《细胞生物学题库》word版.doc

第一章、第二章二、判断题1.细胞生物学研究的主要内容包括细胞核、染色体以及基因表达的研究生物膜以及细胞器的研究 细胞骨架的研究 细胞增殖及其调控 细胞分化及其调控 细胞衰老与调之 细胞起源与进化 细胞工程。 （）2.细胞生物学的发展趋势是细胞学与分子生物学等其它学科相互渗透相互交融。 （）3.某些病毒含有DNA，还含有RNA。 （）4.病毒是结构很简单的生物，就起源来看，病毒起源早于单细胞。 （）5.细胞的形态结构与功能相一致。 （）6.细胞遵守“细胞体积守恒”定律，不论其种差异有多大，同一器官和组织的细胞，其大小倾向于在一个恒定的范围内。 （）三、单项选择1.原核细胞与真核细胞都有的一种细胞器是 E A.细胞骨架 B.线粒体 C.高尔基体 D.中心体 E.核糖体2.最早发现细胞并对其命名的是 A A. Hook R B. Leeuwenhook A C. Brown R D. Flemming W E. Darven C3.细胞学说的创始人是 E A .Hook B. Leeuwenhook C. Watson 和Crick D. Virchow E. Schleiden 和Schwann 4.在1894年，Altmann首次发现了下列哪种细胞器 C A.中心体 B.高尔基体C.线粒体D.内质网E.纺锤体5.Hook于1965年观察到的细胞实际上是 A A.植物死亡细胞的细胞壁 B. 死去的动物细胞 C.活的植物细胞D.细菌6.17世纪中叶Leeuwenhook用自制的显微镜观察到了 B A.植物细胞的细胞壁 B.精子、细菌等活细胞 C.细胞核 D.高尔基体等细胞器7.前苏联著名科学家G. Fank曾说过：生命的奥秘可能蕴涵在 B nm的大分子复合物中。A. 50500 B. 550 C. 50100 D. 0.55四、多项选择1.细胞生物学的分支包括 ABCD A.细胞遗传学 B.细胞生理学 C.细胞社会学D.细胞化学 E.生物化学2.活细胞的基本生命活动有 ABCDE A.生长发育 B.分裂繁殖 C.遗传变异 E.细胞衰老 F.细胞死亡3.现代的细胞生物学在哪些层次上研究细胞的生命活动 ABC A.分子水平 B.亚细胞水平 C.细胞整体水平 D.组织水平E.器官水平4.当今细胞生物学的发展热点集中在 ABCD 等方面。A.细胞通讯与细胞信号传导 B.细胞增殖与细胞周期的控制C.细胞的衰老与死亡 D.干细胞及其应用5.细胞生物学研究的模式生物有 ABCD A.老鼠 B.酵母 C.果蝇 D.线虫6.病毒的增殖过程包括 ABCD A.病毒的装配、成熟与释放 B.病毒侵入细胞、病毒核酸的侵染 C.病毒核酸的复制、转录 D.病毒蛋白质的合成7.胞质骨架主要是由 ACE 等构成的网络体系。A.微丝 B.弹性纤维 C.微管 D.中性纤维 E.中等纤维 F.微体8.更广范畴的原核细胞包括 ABCDE A.支原体B.衣原体C.立克次氏体D.细菌 E.放线菌 F.蓝藻 G.热原质体9.近年发现植物细胞的 A 和 B 具有类似溶酶体的功能。A.圆球体 B.糊粉粒 C.液泡 D.叶绿体 F.内质网五、填空题1.细胞生物学的发展大致分为_细胞的发现,细胞学说的建立, 细胞学的经典时期_,实验细胞学时期, 细胞生物学学科的形成与发展5个阶段。2._ 细胞_是生命体结构与活动的基本单位。3.我国基础科学发展规划中生命科学的四大基础学科是细胞生物学，分子生物学，神经生物学，生态学。4证明遗传因子位于染色体上并提出基因学说的人是Morgan _。5.提出“一切生命的关键问题都要到细胞中去寻找”的是Wilson。6.研究细胞中物质代谢、能量代谢、衰老与死亡等内容的分支学科称为细胞生理学_。7.研究细胞结构与功能异常与疾病关系的细胞生物学分支称为细胞病理学。8.细胞癌变的本质原因是细胞周期的失控。9.细胞工程包括细胞融合，细胞器移植，染色体工程，细胞和组织培养。10.在亚细胞水平，可将细胞结构大致分为三大基本结构体系遗传信息结构体系，膜的结构体系，细胞骨架结构体系。11.植物细胞较动物细胞所特有的结构是叶绿体，大液泡，细胞壁。12. 朊病毒_是仅由蛋白质构成的病毒，原核细胞的主要代表是细菌_和蓝藻。13.迄今发现的最小最简单的细胞是支原体。14.细胞是由膜包围能进行独立繁殖的原生质团_。15.病毒的分类方式多种多样，按核酸的种类分为DNA病毒_和RNA病毒_；按宿主的不同分为动物病毒，植物病毒和噬菌体。16.真核细胞与原核细胞最根本的区别可概括为两点：细胞膜系统的分化与演变和遗传信息量与遗传装置的扩增与复杂化。17病毒是最小、最简单的有机体；支原体是最小、最简单的细胞。18.古细菌与原核细胞的不同点表现在细胞壁成分，DNA与基因结构，核小体结构， 和核糖体、5S rRNA。六、简答题1.试分析克隆羊多利死亡的多种可能原因?1. 提示：乳腺细胞是衰老细胞,其细胞核高度分化,端粒过短2.为什么说古细菌比真细菌更可能是真核细胞的祖先? 参见课本（从细胞壁的成分，DNA与基因结构，核小体结构，核糖体，5S rRNA等结构说明3.细胞生物学的主要研究内容有哪些?（一）细胞的结构与功能 （二）细胞的重大生命活动（三）细胞的起源与进化（四）细胞工程4.为什么说支原体是可能最小最简单的细胞存在形式？影响细胞体积大小的因素有哪些?4支原体的的结构和机能极为简单：细胞膜、遗传信息载体DNA与RNA、进行蛋白质合成的一定数量的核糖体以及催化主要酶促反应所需要的酶。这些结构及其功能活动所需空间不可能小于100nm。