临床检测-谷丙转氨酶活性的测定.ppt

血清丙氨酸氨基转移酶活性测定 改良赖氏法 三峡大学医学院生物化学教研室 临床指标的检测 1 掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理 2 熟悉血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的具体操作方法 3 了解血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的临床意义 目的要求 临床意义 谷丙转氨酶 GlutamicpyruvicTransaminase GPT 丙氨酸氨基转移酶 AlanineTransaminase ALT ALT GPT 广泛存在于机体各种组织中 但在肝细胞中含量最多 当肝脏有病变 特别是急性肝炎及肝细胞坏死 血清中谷丙转氨酶活性显著升高 在肝癌 肝硬变以及胆道疾病时 此酶活性也可中度或轻度增高 如何测定酶的活性 活性单位定义中必须规定哪些条件 在紫外分光光度计中 1ml血清 反应溶液总量为3ml 在340nm波长下 用内径为1 0cm的比色皿 在25 1分钟内生成的丙酮酸 在乳酸氢酶催化下 使NADH H 变成NAD 使光密度下降0 001为1个转氨酶活性单位 卡门氏单位的定义为 改良赖氏法 赖氏法没有制定自身的单位定义 而是以实验数据套用卡门氏单位作表示的 血清中的谷 丙转氨酶 ALT 在37 pH7 4的条件下 可催化基质 底物 液中的丙氨酸与 酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸 实验原理 37 水浴预温5分钟 各管加2 4 二硝基苯肼0 5ml混匀 再在37 水浴中放置20分钟后 各管加0 4mol LNaOH溶液5ml 混匀放置10分钟后 以蒸馏水调零点 用520nm波长比色 读取各管光密 各管的读数均减去对照管 O管 的光密度 然后以光密度值为纵坐标 各管相应的转氨酶活性单位为横坐标 绘制标准曲线 实验操作 1 标准曲线的制作 2 酶活性测定 测定前将底物缓冲液在37 水浴中预温5分钟 再按下表操作 混匀 在室温中放置10分钟 以蒸馏水调零点 用520nm波长比色 读取光密度 用T C管的光密度查标准曲线 即得到待测血清中所含ALT的酶活性 参考值 5 25卡门氏单位 临床意义 肝细胞中含ALT最丰富 因此当肝脏疾病致肝细胞受损伤时 ALT即大量释放入血液 致使血清中ALT活性增高 测定ALT是检查肝功能的重要指标之一 ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死 中等程度增高见于肝癌 肝硬化 慢性肝炎及心肌梗塞 轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病 骨骼肌损伤 多发性肌炎亦可引起转氨酶活性升高 思考题 1 血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义 2 血清谷丙转氨酶的测定有何注意点 为什么要避免溶血