吉林医药学院大学生科研基金.doc

吉林医药学院大学生科研资金申 请 书项 目名 称：马齿苋对肝脏的保护作用及有效成分分析申 请 者：所属单位及专业：电 话：13596353126电子信箱(E-mail):研 究 起 止 时间：2009年10月-2010年6月吉 林 医 药 学 院二九年九月制项目名称马齿苋对肝脏的保护作用及有效成分分析经费总概算5850元所属学科预防医学项目组主要研究人员及指导老师姓名专业学历层次（职称）研究过程中所承担的工作签字预防医学大学本科实验设计预防医学大学本科技术处理预防医学大学本科动物饲养预防医学大学本科数据分析教授指导老师1项目简介（字数不超过300字）软枣猕猴桃，俗称“软枣子”，生于阔叶林或针阔混交林中。分布于我国黑龙江省、吉林省、山东省及华北、西北以及长江流域各省区，朝鲜、日本、俄罗斯也有分布。果实可食用，营养价值很高，此果VC含量高于其他水果，可称VC之王，同时含人体所需的氨基酸，VB，铁，镁等，尤其软枣猕猴桃里含有猕猴桃碱、皂甙、黄酮类，对人体很有益处。有强壮、解热、健胃、止血等功能；根及根皮对消化道癌有一定治疗和抑制作用。通过查阅大量的文献和指导老师的悉心帮助，我们了解到目前对软枣猕猴桃抗氧化的研究还有待进一步深入，进而确立了我们的研究课题，即软枣猕猴桃的化学成分及抗氧化能力的研究，探索软枣猕猴桃在日常生活中的保健作用。本实验以软枣猕猴桃果实为原料,探索软枣猕猴桃果实提取物对小鼠肝脏甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、丙二醛（MDA）含量及超氧化合物歧化酶（SOD）活力的影响2立项依据（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析、查新情况、主要参考文献等）。基础研究：着重结合国际科学研究发展趋势，论述项目的科学意义；应用基础研究：着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用情景；应用研究：着重结合国内外相关领域技术现状和发展趋势，论述项目的应用价值；开发研究：着重结合项目主要技术特点、先进性等，比较国内外同类研究现状，进行知识产权分析和市场前景预测，论述项目的社会效益和经济效益。研究意义：马齿苋是我国各地习见的野生植物，作为中药，马齿苋有清热解毒、凉血滑肠、健胃消积、消炎及利尿的功效。还具有较高的营养价值，被营养学家誉为21世纪最有发展前途的绿色食品之一，是一种珍贵的野生植物资源。作为新型的食物源，越来越引起人们的关注。同时现代生活中的不合理饮食所引起的肝脏损伤，如：脂肪肝、肝硬化、肝癌等严重影响了人们的生活质量。因此探讨对肝脏的保护作用，有着十分重要的意义。马齿苋不但营养价值高，而且具有多种药用功效，对促进人体健康和增强体质等大有裨益，在医药、保健和食品领域具有广阔的发展前景。目前对野菜马齿苋的研究多局限在抗菌、镇痛、消炎、抗病毒、抗肿瘤、降血糖等方面，对肝脏保护作用的研究尚少。本次课题是在参考了大量文献和动物实验的基础上设计的，进一步研究马齿苋对肝脏的保护作用及有效成分分析，为野菜马齿苋的进一步开发提供参考依据。研究现状：国内：目前有实验研究证实：麦胚、显齿蛇葡萄、银杏、广枣、黄芪、葛根、山楂、荞麦、苦瓜等所含有的黄酮类化合物有预防或治疗脂肪肝的功效。现已有推测马齿苋中的黄酮类化合物有同种功效，但是未经实验研究证实。其中脂肪肝研究中，卢新华等经实验表明苦菜总黄酮对四氯化碳、乙醇所致肝损伤有明显保护作用，提示可能与苦菜总黄酮减少肝脏GSH耗竭，抑制肝脂质过氧化作用有关。荞麦种子总黄酮能抑制喂饲胆固醇和高脂食物大鼠血清TC和TG的升高，抑制肝脏脂质过氧化，说明黄酮类化合物对脂肪肝有一定的疗效。