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MMP2,MMP9在肝细胞癌中表达的比较研究字数：2336来源：中国健康月刊理论版 2011年7期 字体：大 中 小打印当页正文【摘要】 目的分析MMP2和MMP9在肝细胞癌中的表达，探讨不同的基质金属蛋白酶（MMPs）与肝细胞癌侵袭转移的特异相关性。 方法免疫细胞化学检测HepG2细胞系中MMP2和MMP9的表达，免疫组织化学检测38例HCC肝癌组织中MMP2和MMP9的表达。 结果MMP9在HepG2细胞系的表达高于MMP2的表达。在HCC组织中MMP9的表达率84.2%(32/38)明显高于MMP2的表达52.6%(20/38)，二者有显著差异(P0.05)。结论 MMP9在体内外的表达均高于MMP2，推测可能MMP9与HCC的侵袭转移关系更为密切。 【关键词】 HepG2细胞系；HCC；MMP2； MMP9 肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是人类常见的消化系统恶性肿瘤,其恶性程度及侵袭性严重影响患者预后。细胞外基质( ex tracell mat rix , ECM)是阻碍肿瘤侵袭转移的天然屏障，ECM主要由型胶原组成，而基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9( matrix metal loproteinas 2and 9 , MMP2、MMP9）是将其降解的主要酶。本研究探讨MMP2和MMP9在肝细胞癌中的表达差异，从而寻找与HCC侵袭转移关系最为密切的MMPs，为判断HCC的预后及为早期阻止HCC侵袭转移提供理论依据。 1材料与方法 1.1体外检测 1.1.1材料与设备HepG2肝癌细胞系,高糖型DMEM培养液,新生牛血清。 1.1.2制备细胞爬片HepG2细胞常规培养（37,5%CO2),胰酶消化吹打成悬液,滴入放有小盖玻片的24孔板中培养,待细胞铺满盖玻片将培养液吸出，PBS 冲洗，4%多聚甲醛固定。 1.1.3免疫细胞化学检测MMP2 鼠抗人单克隆抗体，MMP9 兔抗人多克隆抗体，羊抗鼠、羊抗兔二抗。免疫组化采用sABC 法。 1.2体内HCC组织的检测 1.2.1组织来源38例HCC组织，分别来自哈尔滨医科大学病理教研室和哈尔滨医科大学附属二院病理科。男24例，女14例。最大年龄71岁，最小年龄31岁，平均年龄48.5岁。 1.2.2免疫组织化学检测试剂和方法同1.1.3。 1.2.3免疫组化的结果判定 根据细胞着色深度及阳性细胞数分别记为04分，着色深度以多数细胞呈色程度为准。整张切片中阳性细胞数占所有细胞中的比例10%为1分；10-30%为2分；30-50%为3分；50%为4分，无细胞着色为0分。按照上述两项指标即染色面积与强度之和分为5级：0分为 (-)；1分为()；23分为(+)；45分为(+)；67分为(+)。 1.2.4统计学分析 应用SPSS 15.0 for Windows 软件,采用非参数检验中的Wilcoxon符号秩检验。 2结果 2.1HepG2细胞MMP2和MMP9检测结果 MMP9在HepG2细胞呈高表达，主要表达在肿瘤细胞的胞浆中，而MMP2在HepG2细胞几乎无表达或仅有极少数的细胞呈低表达。 2.2HCC组织MMP2和MMP9检测结果 MMP2和MMP9在HCC组织中主要表达在癌细胞的胞浆中，间质细胞中有少量表达，在38例HCC组织的检测中，MMP9的表达率为84.2%（32/38）, MMP2的表达率为52.6%（20/38）,MMP9在表达强度和表达面积上均强于MMP2，二者有显著差异 (P0.05)，见表1。 注：P=0.011 2.3MMP2和MMP9在HepG2细胞和HCC组织中检测结果的比较 在体内外的检测中发现MMP9的表达均高于MMP2的表达，说明在肝细胞癌的侵袭转移过程中MMP9与MMP2扮演着不同的角色，其重要程度亦不相同。 3讨论 细胞爬片结果显示在肝癌细胞HepG2中无论在表达的强度还是在表达面积上MMP9都强于MMP2，这表明HepG2细胞分泌MMP9的能力强于分泌MMP2的能力。由此可见，虽然MMP2和MMP9同为基质金属蛋白酶，都在肿瘤的侵袭转移过程中发挥重要作用，但是它们各自作用的肿瘤又有特异，可以推测MMP9与HCC的关系较之MMP2不同，似乎MMP9与HCC的关系更为密切。同时在HCC组织免疫组化中，MMP9的阳性率(84.2%)高于MMP2的阳性率(52.6%)，MMP9在表达的强度和表达面积上（按染色面积与强度之和分级）均强于MMP2，二者有显著差异(P0.05)，这一结果也与现有的相关报道不一致，但与细胞爬片结果一致。因此这一结果印证了细胞爬片中MMP2和MMP9的表达差异,进一步证明了MMP9在HCC侵袭转移过程中的重要性。 综上所述，MMP9在体内外（至少是在HepG2细胞系中）的高表达就可以说明在MMPs中MMP9 与HCC的关系较为密切，在癌细胞的侵袭转移过程中发挥了重要作用。设计以MMP9为靶点针对肝细胞癌复发转移治疗的研究将有助于早期阻止HCC侵袭转移、降低患者死亡率, 而MMPs抑制剂对肿瘤转移也有治疗潜能。 参考文献 1 廖刚.机制金属蛋白酶与肝癌侵袭转移的研究进展J.重庆医学,2007,36(17):1775- 1778 2 张卫国 王一.肝细胞癌侵袭转移机制研究进展J.中华肝脏病志,2001,9(3):191-192
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