动物细胞培养和核移植技术.ppt

专题2细胞工程 动物细胞工程 动物细胞工程的技术手段 动物细胞工程技术的基础 动物细胞培养 2010年10月22日 Selina在上海拍摄新版电视剧 我和春天有个约会 时意外受伤 其背部和四肢被诊断为54 三度灼伤 Selina出院 短发亮相的她增胖5公斤已做3次植皮手术 新闻播报 2 2 1动物细胞培养和核移植技术 一 动物细胞培养 从动物机体中取出相关组织 将它们分散成单个细胞 然后放在适宜的培养基中 让这些细胞生长和增殖 一 概念 二 原理 三 过程 如何进行细胞培养 细胞增殖 有丝分裂 请同学们结合图2 16 阅读课本后 简述动物细胞培养的基本过程 定义 人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养 胰蛋白酶处理 取出组织 胚胎或幼龄动物器官 组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 转入培养瓶内培养 原代培养 细胞贴壁 接触抑制 原代培养的特点 细胞贴壁过程 细胞贴壁 在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 称为细胞贴壁 培养瓶或培养皿壁要求 表面光滑 无毒 易于贴附 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时 细胞就会停止分裂增殖 这种现象称为细胞的接触抑制 接触抑制 定义 贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理 然后分瓶继续培养 让细胞继续增殖 这个过程称传代培养 分瓶培养的过程 传代培养 结果 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞群 细胞产物 Q1 为什么传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去 细胞会随着分裂次数的增多 而逐步衰老 死亡 细胞一般传至10代左右就会衰老死亡 细胞传至10 50代 部分细胞的细胞核型可能发生变化 有少部分还发生突变向癌细胞方向发展 Q2 有无50代后继续增殖的可能 一般使用或冷冻保存的正常细胞都是10代以内的 因为细胞内保持了正常的二倍体核型 Q3 人们通常保存哪种类型的细胞 小结 动物细胞培养过程 动物组织块 幼龄动物 细胞悬液 胰蛋白酶 原代培养 单个细胞 加培养液 原理 细胞增殖 有丝分裂 结果 细胞群 细胞产物 剪碎 传代培养 部分细胞无限传代 分瓶培养 加胰蛋白酶 动物细胞培养不能最终培养成生物体 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中 根据你所学的知识 认为体培养细胞应该模拟内环境的哪些内容呢 四 动物细胞培养需要的条件 1 无菌 无毒 2 全部的营养物质 3 适宜的温度和PH值 4 必要的气体条件 36 5 0 5度 7 2 7 4 1 无菌处理 2 添加抗生素 3 更换培养液 清除代谢产物 液体合成培养基 糖 氨基酸 促生长因子 水 无机盐 微量元素 等 通常还需加入血浆 血清等天然成分 O2 CO2 95 空气 5 CO2 O2是细胞代谢必须的 CO2维持培养液的PH 五 动物细胞培养技术的应用 大规模的生产有重要价值的生物制品如病毒疫苗 干扰素 单克隆抗体 为基因工程技术提供受体细胞培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植 有毒物质的检测 细胞的生理 药理 病理研究如用于筛选抗癌药物等 为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据 获得细胞 细胞的全能性 细胞或细胞产品 新的个体或细胞产品 培养结果 或细胞产物 快速繁殖 培育无病毒植株等 培养目的 营养物质 动物血清 营养物质 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 二 动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核 移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中 使其重组并发育成为一个新的胚胎 这个新的胚胎最终发育为动物个体 克隆动物 1 动物细胞核移植概念 2 体细胞核移植的过程 难度高 原理 动物细胞核的全能性 取供体细胞传代培养10代以内的细胞 为什么 用的是去核的减数第二次分裂中期细胞 M 中期 为什么 激活方法 激活目的 促融方法 电刺激 胚胎移植至代孕受体内 妊娠 分娩 供体 优质高产奶牛 受体 普通奶牛 卵母细胞的采集与培养 1 体积大 易操作 营养物质丰富 2 含有促使细胞核表达全能性的物质 有人说它三个母亲 对吗 10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型 细胞质 细胞核 细胞核移植 多莉羊的培育过程 3 体细胞核移植技术的应用前景 1 加速家畜遗传改良的进程 2 保护濒危物种 3 生产医用蛋白质及组织器官的移植 4 了解胚胎发育和衰老过程 追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病 3 体细胞核移植技术存在的问题P50 1 成功率非常低 2 克隆动物以表现早衰 生理缺陷等健康问题 成功率低 绝大多数克隆动物存在健康问题并表现出遗传和生理缺陷 如体型过大 异常肥胖 发育困难 脏器缺陷 免疫失调等 2 2 1动物细胞培养和核移植技术 一 动物细胞培养 概念 原理 过程 应用 二 动物细胞核移植技术 概念 原理 过程 应用 1 下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是A 培养基成分不同B 动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C 动物细胞可以传代培养 而植物细胞不能D 动物细胞能够大量培养 而植物细胞只能培养成植株 2 在克隆多利羊的过程中 下列哪项技术没有运用到A 细胞培养技术B 细胞核移植C 胚胎移植技术D 基因工程技术 A D 08年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题 在动物细胞培养的过程中 当贴壁细胞分裂生长到细胞表面时 细胞会停止分裂增殖 这种现象称为细胞的 此时 瓶壁上形成的细胞层数是 要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来 需要用酶处理 可用的是 随着细胞传代次数的增多 绝大部分细胞分裂停止 进而出现的现象 但极少数细胞可以连续增殖 其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成细胞 该种细胞的黏着性 细胞膜表面蛋白质 糖蛋白 的量 相互接触 单层 胰蛋白酶 衰老甚至死亡 接触抑制 不死性 降低 减少 检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目 最好选用细胞分裂到期的细胞用显微镜进行观察 在细胞培养过程中 通常在条件下保存细胞 因为在这种条件下 细胞中的活性降低 细胞的速率降低 给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后 发生了排斥现象 这是因为机体把移植的皮肤组织当作进行攻击 中 冷冻 酶 新陈代谢 抗原 二 动物细胞核移植技术和克隆动物 1 离体的植物组织或细胞 完整的植株 技术 植物组织培养 原理 植物细胞的全能性 2 离体的动物组织或细胞 完整的动物体 技术 核移植 原理 动物细胞核的全能性 1 植物组织培养技术 原理 过程 2 植物体细胞杂交技术 原理 过程 3 动物细胞培养技术 原理 过程 细胞的全能性 脱分化 再分化 细胞膜的流动性和细胞的全能性 原生质体融合和植物组织培养 细胞增殖 原代培养和传代培养