而且有科研人员研究表明其提取物可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡，改变细胞周期分布，从而抑制细胞增殖。国外： 英国科研人员研究揭示，马齿苋叶所含大量-3系列的不饱和脂肪酸，能使血管内皮细胞合成的抗炎物-前列腺素增多，使血小板形成的血栓素A2减少、血液黏度下降、抗凝血脂增多，从而起到预防血栓形成的作用，从而有效地预防冠心病的发生。 美国科学家小诺曼赛勒姆发现马齿苋的钾含量较高，而钾在人体内可以很好地配合蛋白质修复被破坏的组织和血管，减少中风的发生。美国农业部的一个研究所，对马齿苋进行长期的研究后，发现马齿苋的茎叶中含有SL3-脂肪酸，这种脂肪酸是形成细胞膜，尤其是脑细胞和眼细胞膜的重要成份。过去认为这种脂肪酸只储存在脂性海鱼，如沙丁鱼、鲭鱼、秋刀鱼等的体内。这一意外发现，为人类食谱增加了一味新的高营养食品来源。新情况：（1）马齿苋的应用价值马齿苋作为一种药食两用的野生蔬菜,具有丰富的营养和保健作用，在食品、医药、饲料等方面都有广泛的应用。在临床上可用于治疗肠炎、痢疾、百日咳、阑尾炎、疮疡、肿毒等多种炎症疾病；外用可治丹毒及蛇毒咬伤，素有“天然抗生素的美称”。此外马齿苋还有防治心脏病、冠心病、心绞痛、糖尿病、白癜风、白发病、抗癌、降血压等作用。（2）马齿苋的开发利用及前景展望马齿苋对气候土壤的环境条件适应性很强，具有耐干旱，抗病虫害，易繁殖，生命力强和生长较快的特性。在我国各地均有野生分布，在民间已有数千年的应用历史。在现代，马齿苋已被卫生部划定为药食同源食物之一，它的开发利用作为一项绿色工程，其发展前景非常广阔。目前，对马齿苋开发的品种还很少，资源尚未充分利用。因此，进一步深入开展马齿苋药理及化学成分研究，探讨其有效成分及其作用机制，为现代生活中野菜的开发提供参考依据有着重要意义。参考文献（近35年）1 高莉、刘婕、隋彦辉、李佳，河南工业大学化学化工学院，4500522 丁怀伟、姚佳琪、宋少江。马齿苋的化学成分和药理活性研究进展。沈阳药科大学学报。2008，3朱丽等：马齿苋的研究现状与综合开发利用。河北林果研究 2006.21（2）4段玉峰，韩果萍，马齿苋多糖组分的分离纯化及抗氧化活性研究 J食品科学，2005，26（3）：225-2285牛广财，朱丹，马齿苋化学成分及其药理作用研究进展 J安徽农业科学，2005，33（6）：1090-1092，47-506耿敬章 冯君琪 黄酮类化合物生理功能与应用研究 陕西理工学院生物科学与工程学院 汉中 723001 7张俊平 王淑英 李小萍等水飞蓟对小鼠肝脏炎症损伤和肿瘤坏死因子的产生及活性的影响 药学学报8孙希云等 马齿苋总黄酮抗氧化性质的研究 沈阳农业大学学报 2006 02 37（1）：108-1109罗丽萍等 薯蔓黄酮对SD大鼠降血脂作用研究 2005-26（1） 211-21510刘树军 黄静娟 车念聪 非乙醇性脂肪肝发病机制研究 首都医科大学学报 2007 28（2）：21611刘峰，陈钢，中医药治疗脂肪肝的临床与实验研究进展 安徽中医学院院报Vol.23，No.3 59-6212腾宇，张秋菊，齐治家，中医药抗脂肪肝的研究进展 北京中医药大学学报，中医临床版 2004年，3月第12卷 第2期 97-1013研究方案（包括研究目标、研究内容、拟解决的关键问题、采用的研究方法、技术路线、实验方案、可行性分析、本项目的创新之处）研究目标：马齿苋对肝脏有保护作用，能降低脂肪肝肝脏中甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、丙二醛（MDA）的含量，增强超氧化合物歧化酶（SOD）活力。