方法学验证方案.doc

含量测定 方法学确认方案 日期 2016 年 1 月 验证方案审查与批准 您下面的签字表明您已审阅此份验证方案并同意实施 姓 名 职 务 签 名 日 期 起草人 姓 名 职 务 签 名 日 期 审核人 审核人 姓 名 职 务 签 名 日 期 批准人 目 录 1 目的 4 2 范围 4 3 验证机构与职责 4 4 定义 4 5 参考文件 5 6 风险因素分析 5 7 验证准备 5 8 检测方法的描述 5 9 验证实施 6 10 偏差与变更 8 11 确认结果评定与结论 9 12 确认周期 9 13 附录目录 9 1 目的 对苦参膜中的含量测定检测方法进行确认 确保方法的可行性 以便为有效控制苦参 膜的含量提供依据 2 范围 本方案适用于 药业股份有限公司齐墩果酸片含量测定方法的确认 3 验证机构与职责 3 1验证小组成员 姓 名 所在部门 在验证中担任职务 签名 日期 组长 组员 组员 3 2 职责 3 2 1 验证小组组长职责 3 2 1 1 保证确认方案及各种检查表的起草 3 2 1 2 保证在执行前完成对确认方案及各种检查表的审核和批准 3 2 1 3 负责对确认小组成员进行本方案的培训 3 2 1 4 保证完全按照确认方案实施 3 2 1 5 确保能及时发现偏差 并按照已经达成一致的偏差处理方法对其进行记录 纠正 调查和最终确认 3 2 1 6 确保确认报告的生成 审核和批准 3 2 2 QA 职责 3 2 2 1 执行前完成对确认方案及各种检查表的审核 3 2 2 2 负责确认过程的监控和检查 保证确认方案的实施 参与确认结果评价 3 2 2 3 参与确认偏差的调查 处理 和评估 3 2 2 4 确认过程中 如有变更 保证按 变更处理程序 执行 3 2 3 其它成员职责 3 2 3 1 执行前确认确认方案已批准 并经过培训 3 2 3 2 按确认方案实施确认 收集 整理确认数据 完成确认记录和报告 3 2 3 3 参与确认偏差的调查和处理 确认通过偏差修订和解决方案 3 2 3 4 确认确认过程中的变更在实施前已经批准 4 定义 4 1 线性 指在设计的范围内 测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度 4 2 准确度 指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度 一般用回收率 表示 4 3 重复性 再规定范围内 取同一浓度的供试品 用 6 个测定结果进行评价 4 4 中间精密度 在同一个实验室 不同时间由不同分析人员或用不同设备测定结果之间 的精密度 称为中间精密度 5 参考文件 5 1 药品生产质量管理规范 2010 年修订版 5 2 药品生产验证指南 5 3 中国药典 2015 年版 二部 5 4 国家药品监督管理局国家药品标准 5 5 公司相关文件 5 5 1 苦参膜质量标准及检验规程 5 5 2 验证管理 5 5 3 变更控制操作规程 5 5 4 偏差处理操作程序 5 5 5 纠正措施与预防措施操作规程 5 5 6 2016 年度验证总计划 6 风险因素分析 风险评估将采用失效模式及影响 FMEA 的工具来评估和衡量方法参数失效后对产品 分析结果的影响 评估过程将参照公司质量风险管理的要求 风险等级为低 中 高级别 的必须给出合理的建议措施 之后再次对建议的风险控制措施进行评估以确保风险的降低 分析 评估结果见附录 1 风险评估表 7 验证准备 7 1 确保所有方法 SOP 是最新版本且经过批准 将检查结果记录在附录 2 文件检查 内 7 2 确认参与验证的人员都经过此方案和相关 SOP 的培训 和识别所有签字和草签本方 案任何数据表的人员 将检查结果记录在附录 3 培训检查和签名确认 内 7 3 确认验证过程中用到设备 计量仪器都是经过校验 并在有效期内 将检查结果记录 在附录 4 确认用仪器 仪表校准检查 内 8 检测方法的描述 8 1 药品与试剂的准备 对照品 中国药品生物制品检定院提供 为 药业股份有限公司生产 硅钨酸试液 碘化汞钾试液 苦味酸 氯仿 甲醇 浓氨 稀碘化铋钾试液 盐酸液 0 2mol L 氢氧化钠液 1mol L 氢氧化钠滴定液 0 1mol L 硫酸滴定液 0 05mol L 甲基红示液 磷酸 乙腈 无水乙醇 8 2 仪器分析条件 电子天平 FA2014 超声池 KQ 300DE 电热恒温水浴锅 DK 98 1 高效液相 LC 10ATVP 8 3 检测方法 显色鉴别 色谱鉴别 酸碱滴定法 高效液相色谱法 8 4 检测操作 8 4 1 鉴别 8 4 1 1 