细胞的形态与记数.ppt

湖州师院杨建民 细胞的形态与记数 目的与要求 1 初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法 2 熟悉光镜下动 植物细胞的基本形态 结构 3 掌握活细胞计数的使用方法 4 掌握显微测微尺的使用方法 临时制片方法及细胞形态的观察 一 人口腔黏膜上皮细胞制片与观察 取一载玻片 夹持载玻片两端 用清洁纱布擦净 在载玻片中央滴1滴0 5 次甲基蓝染液 用消毒牙签的钝端轻轻刮取颊部内侧的口腔黏膜上皮细胞 将牙签在载玻片的染液中来回滚动数次 染色2 3分钟 盖上盖玻片 注意不要有气泡产生 观察 先低倍 再高倍 细胞核被染成深蓝色 二 洋葱表皮细胞的制片与观察 取一擦净的载玻片 滴1滴1 碘液 将洋葱嫩茎用小刀切成小块 取1块肉质鳞叶 用镊子在其内表面轻轻撕下一小块表皮 再用剪刀剪成小块 置于载玻片的染液中铺平 染色2 3分钟 盖上盖玻片 先低倍 再高倍 细胞核被染成深黄色 细胞计数 细胞计数的原理 细胞计数时 先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液 然后将细胞悬液滴入细胞计数板内 计数计数板上计数室四大格内的细胞数 根据计数室的容积及稀释倍数 即可计算出细胞浓度 1 制备血细胞悬液 取1只乙醚麻醉过的蟾蜍 心脏取血1ml 用Ringer液稀释一定倍数制成细胞悬液 同时用蟾蜍血制备血涂片 室温晾干备用 2 熟悉血细胞计数板 血细胞计数板呈长方形 有2个计数室 每个计数室分为9个大正方格 每个大格边长1mm 计数室的底与盖玻片间的距离为0 1mm 即每大格的容积为1mm 1mm 0 1mm 0 1mm3四角的每个大格被分为16个中格 中央的大格被分为25个中格 每个中格被分为16个小格 3 滴片 将盖玻片擦净 盖在血球计数板槽上 取制备好的蟾蜍血细胞悬液1滴滴于血球计数板的盖玻片一侧边缘 让细胞悬液自然流入计数室内 注血细胞悬液不可滴得过多 如溢出或盖玻片内有气泡必须重做 否则将影响计数结果 4 计数 在低倍镜下数出计数板上计数室四角大格中的细胞数 如细胞压在格线上时 数上不数下 数左不数右 5 细胞浓度计算 将四大格的细胞总数除以4 得出平均每大格的细胞数 每大格的容积为0 1mm3 乘以10000即为1000mm3 1ml 不同稀释倍数细胞悬液的细胞浓度可用下式计算 细胞浓度 细胞数 ml 四大格的细胞数 4 10000 稀释倍数 应用显微镜的成像原理 同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺 两尺配合使用 进行测量和运算 得出细胞的大小 显微测量的原理 物镜测微尺 目镜测微尺 测微尺的使用操作 1 卸下目镜的上透镜 将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上 再旋上目镜的上透镜 2 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好 使测微尺刻度位于视野中央 调焦至看清镜台测微尺的刻度 3 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺 如目镜测微尺刻度模糊 可转动目镜上透镜进行调焦 使两尺左边的 0 点一直线重合 然后由左向右找出两尺另一次重复的直线 图 4 记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数 按下式计算目镜测微尺每格的长度等于多少 m目镜测微尺每格的长度 m 镜台测微尺的格数 目镜测微尺的格数 目镜测微尺量测倍率比照表 细胞生物学实验绘图方法与要求 1 在仔细观察的基础上 选择典型结构进行描绘 要求真实 准确 注意各部结构的比例关系 2 用铅笔绘图 线条要明确清晰 图的深浅明暗一律以点的疏密来表示 点要圆而一致 不得用涂暗影或进行其他美术加工 3 各部结构名称要在一侧引直线注明 各引线要平行不得交叉 4 每幅图的大小 位置在纸面上必须安排得当并注意纸面的清洁 实验报告 在低倍镜下数出计数板四角四大格中血细胞数 然后取下盖玻片 将血细胞记数板冲洗干净 重新滴片 记数 共三次 取3次记数的平均数代入公式计算出结果 一 分别求出使用低倍镜 10X 高倍镜 40X 时目镜测微尺每格代表的长度 低倍镜 目镜测微尺每格代表的长度 XlO m m高倍镜 目镜测微尺每格代表的长度 XlO m m二 分别绘制所观察的高倍镜下人口腔黏膜上皮细胞并注明基本结构 三 用测微尺测量不同材料各种细胞的大小后 制表格表示测量结果四 计算蟾蜍红细胞的核质比例 计算细胞 细胞核体积的公式 圆形V 4 3 r3 r为半径 椭圆形V 4 3 ab2 a b为长 短半径 核质比N D Vn Vc Vn Vn为核的体积 Vc是细胞质的体积