血清胆固醇的测定.ppt

血清胆固醇的测定余留海2013 11 26 血清胆固醇的测定 氧化酶法 AssaysforSerumCholesterol 一 原理二 测定方法三 参考值四 临床意义五 方法学评价六 注意事项七 小结 一 原理 血清中总胆固醇 TC 包括游离胆固醇 FC 和胆固醇酯 CE 两部分 血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸 FFA 胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢 过氧化氢在4 氨基安替比林和酚存在时 经过氧化物酶催化 反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物 胆固醇酯 H2O胆固醇 脂肪酸 CE胆固醇酯酶 胆固醇 O24 胆甾 3 烯酮 H2O2 COD 胆固醇氧化酶 H2O2 4 AAP 酚H2O 醌亚胺 红色醌类化合物 4 AAP 4 氨基氨替比林 POD 过氧化物酶 红色醌类化合物生成量与样品中胆固醇含量成正比 与经过同样处理的胆固醇校准液进行比较 即可计算出样品中胆固醇的含量 二 测定方法 1 试剂R1 胆固醇酯酶 CE 0 4KU L胆固醇氧化酶 COD 0 2KU L过氧化物酶 POD 5 0KU L4 氨基安替比林 4 APP 0 5mmol LR2 酚20 0mmol L胆酸钠2 0mmol L 二 测定方法2 加样 各管充分混匀置37水浴10分钟后 室温冷却测定 3 分光光度计测定方法 波长505nm 以空白管调零 测定标准管和样品管吸光度值 按公式计算测定结果 计算公式 Glu含量 mmol L Cs其中 Cs 5 22mmol L 三 参考值 正常 5 17mmol L轻度增高 5 17 6 47mmol L 四 临床意义 1 血清胆固醇升高 动脉粥样硬化 肾病综合征 肝细胞性黄疸 阻塞性黄疸及重症糖尿病等 血清总胆固醇是是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和 总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯 肝脏是合成和贮存的主要器官 胆固醇是合成肾上腺皮质激素 性激素 胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料 也是构成细胞膜的主要成分 其血清浓度可作为脂代谢的指标 指临床上将血总胆固醇增高称为高胆固醇血症 血清总胆固醇水平分为三级 合适范围5 72mmol L 220mg dl 边缘升高5 23 5 69mmol L 201 219mg dl 过高值 5 72mmol L 220mg dl 血清总胆固醇水平增高是导致冠心病的独立危险因素 血清总胆固醇越高 发生动脉粥样硬化的风险越大 时间也越早 血清总胆固醇每降低1 发生冠心病的危险性可减少2 但另一方面 血清总胆固醇降到多低合适 目前认为 将血清总胆固醇保持在2 1 5 2mmol L 90 200mg dl 范围内较为合适 对已有动脉粥样硬化或冠心病者 应将胆固醇降至180mg dl以下 2 血清胆固醇降低 恶性贫血 溶血性贫血 甲状腺机能亢进 急性感染 营养不良等 甲亢患者在发病期间其血清胆固醇水平往往明显低于正常值 或者属于临界值范围 当通过一段时间的有效治疗后 血清胆固醇又会逐渐回复至正常水平 其降低的机理是 甲亢导致甲状腺激素大量分泌 而甲状腺激素对脂肪的合成与分解有很强的促进作用 但是分解更明显 由此可知 当机体发生甲亢时 体内的胆固醇合成与分解排泄同时都有所增加 但分解排泄比合成更明显 而同时 甲状腺激素还通过增强腺苷环化酶 cAMP系统的影响和致敏组织对儿茶酚胺 生长素等脂肪动员激素的作用而促进脂肪溶解 所以导致血清中的胆固醇会有所降低 五 方法学评价 1 线性范围 0 05 12 9mmol L r 0 9902 精密度 CV 3 0 批间差 5 0 3 准确度 相对偏差 10 4 试剂空白吸光度 0 150 波长505nm 光径10mm 5 左旋多巴 尿酸 vitc 胆红素 谷胱甘肽等达一定浓度时可竞争过氧化氢使结果偏低6 半胱氨酸 促G生成 使结果偏高 六 注意事项 1 样品为空腹血清 血浆 肝素或EDTANa或K抗凝 2 制备血清时防止红细胞溶血 3 样品应在低温条件下运输保存 4 试剂使用后立即盖紧瓶盖 避免污染 5 避免误食和皮肤 粘膜接触 小结 谢谢