显色鉴别 样品连续三批 A B 两位组员各取样品 1 号 样品 2 号约 0 15g 分 置三支试管中 加水 2ml 使溶解 分别加硅钨酸试液 碘化汞钾试液及苦味酸试液 1 2 滴 分别生成白色 淡黄色及黄色沉淀 8 4 1 2 薄层鉴别 样品连续三批 A B 两位组员分别取本品 0 1g 加甲醇 10ml 使溶解 超声提取 15 分钟 静置 取上清液作为供试品溶液 另取苦参碱及氧化苦参碱对照品适量 加甲醇制成每 1ml 中各含 5mg 的溶液作为对照品溶液 照薄层色谱法 附录 B 试验 取上述三种溶液各 2 3 l 分别点于同一以 0 5 羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层 板上 以三氯甲烷 甲醇 浓氨试液 5 0 6 0 3 为展开剂 展开 取出 晾干 喷以稀碘 化铋钾试液 供试品色谱中 在与对照品色谱相应的位置上 显相同颜色的两个斑点 8 4 2 3 酸碱滴定法 连续三批样品 两位组员分别取样品 1 样品 2 各 10 片 剪碎 取一片重两份 各精密称定 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小时 合并提取液 置水浴上 挥干 残渣用 0 2mol L 盐酸液 5ml 使溶解 滤过 滤液置入分液漏斗中 用水 10ml 分次 洗涤容器 洗液并入分液漏斗中 加氯化钠约 6g 与 1mol L 氢氧化钠液 5ml 摇匀 用三氯 甲烷振摇提取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液 5ml 振摇洗涤 再依次分别通过同一装有无水硫酸钠 1g 的脱脂棉层滤过 合并三氯甲烷液 精密加硫酸滴定液 0 05mol L 10ml 及新沸过的冷水 20ml 振摇提取后 分取酸层 氯 仿层再用新沸过的冷水洗涤 3 次 每次 10ml 合并酸液与洗涤液 置水浴上加热 除去残 留的三氯甲烷 放冷至室温 加甲基红指示液 2 滴 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸液 0 05mol L 相当于 26 44mg 的 C15H24N2O2 本品每片含总生物碱以 80 0 110 0 相对偏差 dr 不得超过 0 6 计算公式 043210 10 MmTCVC C1 硫酸滴定液的实际浓度 mol L C2 硫酸滴定液的理论浓度 mol L C3 氢氧化钠滴定液的实际浓度 mol L C4 氢氧化钠滴定液的理论浓度 mol L V1 加入硫酸滴定液的体积 ml V2 消耗氢氧化钠滴定液的体积 ml T 标示量 26 44mg 该批 20 片苦参膜的平均重量 g m M 使用苦参膜的量 g 8 4 2 4 高效液相色谱法 8 4 2 4 1 色谱条件与系统适用性试验 用氨基键合硅胶为填充剂 以乙腈 无水乙醇 3 磷 酸溶液 85 7 5 7 5 为流动相 柱温 30 检测波长为 220nm 流速 1 0ml min 理论 塔板数按氧化苦参碱峰计算 应不低于 5000 6 2 2 对照品溶液的制备 取 对照品适量 精密称定 置同一量瓶中 加乙腈 无 水乙醇 85 15 制成每 1ml 含苦参碱 0 32mg 和氧化苦参碱 35 g 的溶液 摇匀 即得 8 4 2 2 供试品溶液的制备 取已剪碎的样品约 0 6g 精密称定 置具塞锥形瓶中 加浓 氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 称定重量 超声处理 30 分钟 放冷 加三氯甲烷补 足损失重量 滤过 精密吸取续滤液 5ml 水浴上挥干 用乙腈 无水乙醇 85 15 定溶 至 25ml 量瓶中 摇匀 用 0 45 m 滤膜滤过 即得 6 2 4 测定法 分别精密吸取对照品溶液 5 l 与供试品溶液 5 10 l 注入高效液相 色谱仪 测定 即得 本品每片含 不得少于 22 0 mg 相对标准偏差不得过 2 计算公式 21A 样 品 平 均 片 重稀 释 倍 数样 品 称 量对 照 品 平 均 峰 面 积对 照 品 浓 度样 品 峰 面 积 gmC 对照品进两针的平均峰面积 A 对照品第一针峰面积 1 对照品第二针峰面积 2 9 验证实施 9 1 线性实验 目的 在设计的范围内 测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度应符合规定 9 1 1 滴定法 9 1 1 1 实验过程 同一人同时取同一批样品 各 10 片 剪碎 取一片重样品 1 