答案-3.细胞生物学的研究方法.doc

第三章 细胞生物学的研究方法一、填空题1. 透射电子显微镜由 、 、 三部分所组成。 镜筒 真空系统 电力系统2. 在酵母人工染色体制备过程中，要用酶脱去酵母的细胞壁，使之成为 ，并且用 进行观察和计数。 原生质体 相差显微镜3. 凝胶过滤层析又称 或 ，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的 进行分离和纯化。 排阻层析 分子筛法 相对分子质量4. 观察贴壁生长的培养动物细胞可用 ，而观察脱去细胞壁的植物细胞，则要用 。倒置显微镜 相差显微镜5. 用紫外光为光源观察物质比用可见光的分辨率要高，这是因为 。紫外光波长比可见光的波长短6. 通过 或 形成的细胞叫细胞株。突变 克隆化7细菌细胞、酵母菌细胞和植物细胞的细胞壁的化学组成是不同的，所以在制备原生质体时用不同的酶脱壁。一般说来，细菌可用 ，酵母可用 ，植物细胞可用 。溶菌酶 裂解酶 果胶酶或纤维素酶8相差显微镜与普通显微镜的不同是用 替代可变光阑，用 代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。环状光阑 带相板的物镜9倒置显微镜与普通显微镜的不同在于其 。物镜和照明系统的位置颠倒10若用紫外光为光源，光学显微镜的最大分辨率为 ，透射电子显微镜的最大分辨率为 ，扫描电镜的分辨率为 。0.1m 0.1nm 3nm 11显微镜的分辨本领是指能够 能力，用 来表示。分辨出相邻两个点的 最小分辨距离12高压电镜的电压在120kV以上，优点是： 、 。穿透性强 不需切片13细胞培养的突出特点是：可在 。离体条件下观察和研究生命活动的规律14贴壁生长的细胞具有三个特点： ； ； 。单层生长 形态变成多态性 具有接触抑制现象15超薄切片染色常采用 和 双染法。柠檬酸铅 醋酸双氧铀16免疫细胞化学技术是用来定位细胞中的 物质。抗原17电子显微镜使用的是 透镜，而光学显微镜使用的是 透镜。电磁 玻璃18在光学显微镜下见到的结构称为 ，在电子显微镜下见到的结构称为 。显微结构 超微结构19细菌质膜的多功能性主要表现在：具有 的呼吸作用，具有 的分泌作用，具有 的信号传导作用。线粒体 高尔基体 质膜20显微镜的分辨率约等于光波长的 ，通常把这一数值看成是光学显微镜分辨力的 。一半 最大值21单克隆抗体技术是将 与无限繁殖的肿瘤细胞杂交的技术。可以产生抗体的淋巴细胞22可用 技术来研究质膜结构的不对称性。冰冻蚀刻23乙醇沉淀DNA的主要原理是 。脱去与DNA分子结合的水24适于观察活细胞的光学显微镜有 、 和 等。相差显微镜 暗视野显微镜 倒置显微镜25分辨率是指人的肉眼或显微镜在25cm处能够分辨到的相邻两个物体间最近距离的能力。人眼为 ，普通光学显微镜为 ，透射电子显微镜为 ，扫描隧道显微镜为 ，扫描电子显微镜为 ，以紫外光为光源的光学显微镜为 。100m 0.2m 0.1nm 0.001nm 3nm 0.1m26细胞内不同组分分级分离的常用方法有离心法、层析法、电泳法等。离心技术可将细胞匀浆中的不同细胞器或生物大分子进行有效分离。因为不同形态、大小和密度的细胞器以及步弓分子质量的生物大分子在离心力作用下 各不相同。离心分离法又分 和 两种。 离心是一种较为简便的分离法，常用于细胞核和 的分离。因为在密度均一的介质中，颗粒越大沉降越 ，反之沉降较 。这种离心方法只能将那些大小有显著差异的组分分开，而且所获得的分离组分往往不是很纯。而 离心则是较为精细的分离手段，这种离心方法的关键是先在离心管中制备出 或 等介质的浓度梯度并将细胞匀浆装在最上层。在此条件下离心，细胞不同组分将以不同速率沉降并形成不同的沉降带。成密度梯度的介质可以稳定沉淀成分、防止对流混合。层析法是分离蛋白质的常用手段，其基本原理是不同的蛋白质分子其 和 不同，当它们通过某种介质（基质）而与其发生相互作用时，会被不同程度地 ，这样便使不同类型的蛋白质分子移动的快慢不同，从而得以分离。