病理切片的特殊染色方法.doc

一、常用胶原纤维染色方法1.Van Gieson苦味酸和酸性品红法【染色方法】（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片；（2）组织切片脱蜡至水；（3）用Van Gieson液染15分钟；（4）倾去染液，直接用95乙醇分化和脱水；（5）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。2.Masson氏结缔组织三合染色法【染色方法】（1）石蜡切片厚6m，脱蜡至水；（2）0.2冰醋酸水溶液浸泡片刻；（3）Masson氏染色液中5分钟或更长时间；（4）0.2冰醋酸水溶液浸泡片刻；（5）5磷钨酸水溶液23分钟，再入0.2冰醋酸水溶液浸洗（6）投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间；（7）再入0.2冰醋酸水溶液浸洗片刻；（8）脱水、透明和封固。【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。二、常用网状纤维染色方法【染色方法】（1）石蜡切片、脱蜡至水；（2）0.25高锰酸钾液3分钟；（3）蒸馏水洗2次；（4）1草酸漂白即可；（5）蒸馏水洗2次；（6）2.5铁明矾水溶液媒染510分钟，蒸馏水洗多次；（7）二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次；（8）10甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次；（9）0.2氯化金液调色12分钟，蒸馏水洗3次；（10）5硫代硫酸钠固定5分钟；（11）蒸馏水洗，需要时复染；（12）水洗、脱水、透明和封固。【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。三、常用弹力纤维染色方法显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法【染色方法】（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水；（2）切片入70乙醇中洗2分钟；（3）将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.52小时；（4）直接入95乙醇中分色数秒钟；（5）浸入蒸馏水洗2分钟；（6）用丽春红S液滴染切片5分钟；（7）直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次；（8）将切片在空气中或冷风干燥；（9）二甲苯透明，中性树胶封固。【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。四、脂肪染色【染色方法】（1）冰冻切片厚度815m；（2）Harris苏木素，染约1分钟；（3）自来水洗后，用0.5盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止；（4）蒸馏水洗后移入70乙醇内浸洗一下；（5）浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间（如果置于56温箱中可适当缩短时间）；（6）在70乙醇分化数秒钟；（7）待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干；（8）及时用明胶甘油封片。【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。五、糖原染色高碘酸Schiff（Periodic acid Schiff，PAS）染色法【染色方法】（1）切片脱蜡至蒸馏水；（2）浸入高碘酸氧化液中1020分钟；（3）蒸馏水洗2次；（4）Schiff液染色1030分钟；（5）流水冲洗5分钟；（6）用苏木素染细胞核35分钟；（7）在盐酸酒精中分化，自来水洗至细胞核变蓝为止；（8）脱水、透明和封固。【结果】糖原和粘蛋白呈紫红色，细胞核染蓝色，霉菌也呈紫红色等。六、粘液物质（粘多糖）染色法【染色方法】（1）切片入二甲苯，后递次向下直到入水；（2）3冰醋酸溶液3分钟；（3）在奥辛兰溶液中染5分钟；（4）入3冰醋酸3分钟，蒸馏水洗（3次）；（5）用1过碘酸处理10分钟，蒸馏水洗；（6）入Schiff液1030分钟；（7）流动自来水洗10分钟；（8）逐级酒精脱水，二甲苯透明；（9）中性树胶封固。【结果】酸性粘多糖染兰色；中性粘蛋白染品红色；中性和酸性粘蛋白混合物染紫色。七、横纹肌染色Mallory磷钨酸苏木素染色法PTAH【染色方法】（1）切片脱蜡至水；（2）在酸性高锰酸钾液中氧化510分钟；（3）自来水充分洗，蒸馏水洗2次；（4）用1草酸液漂白2分钟；（5）自来水洗，蒸馏水洗2次；（6）浸入MalloryPTAH液中1248小时；（7）直接用95乙醇分化；（8）无水乙醇急速脱水，二甲苯透明和树胶封固。【结果】胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维素、横纹肌等均呈蓝色；胶质纤维、网状纤维、软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹力纤维有时被染成微紫色；有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。八、淀粉染色【染色方法】（1）石蜡切片，脱蜡至水；（2）在1刚果红水溶液中1小时或更长时间；（3）投入饱和碳酸锂水溶液中15秒钟；（4）用80酒精分化，直至无多余燃料溜下为止；（5）水洗后用苏木素进行核染色；（6）等干后进行二甲苯透明和树胶封固。【结果】淀粉样物质呈红色，细胞核呈兰色。九、幽门螺杆菌染色【染色方法】（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水；（2）0.2molL醋酸缓冲液洗2次；（3）将切片置入1硝酸银液内1小时左右（温箱56）；（4）直接把切片取出，立即浸入显影液内23分钟；（5）将切片浸入56蒸馏水中洗12分钟；（6）蒸馏水洗1次；（7）无水乙醇脱水，二甲苯透明和中性树胶封固。【结果】胃幽门弯曲菌呈棕黑色或黑色，背景呈淡黄色。十、尼氏小体【染色方法】（1）石蜡切片厚6m，脱蜡至水；（2）用1甲苯胺蓝水溶液置于5060温箱内浸染2040分钟；（3）蒸馏水稍洗；（4）95乙醇迅速分化；（5）无水乙醇脱水，二甲笨透明，中性树胶封固。【结果】尼氏小体紫蓝色，胞核棕红色。十一、含铁血黄素染色法【染色方法】（1）石蜡切片厚6m，脱蜡至水；（2）投入新鲜配置的20盐酸和10亚铁氰化钾等量混合液（用前过滤）中30分钟，必要时可延长时间；（3）蒸馏水洗；（4）在0.5的碱性品红（溶剂为50酒精）进行1分钟对比染色；（5）在95酒精中分化后晾干，透明，封固。【结果】含铁血黄素呈蓝色，血棕色素呈红色。十二、黑色素染色法【染色方法】（1）石蜡切片，脱蜡至水；（2）投入硝酸银染色液中，并置于暗处1218小时；（3）蒸馏水洗2分钟；（4）以0.2氯化金水溶液增色510分钟；（5）蒸馏水洗；（6）投入5硫代硫酸钠水溶液2分钟；（7）自来水洗；（8）如需复染，可用苏木素伊红染色法；（9）酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。【结果】黑色素呈黑色。