蛋白质的理化性质.ppt

上节课内容回顾 1 蛋白质分子结构一级结构二级结构三级结构四级结构2 蛋白质结构和功能的关系 第三节蛋白质的理化性质 一 蛋白质的两性解离与等电点 1 蛋白质是两性电解质一 蛋白质分子中可解离的基团多肽两端游离的 氨基和 羧基多肽侧链R上解离的基团二 决定蛋白质解离成正负离子的因素蛋白质所含酸性和碱性基团的数目蛋白质所在溶液的PH值 2 蛋白质的等电点 pI 当蛋白质溶液处于某一pH时 蛋白质解离成正 负离子的趋势相等 即成为兼性离子 净电荷为零 此时溶液的pH称为蛋白质的等电点 练习 下列哪种蛋白质在pH5 0的溶液中带负电荷 A pI为5 5的蛋白质B pI为4 0的蛋白质C pI为7 0的蛋白质D pI为5 0的蛋白质 体内大多数蛋白质的等电点在pH5 0左右 因而在生理条件下以阴离子形式存在 3 电泳定义 带电粒子在电场中向电性相反的电极移动的现象 蛋白质在带电场中泳动的速度和方向与其所带电荷的性质 数量及分子的大小 形状有关 带电荷多 分子小的泳动速度较快 反之则泳动较慢 从而达到分离蛋白质的目的 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白分为清蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白 A 染色后显示的蛋白质区带B 光密度扫描定量分析 正常 肝硬化 二 蛋白质的胶体性质 1 蛋白质有胶体性质蛋白质是生物大分子 分子量在1万 10万kD 千道尔顿 之间 分子直径在胶体颗粒的范围 1 100nm 因此 蛋白质具有胶体的性质 2 蛋白质亲水胶体稳定的因素蛋白质分子表面的水化膜和同种电荷 去掉两个稳定因素 则蛋白质从溶液中析出而产生沉淀 练习 盐析法分离蛋白质的原理是 A 破坏蛋白质的一级结构B 破坏水化膜及中和电荷C 破坏蛋白质的二级结构D 使蛋白质变性沉淀 3 蛋白质胶体性质的应用透析 用于分离纯化蛋白质超速离心 用于蛋白质的分离纯化及分子量的测定 沉降系数 sedimentationcoefficient S 指单位力场中的沉降速度沉降系数与物质的分子量的大小 形状 密度及溶剂的密度高低有关 分子量越大 颗粒越紧密 沉降系数越大 变性的概念在某些物理或化学因素的作用下 蛋白质特定的空间构象被破坏 从而导致其理化性质改变和生物活性丧失 称为蛋白质的变性 变性的实质二硫键或非共价键断裂 空间结构破坏 不涉及一级结构的改变 三 蛋白质的变性 沉淀和凝固 变性蛋白质的特点A 生物学活性丧失B 溶解度降低 易于沉淀 变性不一定沉淀 C 黏度增加D 结晶能力消失E 易被蛋白酶水解 引起变性的因素物理因素高温 高压 紫外线 电离辐射 超声波等 化学因素强酸 强碱 有机溶剂 尿素 重金属盐等 练习 变性蛋白质的主要特点是 A 黏度下降B 溶解度增加C 不易被蛋白酶水解D 生物学活性丧失 蛋白质变性的应用应用变性的因素进行消毒 灭菌 保存生物制剂则要防止蛋白质变性 蛋白质的复性大多数蛋白质变性后 空间构象严重破坏 不能恢复其天然状态 称为不可逆性变性 若蛋白质变性程度较轻 去除变性因素 有些可恢复其天然构象和生物活性 称为蛋白质的复性 核糖核酸酶的变性与复性示意图 核糖核酸酶的变性过程 五 变性与复性 蛋白质沉淀 概念蛋白质从溶液中析出的现象称为沉淀 方法盐析法 有机溶剂的沉淀 重金属盐沉淀 生物碱试剂沉淀 变性的蛋白质易于沉淀 但沉淀的蛋白质并不一定都变性 如盐析 练习 盐析法分离蛋白质的原理是 A 破坏蛋白质的一级结构B 破坏水化膜及中和电荷C 破坏蛋白质的二级结构D 使蛋白质变性沉淀 练习 使蛋白质沉淀但不变性的方法有 A 中性盐沉淀蛋白质B 酸沉淀蛋白质C 乙醇沉淀蛋白质D 重金属盐沉淀蛋白质 蛋白质的凝固 加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固 此凝块不溶于强酸或强碱中 凝固实际上是蛋白质变性后进一步发展的不可逆的结果 因此 凡凝固的蛋白质一定发生变性 变性和沉淀的区别 变性不一定沉淀沉淀也不一定变性凝固一定变性 四 蛋白质的紫外吸收性质 蛋白质分子中含有酪氨酸和色氨酸等残基 具有紫外吸收能力 在280nm处有最大吸收峰 此特性常用于蛋白质含量的测定 蛋白质的紫外吸收 五 蛋白质的呈色反应 一 双缩脲反应 含有多个肽键的蛋白质和肽在碱性溶液中加热可与Cu离子作用生成紫红色内络盐 可用于蛋白质 多肽的定量测定 氨基酸无此反应 可用于检查蛋白质的水解程度 双缩脲反应 紫红色络合物 碱性溶液 Cu2 五 蛋白质的呈色反应 二 茚三酮反应三 Folin 酚试剂反应 练习 六 简答题1 何谓蛋白质的变性 2 影响变性的理化因素有哪些 请举例说明 ThankYou 内容总结 蛋白质的理化性质两性解离 电泳 胶体性质 透析 离心 变性 复性 沉淀 凝固紫外吸收呈色反应 双缩脲 茚三酮Folin 酚 今天就到这里了