根据蛋白质的大小、所带电荷或特殊的化学集团选择不同的基质的层析，如凝胶过滤柱层析、离子交换树脂柱层析或亲和层析等，可以更有效地分离不同的蛋白质。 法是分离蛋白质、核酸的有效方法，在细胞生物学研究领域有着广泛的应用。其基本原理是，不同种类的蛋白质或核酸所携带净电荷的 不同，它们在一定强度的电场中会按所带 、分子的 以不同速度在电场中移动，从而得以分离成不同的 。沉降速度 差速离心 密度梯度离心 差速 细胞器 快 慢 密度梯度 蔗糖 氯化铯 大小 电荷 滞留或吸附 电泳 性质（正或负）或多少 净电荷 大小和形状 电泳带谱二、判断题1透射或扫描电子显微镜不能用于观察活细胞，而相差或倒置显微镜可以用于观察活细胞。对2扫描隧道显微镜是具有原子显像力的显微镜。对3以蔗糖为介质的密度梯度离心又叫差速密度梯度离心。对4CsCl密度梯度离心又称等密度梯度离心。对5CsCl密度梯度离心法分离纯化样品时，样品要和CsCl混匀后分装。离心时，样品中不同组分因重力的不同而停留在不同区带。错。因密度不同而停留在不同的区带6提高显微镜的分辨率，可通过缩短波长，或给标本染色。错。通过染色是不行的。7在光学显微镜下观察到的细胞结构称为亚显微结构，在电子显微镜下观察到的结构称为超显微结构。错。前者称为显微结构，后者称为亚显微结构或超微结构8为了使光学显微镜或电子显微镜标本的反差增大，可用化学染料对标本进行染色。错误。光学显微镜可以，电子显微镜则不可以。9亲和层析法按分子内在电荷分离分子。错误。亲和层析能分开特定的大分子是因为它们与特定的配体相互作用，而不是因为它们带有电荷。10贴壁生长的细胞呈单层生长，且有接触抑制现象。对。11生物样品的电镜分辨率通常是超薄切片厚度的1/10，因而切得越薄，照片中反差也越强。错误。主要是切得越薄，越易穿透。12用Triton等去垢剂可以抽提细胞中的微管、微丝等蛋白质结构。错误。用Triton是不行的，Triton一般用来分离膜蛋白。13相差显微镜可用来观察活细胞和未经染色的标本。对。14细胞匀浆离心时，较小的细胞器经受较小的摩擦，因而比更大的细胞器更快沉淀。错误。尽管较大的细胞器在流体中移动时来自流体的摩擦力也较大，但是细胞器越大，它经受的离心力也就越大，因此沉降得也就越快。三、选择题1通过选择法或克隆形式从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的细胞群体称作 A细胞系 B细胞株 C细胞库 D其他B2观察活细胞的显微结构时，最好用 A荧光显微镜 B相差显微镜 C扫描电镜 D透射电镜B3使用氯化铯密度梯度离心法，其目的是 A通过密度梯度来维持重力的稳定性，防止物质对流B用来分离生物分子和细胞亚显微结构C防止生物大分子凝聚沉淀D以上都不对A4在凝胶电泳中，示踪染料的移动速度 A比各种不同分子样品移动地慢B与各种不同分子样品移动速度相同C比各种不同分子样品移动地快D以上都不对C5提高一般光学显微镜的分辨能力，常用的方法有 A利用高折射率的介质（如甘油）B调节聚光镜，加红色滤光片C用荧光抗体示踪D将标本染色A6流式细胞仪能快速测定细胞的下列哪些参数？ADNA含量 BRNA含量 C蛋白质含量 D细胞体积ABC7下列哪项与显微镜能达到的分辨率无关？A光波波长 B物镜的放大倍数 C标本和透镜之间的物质的折射率 D透镜的数值孔径B8哪一种柱层析分离蛋白质是建立在分子质量基础上的？A离子交换层析 B凝胶过滤层析 C亲和层析 D等电聚焦B9在递增细胞匀浆液的离心转速过程中最先沉淀下来的是 A核糖体 B线粒体 C未破碎的细胞核 D微体C10提高显微镜的分辨率最好的办法是 A增加放大倍数 B缩短波长 C增加波长 D给标本染色B11在细胞分级抽提方法中，为了溶解膜系统，应选用 ATriton X-100 BTween 40 C脱氧胆酸钠 D0.25mol/L硫酸钠A