因此作为比支原体更小、更简单的细胞，又要维持细胞生命活动的基本要求，似乎是不可能存在的，所以说支原体是目前发现最小、最简单的细胞。5.比较原核细胞与真核细胞在结构上的异同?特征原核细胞真核细胞细胞膜有（多功能性）有核膜无有染色体由一个环状DNA分子构成的单个染色体，DNA很少或不与蛋白质结合2个染色体以上，染色体由线状DNA与蛋白质结合而成核仁无有线粒体无有内质网无有高尔基体无有溶酶体无有核糖体70S（50S与30S的大小亚单位）80S（60S与40S的大小亚单位）光合作用结构蓝藻含叶绿素a的膜层结构，细菌有菌色素植物叶绿体具有叶绿素a与b核外DNA细菌具裸露的质粒DNA线粒体DNA、叶绿体DNA细胞壁主要成分是氨基糖与壁酸植物细胞壁为纤维素和果胶细胞骨架无有细胞增殖方式无丝分裂有丝分裂七、论述题1.细胞是生命活动的基本单位，根据你所学的知识，进行理解。11）一切有机体都是由细胞构成的，细胞是构成有机体的基本单位。2）细胞具有独立的，有许的自控代谢体系，细胞是代谢和功能的基础。3）细胞是生长和发育的基础。4）细胞是是遗传的基本单位，细胞具有遗传的全能性。5）没有细胞就没有完整的生命。2.细胞是生命活动的基本单位，它具有生命活动的基本要素是什么？21）细胞具有一套基因 2）具有一层质膜，能与外界进行物质和能量的交 3）具有一套完整的代谢机构第三章 细胞生物学研究方法一、名词解释1分辨率(resolution)：分辨率是指能分辨出的相邻两个物点间最小距离的能力， 这种距离称为分辨距离。分辨距离越小，分辨率越高。一般规定：显微镜或人眼在25cm明视距离处， 能清楚地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力， 称为分辨率。人眼的分辨率是 100 m;光学显微镜的最大分辨率是 0.2 m 2. 荧光(fluorescence)：分子由激发态回到基态时，由于电子跃迁而由被激发分子发射的光。物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，第一种是自发荧光，如叶绿素、血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光，称为自发荧光;第二种是诱发荧光，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光， 称为诱发荧光。3. 荧光显微镜(Fluorescence microscope)：以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。4. 相差显微镜(Phase contrast microscope)：相差显微镜是荷兰科学家Zermike于1935年发明的，用于观察未染色标本的显微镜。活细胞和未染色的生物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位发生变化(振幅差)，这种振幅差人眼无法观察。而相差显微镜通过改变这种相位差，并利用光的衍射和干涉现象，把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。相差显微镜和普通显微镜的区别是:用环状光阑代替可变光阑，用带相板的物镜代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。相差显微镜具有两个其他显微镜所不具有的功能:将直射的光(视野中背景光)与经物体衍射的光分开;将大约一半的波长从相位中除去，使之不能发生相互作用，从而引起强度的变化。5. 放射自显影(autoradiography)：放射自显影的原理是利用放射性同位素所发射出来的带电离子(或粒子)作用于感光材料的卤化银晶体，从而产生潜影，这种潜影可用显影液显示，成为可见的“像”，因此，它是利用卤化银乳胶显像检查和测量放射性的一种方法。 6. 扫描电子显微镜(scanning electron microscopy，SEM)：扫描电子显微镜是1965年发明的较现代的细胞生物学研究工具，主要是利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态，即用极狭窄的电子束去扫描样品，通过电子束与样品的相互作用产生各种效应，其中主要是样品的二次电子发射。二次电子能够产生样品表面放大的形貌像，这个像是在样品被扫描时按时序建立起来的，即使用逐点成像的方法获得放大像7. 扫描透射电子显微镜(scanning transmission electron microscopy，STEM)：既有透射电子显微镜又有扫描电子显微镜的显微镜。象SEM一样，STEM用电子束在样品的表面扫描，但又象TEM，通过电子穿透样品成像。STEM能够获得TEM所不能获得的一些关于样品的特殊信息。STEM技术要求较高，要非常高的真空度，并且电子学系统比TEM和SEM都要复杂。8. 高压电子显微镜(high-voltage electron microscopy，HVEM)：同透射电子显微镜基本相同，只是电压特别高。TEM使用的加速电压是50100kV，而HVEM使用的电压是2001000kV。由于电压高，就会大大减少造成染色体畸变的可能，因此，可以用较厚的细胞切片研究细胞的结构，切片的厚度最大可达1m，相当于普通TEM样品厚度的10倍。9. 染色(negative stainning)：用重金属盐(如磷钨酸钠、醋酸铀等)对铺展在载网上的样品进行染色，使整个载网都铺上一层重金属盐，而有凸出颗粒的地方则没有染料沉积。