解冻，用蒸馏水稀释至100ml。通过Nalgene过滤器（0.45微米）过滤除菌，并在使用前冷却至0。72.5mol/L CaCl2溶液（20ml）【配制方法】称取13.5g CaCl26H2O并溶于15ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至20ml。用0.22m滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20。8脱氧核苷三磷酸（dNTPs）溶液【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度。碱基波长消光系数（）（M-1cm-1）A2591.54104G2531.37104C2719.10103T2607.40103计算每个dNTP的实际浓度。对于路径长度为1cm的比色皿，吸光度等于消光系数和摩尔浓度的乘积。然后用蒸馏水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分别分装成小份贮存于-70。91mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液（20ml）【配制方法】称取3.09g DTT，溶于15ml蒸馏水中，用0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）补足体积至20ml。通过0.22微米过滤器过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20。【注意】不要对DTT或含有DTT的溶液进行高压灭菌。100.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液（1L）【配制方法】在800ml蒸馏水中加入186.1gNa2EDTA2H2O，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒），然后稀释至1L，分装后高压灭菌备用。在室温下保存。【注意】EDTA二钠盐不溶于水，需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。分配适当的等分试样并通过高压灭菌消毒。11溴化乙锭（10mg/ml溶液）（100ml）【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于4C。【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。使用后，这些溶液应进行净化。有关如何执行此操作的详细信息，请参阅机构指南。122HEPES缓冲盐溶液（100ml）【配制方法】用90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO42H2O、0.2g葡萄糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水稀释至100ml。用0.22m滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20。131mol/l异丙硫基-D-半乳糖苷IPTG溶液（10ml）【配制方法】IPTG（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水稀释至10ml，用0.22m一次性滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20。141mol/L乙酸镁（MgOAc）溶液（1升）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解214.46g四水乙酸镁，稀释至1L过滤除菌。在室温下保存。151mol/L MgCl2溶液（1升）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解203.4g MgCl26H2O，用水稀释至1L，分装成小份并高压灭菌备用。在室温下保存。【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。16酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L TrisHCl(pH7.6)萃取几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l TrisHCl(pH7.6)液层，保存于4。【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。1710mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液（10ml）【配制方法】用10ml异丙醇溶解PMSF成1.74mg，分装成小份贮存于-20。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF的水溶液在其已经变为碱性（pH 8.6）并在室温下储存几小时后可以安全地丢弃。（PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25的失活速率高于4。pH值为8.0时，20mmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为35min。）181mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液（100ml）【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml蒸馏水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后稀释到100ml，分装成小份后保存于-20。193mol/L乙酸钠（pH7.0）溶液（1升）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2，稀释到1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。203mol/L乙酸钠（pH5.2）溶液（1升）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至7.0，稀释到1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。215mol/L NaCl溶液（1升）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解292.2g NaCl加水稀释至1L，分装后高压灭菌。在室温下保存2210%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液（1升）【配制方法】在900ml蒸馏水中溶解100g电泳级SDS，加热至68溶溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水稀释至1L，分装备用。在室温下保存。【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS。10%SDS溶液无须灭菌。2320SSC（NaCl和柠檬酸钠）溶液（1升）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水稀释至1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。2420SSPE溶液（盐，磷酸钠，EDTA）（1升）【配制方法】在800ml毫升水中溶解175.3g NaCl，31.2g NaH2PO42H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水稀释至1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。25100%三氯乙酸（TCA）溶液（500g TCA）【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml蒸馏水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。在室温下保存。261mol/L Tris溶液（1升）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节pH值至所需值。对于pH 7.4，加入70ml HCl; 对于pH为7.6加入60ml HCl; 对于8.0的pH，加入42ml HCl。加水稀释至1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1，pH值大约降低0.03个单位，应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。27Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）（1升）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水稀释至1L，分装后高压灭菌（15 lb in-2液体循环中20min），于室温保存。28电泳用Tris-乙酸（TAE）（50X）（1升）【配制方法】称重242g Tris碱,加入800毫升蒸馏水溶解。加入57.1ml冰醋酸和100ml 0.5mol/l EDTA（pH8.0），用蒸馏水补足体积至1升。在室温下保存。【用法】用蒸馏水稀释1:49。TAE具有相当低的缓冲能力，并且在延伸电泳期间倾向于耗尽。因此，当在高电流下长时间进行电泳时，建议更换缓冲液或两个储存器之间的再循环。