样品 2 样品 3 样品 4 样 品 5 各精密称定 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小时 合并提取液 置水浴上挥干 残 渣用 0 2mol L 盐酸液 5ml 使溶解 滤过 滤液置入分液漏斗中 用水 10ml 分次洗涤容器 洗液并入分液漏斗中 加氯化钠约 6g 与 1mol L 氢氧化钠液 5ml 摇匀 用三氯甲烷振摇提 取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液 5ml 振摇洗 涤 再依次分别通过同一装有无水硫酸钠 1g 的脱脂棉层滤过 合并三氯甲烷液 精密加硫 酸滴定液 0 05mol L 10ml 及新沸过的冷水 20ml 振摇提取后 分取酸层 氯仿层再用 新沸过的冷水洗涤 3 次 每次 10ml 合并酸液与洗涤液 置水浴上加热 除去残留的三氯 甲烷 放冷至室温 加甲基红指示液 2 滴 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸液 0 05mol L 相当于 26 44mg 的 C15H24N2O2 本品每片含总生物碱以氧化苦参碱 C 15H24N2O 计 应为标示量的 80 0 110 0 相对 偏差 dr 不得超过 0 6 9 1 1 2 以样品滴定过程中消耗氢氧化钠的体积为横坐标 以样品含量为纵坐标 绘制 回归方程 9 1 1 3 可接受标准 相关系数 dr 0 6 9 1 1 4 记录 将实验结果记录在 滴定含量测定线性实验记录 内 见附录 9 1 2 高效液相 9 1 2 1 对照品配制 取 一瓶精密称取置 25ml 容量瓶中 对照品两瓶精密称取置 50ml 量瓶中 加乙腈 无水乙醇 85 15 溶解至刻度 分别精密量取氧化苦参碱 0 5ml 苦参碱 5ml 氧化苦参碱 1ml 苦参碱 10ml 氧化苦参碱 2ml 苦参碱 20ml 分别置 25ml 容量瓶中 加乙腈 无水乙醇 85 15 至刻度 既得 9 1 2 2 样品制备 取已剪碎的样品约 0 6g 精密称定 置具塞锥形瓶中 加浓氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 称定重量 超声处理 30 分钟 放冷 加三氯甲烷补足损 失重量 滤过 精密吸取续滤液 5ml 水浴上挥干 用乙腈 无水乙醇 85 15 定溶至 25ml 量瓶中 摇匀 用 0 45 m 滤膜滤过 即得 9 1 2 3 测定法 分别精密吸取对照品溶液 5 l 与供试品溶液 5 10 l 注入高效液相 色谱仪 测定 即得 本品每片 不得少于 22 0 mg 9 1 2 4 以对照品的吸取量 峰面积 为横坐标 以样品含量 峰面积 为纵坐标 绘 制回归方程 9 1 2 5 可接受标准 相关系数 RSD 2 9 1 2 6 记录 将实验结果记录在 高效含量测定线性实验记录 内 见附录 5 9 2 重复性实验 目的 在规定范围内 取同一批次的样品品 用 5 个测定结果进行评价 得到的结果 RSD 应符合要求 9 2 1 滴定法 9 2 1 1 实验过程 取同一批样品 10 片 剪碎 取一片重样品 1 样品 2 样品 3 样品 4 样品 5 各精密称 定 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小时 合并提取液 置水浴上挥干 残渣用 0 2mol L 盐酸液 5ml 使溶解 滤过 滤液置入分液漏斗中 用水 10ml 分次洗涤容器 洗液并入分液 漏斗中 加氯化钠约 6g 与 1mol L 氢氧化钠液 5ml 摇匀 用三氯甲烷振摇提取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液 5ml 振摇洗涤 再 依次分别通过同一装有无水硫酸钠 1g 的脱脂棉层滤过 合并三氯甲烷液 精密加硫酸滴定 液 0 05mol L 10ml 及新沸过的冷水 20ml 振摇提取后 分取酸层 氯仿层再用新沸过 的冷水洗涤 3 次 每次 10ml 合并酸液与洗涤液 置水浴上加热 除去残留的三氯甲烷 放冷至室温 加甲基红指示液 2 滴 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸 液 0 05mol L 相当于 26 44mg 的 C15H24N2O2 本品每片含总生物碱以 80 0 110 0 相对偏差 dr 不得超过 0 6 9 1 1 2 可接受标准 相关系数 dr 0 6 9 1 1 3 记录 