由于电子密度高的重金属盐包埋了样品中低电子密度的背景，增强了背景散射电子的能力以提高反差，这样，在图像中背景是黑暗的，而未被包埋的样品颗粒则透明光亮，这种染色称为负染技术。负染色是只染背景而不染样品，与光学显微镜样品的染色正好相反。10. 铸型技术(shadow casting)：铸型技术是电子显微镜中一种重要的增强背景和待观察样品反差的方法。基本过程包括: 将样品置于云母的表面，然后干燥;在真空装置中将样品镀上一层重金属(金或铂金)，喷镀时的加热丝具有一定的角度;将样品镀上一层碳原子，以增加铸型的强度和稳定性;将铸型置于酸池中，破坏样品，只留下金属铸型;将铸型漂洗后置于载网上进行电子显微镜观察。11. 扫描隧道显微镜(scanning tunneling microscope，STM)：扫描隧道显微镜使用电子学的方法，用一个金属针尖在在样品表面扫描。当针尖和样品表面距离很近时(1nm以下)， 针尖和样品表面之间会产生电压。当针尖沿X和Y方向在样品表面扫描时，就会在针尖和样品表面第一层电子之间产生电子隧道。该显微镜设计的沿Z字形扫描， 可保持电流的恒定。因此，针尖的移动是隧道电流的作用，并且可以反映在荧光幕上。连续的扫描可以建立起原子级分辨率的表面像12. 酶细胞化学技术(enzyme cytochemistry)：将细胞内的酶与底物相互作用， 再将酶反应的产物作为反应物质，在酶的作用部位进行捕捉，使其在显微镜下具有可见性。这种在酶作用下产生反应产物， 经捕捉反应来间接证明酶定位的反应称为酶的细胞化学反应。酶的细胞化学反应包括两个反应: 第一反应是酶作用于底物的反应， 称酶反应，形成的产物称为初级反应产物;第二反应是捕捉剂与初级反应产物的作用，称捕捉反应，产生最终反应产物：13. 免疫荧光技术(immunofluorescence)：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。14. 免疫电镜(immunoelectron microscopy)：将抗体进行特殊标记后用电子显微镜观察免疫反应的结果。根据标记方法的不同， 分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术和免疫胶体金技术。如免疫铁蛋白技术是将含铁蛋白通过一种低分子量的双功能试剂与抗体结合，成为一种双分子复合物，它既保留抗体的免疫活性，又具有电镜下可见的高电子密度铁离子核心，因此用铁蛋白标记的抗体可通过电镜免疫化学的方法在电镜下定位细胞中的抗原。由于某些固定技术(如锇酸固定)对抗体抗原的结合有干扰，因此应采取较为温和的样品制备方法。15. 染色体分选(chromosome sorting)：用流式细胞计分选特定的染色体，基本过程与细胞分选相似。不同的是，要用带有荧光标记的DNA探针同特异染色体结合，使待分选的染色体带上标记。在染色体分选中，使用的探针是同所感兴趣染色体互补的寡聚核苷酸，这种探针也可同荧光染料偶联。将结合有荧光染料的探针同染色体一起温育，使探针同特异染色体杂交，形成稳定的杂交体，这样染色体就被带上了荧光标记，稀释后送入流式细胞计的流室，然后与细胞分选过程一样将特异的染色体分选出来。16. 显微分光光度术(microspectrophotometry)：将显微镜技术与分光光度计结合起来的技术。它以物质分子的光吸收、荧光发射和光反射特性作为测定基础， 可用来分析生物样品细微结构中的化学成分，同时进行定位、定性和定量。17. 显微荧光光度术(microfluorometry)：利用显微分光光度计对细胞内原有能发光的物质或对细胞内各种化学成分用不同的荧光经荧光探针标记后进行定位、定性和定量地测定，称为显微荧光光度术， 也称细胞荧光光度术(cytofluorometry)。它是一种微观而灵敏的方法，对于研究细胞的结构、功能及其变化具有重要意义。18 核磁共振技术(nuclear magnetic resonance， NMR)：核磁共振技术可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000 道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构， 而不损伤细胞。核磁共振的基本原理是:原子核有自旋运动， 在恒定的磁场中， 自旋的原子核将绕外加磁场作回旋转动， 叫进动(precession)。进动有一定的频率， 它与所加磁场的强度成正比。如在此基础上再加一个固定频率的电磁波， 并调节外加磁场的强度， 使进动频率与电磁波频率相同。这时原子核进动与电磁波产生共振， 叫核磁共振。核磁共振时， 原子核吸收电磁波的能量， 记录下的吸收曲线就是核磁共振谱(NMR-spectrum)。由于不同分子中原子核的化学环境不同， 将会有不同的共振频率， 产生不同的共振谱。记录这种波谱即可判断该原子在分子中所处的位置及相对数目， 用以进行定量分析及分子量的测定， 并对有机化合物进行结构分析19. 细胞工程技术(cell engineering)：细胞工程技术是细胞生物学与遗传学的交叉领域，主要利用细胞生物学的原理和方法，结合工程学的技术手段，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传性的技术。包括体外大量培养和繁殖细胞，或获得细胞产品、或利用细胞体本身。