化学诱导玉米单倍体技术规程

DB23/T XXXX-XX-XX实施黑龙江省市场监督管理局发布XXXX-XX-XX发布化学诱导玉米单倍体技术规程DB23/T XXXXXXXXDB23黑龙江省地方标准ICS 65.020.20B 052DB23/TXXXX-XXXX前言本标准依据GB/T 1.1-2009编写规则起草。本标准由黑龙江省农业农村厅提出。本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：黑龙江省农业科学院耕作栽培研究所、黑龙江荣玉农业科技有限公司。本标准主要起草人：宫秀杰、来永才、钱春荣、于洋、马宝新、马延华、李梁、郝玉波、李昕、王俊强、王秋菊、姜辉、何长安、姜宇博、吕国依、葛选良、杨忠良、马军韬、赵杨、王阳、童淑媛、杜振宇、孙丹、侯国强、孟凡迪。4化学诱导玉米单倍体技术规程1范围本标准规定了化学诱导玉米单倍体技术的术语和定义、材料和备品、诱导处理、诱导后代种植和田间调查、诱导率统计及注意事项。本标准适用于化学诱导玉米单倍体技术。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。DB23/T 017 玉米生产技术规程DB62/T 1060 农作物种子生产技术规程玉米自交系3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1Pa1代化学诱导孤雌生殖获得的籽粒及其生长植株（不包括后代籽粒）。3.2Pa2代Pa1经自交结实后的籽粒及生长植株（不包含后代籽粒）。4材料和备品4.1实验材料和备品准备500ml烧杯、玻璃棒、100ml容量瓶、25ml量筒、封口瓶、废液缸、试剂匙、移液管、0.001g天平、猴头喷雾器、蒸馏水、无水乙醇（EA）。剪刀、胶皮手套、一次性口罩、眼罩、白大褂、硫酸纸、小硫酸纸袋、大硫酸纸袋大头针、标签、记号笔、棉花、镊子、网袋。4.2诱导材料准备4.2.1诱导材料选择符合育种目标的玉米优良杂合种质或遗传背景广泛的群体材料。4.2.2化学试剂诱导试剂包括：二甲基亚砜 (DMSO) 、马来酰肼 (MH) 、秋水仙碱 (Col) 、甲醇（MT）。配制方法：取70mgMH加入烧杯，再加入70mlMT，充分搅拌。待MH完全溶解后，加入0.1mlDMSO、1.0gCol和500ml蒸馏水，搅拌，转移入1000ml容量瓶中，定容至1000ml。放置安全处待用。4.2.3诱导材料种植及田间管理选择地势平坦、肥水一致、排灌方便地块，每份被诱导材料种植不少于100株。田间管理参照DB23/T 017执行。5诱导处理5.1诱导时期和诱导方法5.1.1诱导时期诱导材料雌穗吐丝3cm5cm时。5.1.2诱导方法诱导材料雌穗吐丝前，用硫酸纸袋将雌穗罩上，去除雌穗。诱导处理时间选择在清晨4:00-7:30，操作人员须用75%乙醇将手和剪刀消毒，用剪刀将被诱导材料雌穗顶端剪平，然后用手再修出一个凹槽，用猴头喷雾器喷施化学药剂，每穗喷施化学药剂2ml，喷施后迅速罩上硫酸纸袋，然后再罩上一个大硫酸纸袋，用大头针固定，挂标签，标记喷施药剂日期。间隔3天后再喷施一次，喷施方法同上。记录化学药剂处理的果穗数量。5.2诱导材料的收获籽粒成熟及时收获，单穗分装编号，待干燥后，脱粒。记录每个果穗雌穗小花数和结实数。6诱导后代种植和田间调查6.1Pa1种植和田间调查6.1.1Pa1种植选择地势平坦、肥水均一、病虫害发生低、排灌方便地块种植。收获的Pa1种子全部播种，人工单粒播种，播深3cm5cm，播后镇压，单株插牌标记。6.1.2Pa1田间管理采用人工除草，禁止使用化学药剂除草。其它田间管理方法参照DB23/T 017执行。6.1.3Pa1田间调查6.1.3.1Pa1苗期调查调查未出苗、白化苗和早夭幼苗数量。6.1.3.2Pa1花期调查调查雄穗育性、雌穗育性和雌雄开花间隔时间。6.1.4Pa1自交授粉雌穗吐丝前用硫酸纸袋将雌穗罩上，对雌雄穗外观正常、花期相遇的植株进行自交授粉。授粉方法参照DB62/T 1060执行。6.1.5Pa1收获单穗收获并编号。6.2Pa2种植及田间调查6.2.1Pa2种植按穗行种植。穗行插牌标记，种植方式同6.1.1。6.2.2Pa2田间管理田间管理方法参照DB23/T 017执行。6.2.3Pa2田间调查6.2.3.1Pa2苗期调查调查幼苗色、茎色泽及叶色，进行一致性调查。6.2.3.2Pa2花期调查调查株型、雄穗分枝、雌穗花丝颜色、株高、穗位、抽穗期、吐丝期。6.2.4Pa2自交授粉田间所有植株均进行自交授粉，授粉方法参照DB62/T 1060执行。6.2.5Pa2收获记录成熟期，同一穗行植株表现整齐一致，所有性状无分离，即认为是纯合二倍体。同一穗行性状有分离的，则淘汰。按穗行收获，并编号。7诱导率统计M1=i=1nGii=1nEi100% 1式中：M1为诱导材料结实率；Gi为Pa1结实粒数；Ei为处理雌穗小花数；M2=i=1nRii=1nEi100% 2式中：M2为诱导材料诱导率；Ri为Pa2纯合穗行数；Ei为处理雌穗小花数；8注意事项本技术规程中化学试剂DMSO和Col具有一定的毒性作用，在配制溶液和使用化学试剂的过程中，必须带胶皮手套，带一次性口罩，穿白大褂，并将药品放置安全地方。如不慎将DMSO沾到皮肤上后，迅速用大量的水以及稀氨水清洗。