研究内容：（1） 探索马齿苋对大鼠因高脂膳食所造成的脂肪肝的预防和治疗作用，测定大鼠肝脏甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、丙二醛（MDA）含量及超氧化合物歧化酶（SOD）活力；（2） 测定马齿苋中的黄酮类化合物、维生素C、多糖、氨基酸等成分含量；（3） 肝组织切片观察：大鼠处死后取肝进行切片制作，观察肝组织形态学变化拟解决的关键问题：马齿苋对大鼠肝脏起保护作用时的有效剂量解决方案：先做预实验，摸索马齿苋对大鼠肝脏起保护作用时的有效剂量采用的研究方法：马齿苋有效成分测定、大鼠脂肪肝动物模型、灌胃实验、血清测定、肝组织切片观察技术路线： 实验分组大鼠脂肪肝模型的建立灌 胃血清测定 数据整理及分析组织切片观察得出结论撰写论文实验方案：（1）分组：取标准大鼠60只。按体重随机分为六组：即正常对照组、大鼠高脂乳剂组、脂肪肝模型+马齿苋高剂量组、高脂乳剂+马齿苋低剂量组、高脂乳剂+马齿苋中剂量组、高脂乳剂+马齿苋高剂量组。（2）动物模型建立：室温20-23,相对湿度51%-65%，垫料经高压灭菌,每周换窝两次,自由饮用饮用水,水瓶每周高压灭菌一次。组喂食常规饲料，组饲喂常规饲料并以高脂乳剂1 ml /100g灌胃，马齿苋水提物灌胃低剂量组：按0.8g/100g体重给予灌胃，每日一次；马齿苋水提物灌胃中剂量组：按1.6g/100g体重给予灌胃，每日一次；马齿苋水提物灌胃高剂量组:按3.2g/100g体重给予灌胃，每日一次，持续30天。 注：第组是在脂肪肝模型建成之后再进行马齿苋水提物灌胃，探索马齿苋对脂肪肝的治疗效果；第组是脂肪肝模型建立和马齿苋水提物灌胃同时进行，探索马齿苋对脂肪肝的预防作用。（3）血清测定：禁食1天(不禁水) ,第二天清晨末次给药1 h后，取血检测甘油三酯（TG），胆固醇（TC），谷草转氨酶（AST），谷丙转氨酶（ALT）,丙二醛（MDA）含量及超氧化合物歧化酶（SOD）活力，记录数据。（4）组织切片：将大鼠处死，分别取出各组肝组织用中性甲醛固定,石蜡包埋, HE染色,光镜下观察肝组织学的改变情况。可行性分析 ：（1） 人群中有食用马齿苋之后血脂降低的现象；（2） 在预实验中已对马齿苋的营养成分进行了初步分析；（3） 营养教研室已提供此次实验所需器材及实验室，并全力保证实验顺利完成。创新点：（1） 目前主要研究马齿苋的提取物以药物方式进行应用，把马齿苋以食疗方式进行应用的研究尚少。（2） 目前临床主要应用马齿苋的有效药理成分进行抗菌、抗病毒、抗肿瘤等，较少用于防治高血脂、脂肪肝等。因此探索马齿苋对肝脏的保护作用，做到未病先防，既病防变是此课题的创新点之一。4研究计划及预期进展（以半年为单位详细填写）2009年11月-12月：资料查询及实验仪器准备；2010年3 月- 6 月：大鼠脂肪肝模型的建立及血清测定、肝组织切片观察等；2010年9 月-10 月：数据分析，撰写论文。5预期研究成果（1）马齿苋对肝脏有保护作用，能降低脂肪肝肝脏中甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、丙二醛（MDA）的含量，增强超氧化合物歧化酶（SOD）活力。（2）发表论文，为野菜马齿苋的进一步开发提供参考依据。6经费预算合计5850元支出科目金额（元）计算根据及理由项目业务费：400各种仪器的使用实验材料费3750大鼠：2000元；饲料：500元；马齿苋：100元；生理盐水：50元；资料查询与打印费：100元；高脂乳剂：400元；甲醛、石蜡、玻片、盖玻片、切片：200元；芦丁标准品：400元仪器设备费高压锅，离心机，匀浆机，灌胃针（营养教研室提供所需设备与仪器）协作费1700生化分析注：预算支出科目按以下顺序填写：1项目业务费2实验材料费3仪器设备费4协作费项目不能按期完成将承担的责任 项目负责人： （签字）指导老师： （签字） 年 月 日部（院、系）意见负责人： （签字） 年 月 日主管单位意见负责人： （盖章） 年 月 日基金管理小组意见负责人： （盖章） 年 月 日