主要内容包括：细胞融合、细胞生物反应器、染色体转移、细胞器移植、基因转移、细胞及组织培养。20. 原代培养(primary culture)：原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。21. 愈伤组织(callus， culli)：植物受创伤后，在伤面新生的组织称为愈伤组织。其原因是由于受创伤的刺激后，伤面附近的生活组织恢复了分裂机能，加速增生而将伤面愈合。在植物组织培养中的愈伤组织是指植物细胞在组织培养过程中形成的无一定结构的组织团块，在适宜的条件下，愈伤组织可再分化，形成芽、根，再生成植株。22. 细胞融合(cell fusion)：在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。23. 单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)：1975年英国科学家Milstein和Kohler所发明， 并获得1984年诺贝尔医学奖。它是将产生抗体的单个B淋巴细胞同肿瘤细胞杂交， 获得既能产生抗体， 又能无限增殖将杂种细胞，并以此生产抗体的技术。其原理是: B淋巴细胞能够产生抗体， 但在体外不能进行无限分裂; 而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代， 但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。24. 显微操作术(micromanipulation)：在显微镜下， 用显微操作装置对细胞进行解剖手术和微量注射的技术属显微操作技术。显微操作仪是在显微镜下对细胞进行显微操作的装置，可用于细胞核移植、基因注入、染色体微切和胚胎切割等手术。 25. 差速离心(differential centrifugation)：主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀，改用较高的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。26. 等密度离心(isodensity centrifugation)：等密度离心分离样品主要是根据被分离样品的密度。在这种离心分离方法中，要用介质产生一种密度梯度， 这种密度梯度覆盖了待分离物质的密度，这样，通过离心使不同密度的颗粒悬浮到相应的介质密度区。在这种梯度离心中，颗粒的密度是影响最终位置的惟一因素，因此用这种方法分离颗粒，主要是根据被分离颗粒的密度差异。只要被分离颗粒间的密度差异大于1% 就可用此法分离。27. 层析分离技术(chromatography)：根据蛋白质的形态、大小和电荷的不同而设计的物理分离方法。各种不同的层析方法都涉及共同的基本特点:有一个固定相和流动相，当蛋白质混合溶液(流动相)通过装有珠状或基质材料的管或柱(固定相)时，由于混合物中各组份在物理化学性质(如吸引力、溶解度、分子的形状与大小、分子的电荷性与亲和力)等方面的差异使各组分在两相间进行反复多次的分配而得以分开。流动相的流动取决于引力和压力，而不需要电流。用层析法可以纯化得到非变性的、天然状态的蛋白质。层析的方法很多，其中凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等是目前最常用的层析方法。28. 凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)：凝胶过滤层析法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。29. 亲和层析(affinity chromatography)：将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液， 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，如酶与底物的识别结合、受体与配体的识别结合、抗体与抗原的识别结合，这种结合既是特异的，又是可逆的， 改变条件可以使这种结合解除。生物分子间的这种结合能力称为亲和力。亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质分离纯化方法。30.基因工程(gene engineering)：基因工程是以分子遗传学为理论基础， 以分子生物学和微生物学的现代方法为手段， 将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图， 在体外构建杂种DNA分子， 然后导入活细胞， 以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、 生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。31. 基因克隆(gene cloning)：是70年代发展起来的一项具有革命性的研究技术，可概括为：分、切、连、转、选。“分”是指分离制备合格的待操作的DNA，包括作为运载体的DNA和欲克隆的目的DNA；“切”是指用序列特异的限制性内切酶切开载体DNA，或者切出目的基因；“连”是指用DNA连接酶将目的DNA同载体DNA连接起来，形成重组的DNA分子；“转”是指通过特殊的方法将重组的DNA分子送入宿主细胞中进行复制和扩增；“选”则是从宿主群体中挑选出携带有重组DNA分子的个体。