将实验结果记录在 滴定含量测定重复性实验记录 内 见附录 5 9 2 2 高效 9 2 2 实验过程 9 1 2 1 对照品配制 对照品溶液的制备 取苦参碱 氧化苦参碱对照品母液适量 置同 一量瓶中 加乙腈 无水乙醇 85 15 制成每 1ml 含苦参碱 0 32mg 和氧化苦参碱 35 g 的 溶液 摇匀 即得 9 1 2 2 样品制备 取同一批样品 10 片 剪碎并分别取样品 1 样品 2 样品 3 样品 4 样品 5 约 0 6g 精密称定 置具塞锥形瓶中 加浓氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 称定重量 超声处理 30 分钟 放冷 加三氯甲烷补足损失重量 滤过 精密吸取续滤液 5ml 水浴上挥干 用乙腈 无水乙醇 85 15 定溶至 25ml 量瓶中 摇匀 用 0 45 m 滤 膜滤过 即得 9 1 2 3 测定法 分别精密吸取对照品溶液 5 l 与供试品溶液 5 10 l 注入高效液相 色谱仪 测定 即得 本品每片含苦参总碱以苦参碱 C 15H24N2O 与氧化苦参碱 C 15H24N2O2 的总量计 不得少于 22 0 mg 9 1 2 4 可接受标准 相关系数 RSD 2 9 1 2 5 记录 将实验结果记录在 高效含量测定重复性实验记录 内 见附录 5 9 3 中间精密度实验 9 3 1 目的 含量测定中 一个实验室内不同的人 在不同时间 通常是不同天 测定得 到的结果 RSD 应符合要求 9 3 1 滴定含量 9 3 1 1 实验过程 9 3 1 2 两名实验人员分别在不同时间 通常是不同天 各取同一批号苦参膜 10 片 精密 称定 剪碎 各精密称取本品 3 份 每份约 0 6g 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小时 合并提取液 置水浴上挥干 残渣用 0 2mol L 盐酸液 5ml 使溶解 滤过 滤液置入分液漏 斗中 用水 10ml 分次洗涤容器 洗液并入分液漏斗中 加氯化钠约 6g 与 1mol L 氢氧化钠 液 5ml 摇匀 用三氯甲烷振摇提取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次三氯甲烷提取液 均用同一饱和氯化钠液 5ml 振摇洗涤 再依次分别通过同一装有无水硫酸钠 1g 的脱脂棉层 滤过 合并三氯甲烷液 精密加硫酸滴定液 0 05mol L 10ml 及新沸过的冷水 20ml 振 摇提取后 分取酸层 氯仿层再用新沸过的冷水洗涤 3 次 每次 10ml 合并酸液与洗涤液 置水浴上加热 除去残留的三氯甲烷 放冷至室温 加甲基红指示液 2 滴 用氢氧化钠滴 定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸液 0 05mol L 相当于 26 44mg 的 C15H24N2O2 9 3 1 3 可接受标准 同一人实验结果 RSD 2 0 两人间的 RSD 2 0 9 3 1 4 记录 将实验结果记录在 滴定含量测定中间精密实验记录 内 见附录 5 9 3 2 高效 9 3 2 1 两名实验人员用同一批对照品分别在不同时间 通常是不同天 各取同一批号苦 参膜 10 片 精密称定 剪碎 各精密称取本品 3 份 每份约 0 6g 置具塞锥形瓶中 加浓氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 称定重量 超声处理 30 分钟 放冷 加三氯甲 烷补足损失重量 滤过 精密吸取续滤液 5ml 水浴上挥干 用乙腈 无水乙醇 85 15 定溶至 25ml 量瓶中 摇匀 用 0 45 m 滤膜滤过 即得 9 3 2 2 测定法 分别精密吸取对照品溶液 5 l 与供试品溶液 5 10 l 注入高效液相 色谱仪 测定 即得 本品每片含苦参总碱以苦参碱 C 15H24N2O 与氧化苦参碱 C 15H24N2O2 的总量计 不得少于 22 0 mg 9 3 2 3 可接受标准 同一人实验结果 RSD 2 0 两人间的 RSD 2 0 9 3 2 4 记录 将实验结果记录在 高效含量测定中间精密度实验记录 内 见附 5 9 4 含量测定准确度实验 9 4 1 目的 含量测定中 用已确定的方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度 一 般用回收率 表示 得到的结果 RSD 应符合要求 9 4 2 实验过程 精密称取同一已知含量的供试品 9 份 每份约 0 6g 