基因工程技术的两个最基本的特点是分子水平上的操作和细胞水平上的表达，而分子水平上的操作即是体外重组的过程，实际上是利用工具酶对DNA分子进行外科手术。 32. 基因敲除(gene knockout)：是指一个有功能的基因通过基因工程方法完全被剔除的人工突变技术。人为的将小鼠的某一种有功能的基因完全缺失的技术就称为基因敲除技术。这项技术是Marrio Capecchi于八十年代末在Utah大学发展起来的。实验的动物通常是小鼠，被敲除了功能基因的小鼠就称为敲除小鼠(knockout mice)。基因敲除技术已成功地应用于几种遗传病的研究，还可用于研究特定基因的细胞生物学活性以及研究发育调控的基因作用等， 因此是研究基因功能的一项非常有用的技术。基因敲除是一套组合技术，包括基因重组、细胞分离培养、转基因等 33.核体（karyoplast）：细胞经细胞松弛素处理后，排出带有少量细胞质，并包有一层细胞膜的细胞核。34.胞质体（cytoplast）:细胞经处理排核后剩下的包有细胞膜的细胞质部分。35.细胞的培养(cell culture)：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体取下的细胞，并使之生存和生长的技术。36.贴壁生长：分散的细胞悬液在培养瓶中很快（几十分钟至数小时内）就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。37.接触抑制（contact inhibition）：正常细胞生长到彼此相互接触，其运动和分裂活动都将停止的现象。38.群体培养 (mass culture) ：将含有一定数量的细胞悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合后生成单层细胞。39.克隆培养 (clonal culture) ：将高度稀释的细胞悬液置于游离的培养瓶中，细胞贴壁后彼此距离较远，经过生长增殖，每个细胞形成一个生长集落。40.原代培养 (primary culture) ：直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行的培养。有人将1-10代的细胞培养称为原代培养。41.继代培养 (subculture) ：在体外培养的条件下对细胞进行的持续传代培养42.单层细胞培养：分散成原球形的细胞一经贴壁就迅速铺展并开始有丝分裂，逐渐形成致密的细胞单层，这种培养方式称单层细胞培养。43.转鼓培养：为制取细胞产品而设计的方法，使用大容量的圆培养瓶，在培养过程中不断的转动，使培养细胞始终处于悬浮状态之中而不贴壁。44.原代细胞（primary cell）：从机体取出后立即培养的细胞。45.传代细胞（subculture cell）:适应在体外培养的条件下持续传代培养的细胞。46.细胞株（cell strain):通过选择法或克隆的方法从原代培养的细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，在培养过程中其特征始终保持不变。47.细胞系（cell line）:在培养条件下可进行无限分裂的细胞群。48.转化：正常细胞在某种因子的作用下发生突变而具有癌性的细胞。培养的细胞类型：原代细胞和继代细胞；细胞株和细胞系；细胞培养物的名称：克隆、外植体和愈伤组织49.克隆 (clone) ：由单一祖先经过无性繁殖产生的遗传性一致的后代群体。50.外植体（explant）:取自成体或胚胎，用于体外培养的组织和细胞群二、填空题1. 物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，第一种是自发荧光，如叶绿素、血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光；第二种是诱发荧光，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光。2.写出一种细胞融合的物理性方法电融合技术，举出化学融合所需的两种化学物质 灭活的仙台病毒和聚乙二醇，PEG。 3.染色体DNA的三种功能元件为着丝粒，端粒和复制起点。异染色质可分为组成型异染色质和兼型异染色质。4. 定量的细胞化学分析技术有显微分光光度分析、流式细胞仪等。写出两种特殊显微镜的名称，如荧光显微镜、扫描隧道显微镜、相差显微镜。5.自发荧光是指生物体内有些物质受激发光照射后可直接发出的荧光。写出五种自身荧光物质：FAD、FMN、NADH、木质素、卟啉。三.选择题1.通过选择性或克隆形式从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志的细胞群体称作 B 。A. Cell Line B. Cell Strain C. Cell Library D. Others2. 研究DNA在细胞中的代谢, 常用的同位素标记物有 D 。A14 C-戊糖 B32 P-磷酸 C15 N-鸟嘌呤 D. 3 H-胸腺嘧啶3.细胞融合的诱导剂主要有 A 。A. PEG(聚乙二醇) B. TMV(烟草花叶病)病毒 C. 亚硝酸-诱变剂 D. PHV(植物凝集素)-外围培养4.细胞培养技术 B 。A. 可用来研究细胞生理和细胞各种功能B. 首先用胰蛋白酶将动物或植物组织进行酶解, 游离出单细胞再进行培养C. 用小牛血清配制的培养基进行培养D. 培养过程可用普通光学显微镜进行观察5.