分别置于圆底烧瓶中 分成三组 分别向第一组的每一份供试品中加入浓度为 35 g ml 的氧化苦参碱对照品 2 ml 向第 二组的每一份供试品中加入浓度为 35 g ml 的氧化苦参碱对照品 5ml 向第三组的每 一份供试品中加入浓度为 35 g ml 的氧化苦参碱对照品 7 ml 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小时 合并提取液 置水浴上挥干 残渣用 0 2mol L 盐酸液 5ml 使溶解 滤过 滤 液置入分液漏斗中 用水 10ml 分次洗涤容器 洗液并入分液漏斗中 加氯化钠约 6g 与 1mol L 氢氧化钠液 5ml 摇匀 用三氯甲烷振摇提取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次 三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液 5ml 振摇洗涤 再依次分别通过同一装有无水硫酸 钠 1g 的脱脂棉层滤过 合并三氯甲烷液 精密加硫酸滴定液 0 05mol L 10ml 及新沸过 的冷水 20ml 振摇提取后 分取酸层 氯仿层再用新沸过的冷水洗涤 3 次 每次 10ml 合 并酸液与洗涤液 置水浴上加热 除去残留的三氯甲烷 放冷至室温 加甲基红指示液 2 滴 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸液 0 05mol L 相当于 26 44mg 的 C15H24N2O2 9 4 2 1 测定法 将测得的总含量减去供试品中已知含量 计算每组的回收率 9 4 2 2 可接受标准 实验结果回收率 98 0 102 0 9 4 2 3 记录 将实验结果记录在 滴定含量测定准确度实验记录 内 见附录 8 9 4 3 高效 9 4 3 1 对照品制备 对照品溶液的制备 取苦参碱 氧化苦参碱对照品母液适量 置 同一量瓶中 加乙腈 无水乙醇 85 15 制成每 1ml 含苦参碱 0 32mg 和 35 g 的溶液 摇 匀 即得 9 4 3 2 供试品制备 精密称取同一已知含量的供试品 9 份 每份约 0 6g 置具塞锥形瓶中 加浓氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 称定重量 超声处理 30 分钟 放冷 加三氯甲烷补足损 失重量 滤过 精密吸取续滤液 5ml 水浴上挥干 用乙腈 无水乙醇 85 15 定溶至 25ml 量瓶中 摇匀 用 0 45 m 滤膜滤过 即得 分成三组 每组 3 份样品 分别向第 一组的每一份供试品中加入浓度为 每 1ml 含苦参碱 0 32mg 和氧化苦参碱 35 g 的溶液 的对照品 2 ml 向第二组的每一份供试品中加入浓度为 每 1ml 含苦参碱 0 32mg 和氧化 苦参碱 35 g 的溶液 的对照品 5ml 向第三组的每一份供试品中加入浓度为 每 1ml 含 苦参碱 0 32mg 和氧化苦参碱 35 g 的溶液 的对照品 7 ml 分别精密吸取对照品溶液 5 l 与供试品溶液 5 10 l 注入高效液相色谱仪 测定 即得 9 4 2 3 测定法 将测得的总含量减去供试品中已知含量 计算每组的回收率 9 4 2 4 可接受标准 实验结果回收率 98 0 102 0 9 4 2 5 记录 将实验结果记录在 效含量测定准确度实验记录 内 见附录 8 10 偏差与变更 10 1 验证偏差 当该方案的某一部分无法实施或实际情况无法达到可接受标准时 需要进行偏差报告 当偏差出现时 首先要进行全面调查以确定该偏差是由什么引起的 之后再确定相应的解 决措施 将验证过程中产生的偏差记录在 偏差处理单 中 并作为验证记录附件 10 2 变更控制 所有在验证过程中产生的变更都需记录 确保所有的变更得到评估和批准 验证的结 果达到预定的目的和要求 将验证过程中产生的变更记录在 变更处理单 记录中 并作为验证记录附件 11 确认结果评定与结论 11 1 验证小组负责对确认结果进行综合评审 做出确认结论 11 2 对确认结果的评审应包括 11 2 1 确认实施是否有遗漏 11 2 2 确认实施过程中对确认方案有无修改 修改原因 依据以及是否经过批准 11 2 3 确认记录是否完整 11 2 4 确认试验结果是否符合标准要求 是否需要进一步补充试验 12 附录目录 附录 1 风险评估报告 附录 2 文件检查 附录 3 培训检查和签名确认 附录 4 确认用仪器 仪表校准检查 附录 5 滴定含量测定操作记录 附录 5 高效含量测定操作记录