在杂交瘤技术中, B 。A. B淋巴细胞与B淋巴瘤细胞融合, 目的是抑制瘤细胞无限生长 B. 在培养基中加入氨基喋呤可选出杂交细胞C. 氨基喋呤可抑制瘤细胞的蛋白质合成 D. 氨基喋呤能导致B淋巴细胞无限分裂6.光镜同电镜比较, 下列各项中, D 是不正确的。A. 电镜用的是电子束, 而不是可见光 B. 电镜样品要在真空中观察, 而不是暴露在空气中C. 电镜和光镜的样品都需要用化学染料染色 D. 用于电镜的标本要彻底脱水, 光镜则不必7.在动物细胞培养过程中要用 C 来进行观察。A. 相差显微镜 B. 荧光显微镜 C. 倒置显微镜 D. 普通光学显微镜8.在递增细胞匀浆液的离心转速过程中最先沉淀下来的是 D 。A. 核糖体 B. 线粒体 C. 未破碎的 D. 微粒体细胞核9.单个植物细胞在体外经过诱导并培养成为完整的植物小植株的实验最好地证明了 D 。A.细胞是构成有机体的基本单位 B.一切有机体均来自于细胞C.细胞是有机体生长发育的基础 D.细胞具有遗传的全能性10.显微镜的分辨率与下列哪一项无关? D A. 光源的波长 B. 物镜的镜口角 C. 介质的折射率n D. 放大倍数 四、问答题 1动物体细胞克隆有什么意义? 答：动物体细胞克隆技术的成功对生命科学的发展具有重要的推动作用，不仅证明了动物的体细胞具有全能性， 而且有巨大的应用前景。例如结合转基因技术生产药物。现在很多药物如胰岛素、生长激素、表皮生长因子等都是动物细胞体内正常的代谢物，某些病人由于产生这些物质的功能发生缺陷，导致了相应疾病的发生，目前的治疗方法就是给这些病人注射这类药物。由于这类药物本身是来自动物的某些脏器，制备这种药物就需要大量的动物提供脏器，因此成本就很高，如果通过转基因技术把相应的基因转入到哺乳动物，让动物的乳汁生产具有疗效的蛋白质就会降低成本，再结合动物体细胞克隆技术，将这种转基因动物大量无性繁殖克隆，就可以大大提高产量，大幅度降低成本，同时也保证了所转基因的稳定。该项技术也可以生产供动物本身和人类器官移植的动物， 解决器官捐赠长期缺乏的问题。另外，动物体细胞克隆技术在基因结构和功能、基因治疗、遗传病及人类衰老等的研究方面都具有巨大的潜力。2什么是细胞培养， 应注意哪些问题? 答：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中最有价值的技术，通过细胞培养可以获得大量的细胞，也可通过细胞培养研究细胞的运动、细胞的信号传导、细胞的合成代谢等。细胞培养的突出特点是在离体条件下观察和研究细胞生命活动的规律。培养中的细胞不受体内复杂环境的影响，人为改变培养条件(如物理、化学、生物等外界因素的变化)即可进一步观察细胞在单因素或多因素的影响下的生理功能变化。然而，细胞在体外环境的局限性，又使细胞的形态与功能不能与体内的同类细胞完全等同。体外培养细胞必需注意三个环节物质营养、生存环境和废物的排除。体外培养细胞所需的营养是由培养基提供的。培养基通常含有细胞生长所需的氨基酸、维生素和微量元素。一般培养细胞所用的培养基是合成培养基，它含有细胞生长必需的营养成分，但是在使用合成培养基时需要添加一些天然成分，其中最重要的是血清，以牛血清为主。这是因为血清中含有多种促细胞生长因子和一些生物活性物质。由于血清中含有一些不明成分，对于特殊目的细胞培养是不利的。为此，研究人员正在探索无血清培养细胞的条件，并已经取得一些进展。由于机体内的细胞生长通常需要不同的细胞因子进行调节，所以在无血清培养时仍然需要添加必要的因子，包括：促细胞生长因子(如EGF)、促贴附物(如层粘连蛋白)和其它活性物质(如转铁蛋白)。无血清培养排除了有血清培养时血清中不明因素的干扰，使实验结果更加可靠。体外细胞培养必需模拟体内细胞生长的环境。环境因素主要是指无菌环境、合适的温度、一定的渗透压和气体环境。气体主要有两种O2和CO2。后者对于维持细胞培养液的酸碱度十分重要。活体内生长的细胞所产生的代谢物和废物通过一定的系统进行利用和排除。体外培养细胞产生的代谢物和废物积累在培养液中，所以定期更换培养液，对于体外细胞培养也是至关重要的。3什么是细胞系和细胞株? 答：原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell line)， 由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限， 可称为有限细胞系(finite cell line)， 如可以连续培养， 则称为连续细胞系(continuous cell line)， 培养50代以上并无限培养下去。从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群称细胞株(cell strain)。所以细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲，可培养到40-50代。4何谓乳腺生物反应器， 它的出现有什么意义? 答：乳腺生物反应器是根据细胞生物学中蛋白质合成与分选的机理，结合基因工程技术、动物转基因技术等，利用动物的乳腺分泌某些具有重要价值的基因产物。乳腺生物反应器是一项综合技术，发展乳腺生物反应器不仅需要基因工程技术，也需要动物胚胎技术，转基因技术，蛋白质提纯技术和常规畜牧技术。乳腺生物反应器有特殊优点。乳腺生物反应器生产药品，基本上是一个畜牧业过程。表3-1电镜与光镜的比较利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差要求真空不要求真空要求真空1.33x10-51.33x10-3Pa玻璃透镜玻璃透镜电磁透镜可见光（400-700） 紫外光（约200nm)电子束（0.01-0.9）200nm100nmLMFMEM成像原理真空透镜光源分辨本领显微镜问答：（1）、电镜为何要求一定的真空度？答：如果含有很多的其它分子，会与电子发生碰撞，使电子散射，引起眩光，影响成像质量；碰撞也会使电子束不稳定，产生闪烁现象；灼热的灯丝遇气体也易腐蚀和断裂。（2）、电镜为何要有记录系统？电子成像。肉眼无法观察带有“样品信息”的电子束第四章 细胞质膜一、名词解释1. 脂质体(liposome): 是根据磷脂分子可在水相中形成稳定的脂双层膜的趋势而制备的人工膜，脂质体中可以裹入不同的药物或酶等具有特殊功能的生物大分子。2. 流体镶嵌模型(fluid mosaic model); 主要强调：1.膜的流动性，膜脂和膜蛋白均可侧向运动 2.膜蛋白分布的不对称性3. 细胞膜(cell membrane): 又称质膜，是指围绕在细胞最外层，由脂质和蛋白质组成的生物膜。4. 去垢剂(detergent): 是一端亲水一端疏水的两性小分子，是分离与研究膜蛋白的常用试剂。5. 膜内在蛋白(integral proteins): 又称整合蛋白，多数为跨膜蛋白，与膜紧密结合。6. 细胞外被(cell coat): 又称糖萼，曾用来指细胞膜外表面覆盖的一层粘多糖基质，实际上细胞外被中的糖与细胞膜的蛋白分子或脂质分子是共价结合的,形成糖蛋白和糖脂，所以，细胞外被应是细胞膜的正常结构组分，它不仅对膜蛋白起保护作用，而且在细胞识别中起重要作用。7. 细胞外基质(extracellular matrix): 是指分布于细胞外空间,由细胞分泌的蛋白和多糖所构成的网络结构。细胞外基质将细胞粘连在一起构成组织，同时，提供一个细胞外网架，在组织中或组织之间起支持作用。8. 透明质酸(hyaluronic acid): 是一种重要的糖胺聚糖，是增殖细胞和迁移细胞胞外基质的主要成分，尤其在胚胎组织中。9. 细胞连接(cell junctions): 是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞质膜相互联系，协同作用的重要组织方式。10. 细胞粘着:11. 整联蛋白家族（integrin）：在细胞识别的基础上，同类细胞发生聚集，形成细胞团或组织的过程。12. 连接子（connexon）: 构成间隙连接的基本单位。13. 免疫球蛋白超家族的CAM（ Igsuperfamily）: 分子结构中具有与免疫球蛋白类似的结构域的CAM超家族。二、选择题1. 膜脂的主要成分包括 D 。磷脂 糖脂 胆固醇 中性脂质A. B. C. D.2. 膜脂分子有4种运动方式，其中生物学意义最重要的是 .A 。A.侧向运动 B.脂分子围绕轴心的自旋运动 C.脂分子尾部的摆动 D.翻转运动3. 与细胞质基质接触的膜面称为质膜的 B 。 A.ES B.PS C.EF D.PF4. 细胞外被又称 .D 。A.糖被 B.细胞膜 C.糖脂 D.糖萼5. A 是胞外基质最基本成分之一。A.胶原 B.糖胺聚糖 C.纤连蛋白 D.弹性蛋白6. 原胶原是由（ C ）条多肽链盘旋成的三股螺旋结构。A.一 B.二 C.三 D.四7. 胶原纤维具有很高的抗张力强度，特别是（A ）型胶原。A. B. C. D.8. C 是各种动物胚胎及成体组织的基膜的主要结构组分之一。A.胶原 B.纤连蛋白 C.层粘连蛋白 D.弹性蛋白9 C 能促进细胞迁移。A.弹性蛋白 B.层粘连蛋白 C.纤连蛋白 D.胶原10. 个体发生中出现最早的细胞外基质蛋白是 B 。A.胶原 B.层粘连蛋白 C.纤连蛋白 D.蛋白聚糖11. C 可以与多种生长因子结合，作为胞外激素富集与贮存库。A.胶原 B.层粘连蛋白 C.蛋白聚糖 D.纤连蛋白12. 紧密连接存在于 C 。A.结缔组织 B.肌肉细胞间 C.上皮细胞间 D.神经细胞间13. 能够封闭细胞间隙的连接是 B 。 A.桥粒 B.紧密连接 C.半桥粒 D.缝隙连接14. 能够使细胞锚定静止又能诱导细胞运动迁移的是 D 。A.蛋白聚糖 B.层粘连蛋白 C.弹性蛋白 D.纤连蛋白15. 参与粘着斑形成的是 A 。A. 纤连蛋白 B.弹性蛋白 C.层粘连蛋白 D.胶原16. 上皮细胞与基质的连接是 B 。 A.桥粒 B.半桥粒 C.紧密连接 D.缝隙连接17. 下列物质能够通过缝隙连接的是 B 。矿物质 蛋白质 氨基酸 维生素 多糖A. B. C. D.18. 影响缝隙连接通道开闭的因素有 D 。pH Ca2+浓度 膜电位 细胞受损 连接蛋白变构A. B. C. D.全部19. 依赖缝隙连接完成的生命活动有 C 。神经元间的电突触处冲动传导细胞吞噬心肌收缩细胞分裂小肠平滑肌蠕动 A. B. C. D.全部20. 体外培养的成纤维细胞的贴壁生长与 D 有关。 A桥粒 B.半桥粒 C.粘着带 D.粘着斑21. 白细胞是通过 B 粘着因子的作用滚动式地集中到炎症发生部位。 A.钙粘素 B.选择素 C.免疫球蛋白超家族类 D.整联蛋白22. 细胞粘着中完全不依赖于Ca2+的是 C 。 A.钙粘素 B.选择素 C.免疫球蛋白超家族类 D.整联蛋白三、判断题1. 膜周边蛋白与生物膜结合得比膜内在蛋白更紧密。 （）2. Triton X-100常用来使细胞膜的通透性增加，它是离子型去垢剂。 （）3. 通常细胞不直接与型胶原或蛋白聚糖结合，而是通过层粘连蛋白将细胞锚定于基膜上。 （）4. 层粘连蛋白是高分子量糖蛋白。 （）5. 纤连蛋白的主要功能是介导细胞粘着 。 （）6. 层粘连蛋白促进细胞迁移。 （）7. 弹性纤维与胶原纤维共同存在，分别赋予组织以弹性及抗张性。 （）8. 弹性蛋白是高度亲水的非糖基化蛋。 （）9. 植物细胞壁也含有少量糖蛋白。 （）四、填空题 1. 生物膜的基本特征是流动性_、不对称性_。2. 跨膜结构域含较多氨基酸残基的膜内在蛋白的二级结构为螺旋，它也可能是多数跨膜蛋白的共同特征。3. 膜蛋白的功能有运输_、识别_、酶活性_、细胞连接、信号转导_与骨架和胞外基质的连接。4. 常用来分离研究膜蛋白，使细胞膜崩解的试剂是去垢剂。5. 与人红细胞表面ABO血型相关的膜脂是糖脂。6. 影响膜脂流动性的因素有脂肪酸长度、脂肪酸饱和度、温度、胆固醇含量。7. 胶原是动物体内含量最丰富的蛋白，约占人体蛋白总量的30%以上。8. 胶原是细胞外基质中最主要的水不溶性_纤维蛋白。9. 胶原纤维的基本结构单位是原胶原。10. 糖胺聚糖是由重复的二糖单位构成的长链多糖，其二糖单位是氨基己糖和_糖醛酸。11. 糖胺聚糖可分为透明质酸、6硫酸软素、4-硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素、肝素和硫酸角质素等.。12. 层粘连蛋白在胚胎发展及组织分化中具有重要作用。13. 纤连蛋白的膜蛋白受体即为整联蛋白家族成员之一。14. 在胶原纤维内部,原胶原蛋白分子呈1/4交替平行排列。15. 细胞直接根据其功能划分为封闭连接、锚定连接和通讯连接3种类型，其中有细胞骨架纤维参与的属于锚定连接。16. 除极少数特化细胞体，高等植物细胞之间通过胞间连丝相互连接，完成细胞间的通讯联络。17. 化学突触是存在于可兴奋细胞之间的细胞连接方式。18. 通讯连接的方式有间隙连接、胞间连丝和化学突触。19. 由紧密连接的嵴线中分离出的两类蛋白分别是封闭蛋白(occludin)和claudins。20. 构成间隙连接的基本单位是连接子_。21. 整联蛋白识别的主要部位是配体上的RGD结构，它是由Arg、Gly和Asp三个氨基酸组成的。五、问答题1. 简要叙述用荧光抗体免疫标记实验和光脱色恢复技术证明膜蛋白流动性的原理和方法?1. 荧光抗体免疫标记实验是分别用抗鼠细胞膜蛋白的荧光抗体和抗人细胞膜蛋白的荧光抗体标记小鼠和人的细胞表面，使这两种细胞融合，观察不同颜色的荧光在融合细胞表面的扩散和分布。滤去红色荧光或绿色荧光则显示荧光均匀地分布在融合细胞表面。用荧光素标记膜蛋白或膜脂，然后用激光束照射细胞表面某一区域，使被照射区的荧光淬灭变暗。由于膜的流动性，淬灭区域的亮度逐渐增加，最后恢复到与周围的荧光强度相等。2. 膜脂的不对称性指什么? 膜蛋白的不对称性又是指的什么?2. 膜脂的不对称性是指同一种膜脂分子在膜的脂双层中呈不均匀分布； 膜蛋白的不对称性是指每种膜蛋白分子在细胞膜上都具有明确的方向性。3. 胶原的功能是什么?3. 胶原在细胞外基质中含量最高，刚性及抗张力强度最大，构成细胞外基质的骨架结构，细胞外基质中的其他成分通过与胶原结合形成结构与功能的复合体。胶原可被胶原酶特异降解，而渗入到胞外基质信号传递的调控网络中。4. 蛋白聚糖的组成及功能是什么?4. 蛋白聚糖见于所有结缔组织和细胞外基质及许多细胞表面，由糖胺聚糖与核心蛋白的丝氨酸残基共价连接形成的巨分子，蛋白聚糖可与成纤维细胞生长因子，转化生长因子（TGF）等多种生长因子结合，因而可视为细胞外的激素富集与储存库，有利于激素分子进一步与细胞表面受体结合，有效完成信号的传导。5. 试述紧密连接的作用。5. 紧密连接可阻止可溶性物质从上皮细胞层一端扩散到另一端，因此起到重要的封闭作用；同时还将上皮细胞的游离端与基底面细胞膜上的膜蛋白相互隔离，以行使其各自不同的膜功能，因此紧密连接还具有隔离和一定的支持功能。6. 比较桥粒与半桥粒的异同。6. 桥粒存在于两相邻细胞之间,细胞与细胞间两侧对称出现加厚成板状的致密斑，上附中间纤维，通过Ca2+粘素连接。桥粒连接使整个上皮层的中等纤维形成了一个完整的网络，增加了整体的强度。半桥粒在形态上与桥粒类似，但功能和化学组成不同。它通过细胞膜上的膜蛋白整联蛋白将上皮细胞固着在基底膜上，在半桥粒中，中间纤维不是穿过而是终止于半桥粒的致密斑内。7. 间隙连接的结构如何？有什么功能？7. 间隙连接分布广泛，几乎所有动物组织中均存在间隙连接。间隙连接为点阵排列的颗粒，基本结构单位为连接子，每个连接子由6个相同或相似的跨膜蛋白亚单位connexin环绕，中心形成一个直径约1.5nm的孔道。相邻细胞膜上的两个连接子对接便形成了一个间隙连接单位。间隙连接的功能有：细胞粘着，细胞彼此连接在一起；细胞通讯，间隙连接在物质的通道具有选择性，形成细胞间的代谢偶联，同时连接处的电阻抗很低，形成细胞间的电偶联可以使细胞群的活动同步化。8. 简述细胞粘着因子与细胞外基质的联系与区别8. 细胞粘着因子主要是位于细胞膜上的糖蛋白，细胞外基质主要是高分子量的蛋白质；两者的作用相似，共同参与细胞的连接，通常细胞不直接与型胶原或蛋白聚糖结合，而是通过层粘着蛋白将细胞锚定在基膜上，层粘着蛋白再通过RGD序列与粘着因子结合。9. 详述细胞膜的流动性以及非对称性的特点。9. 膜是一种动态的结构，膜的流动性概念是指膜内部的脂和蛋白质分子的运动性。质膜内外两层的组分和功能的差异，称为膜的不对称性。 10. 叙述细胞膜的主要功能。10. 细胞膜作为细胞的内外边界，结构复