分析方法学验证及确认管理规程.doc

质量管理标准部 门：质量部标题：分析方法学验证及确认管理规程起草人：日 期：审核人：日 期：批准人：日 期：编 号：JSMS-QC-020-00前版编号：新增页数：9执行日期：2014年8月1日下次审核日期：2016年8月1日颁发部门：质量部1. 目的: 制定分析方法学验证及确认的管理规程。2. 范围: 适用于分析方法学的验证及确认。3. 责任: QC检测员，QC主管。4. 内容：4.1 方法验证方法验证就是根据检验项米的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法是都符合检验项目的要求。4.1.1 方法验证的一般原则通常情况下，分析方法需进行方法验证。对于仅需按照实验室日常测试操作步骤即可测定的检验项目不需要进行验证，如外观、崩解时限、密度、重量、pH值、灰分、装量等。方法学验证的内容应根据检验项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。同一分析方法用于不同的检验项目会有不同的验证要求。4.1.2 需要验证的检验项目检验项目是为控制药品质量，保证药品安全有效而设定的测试项目，根据检验项目的设定目的和验证内容的不同要求，需验证的检验项目分为四类：1. 鉴别试验；2. 杂质的限度检查；3. 杂质的定量测定；4. 含量测定，包含原料药或制剂中有效成分的含量，制剂中其他成分（如防腐剂等）的含量，溶出度与释放度等检查中的溶出量。以及含量均匀度。除此之外还有一些物理项目的检测如粒径分布、旋光度、熔点和硬度，其要求与其他检验项目有所不同，通常其分析方法验证应有不同的要求。鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其他物质。用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性和耐用性。杂质检查主要用于控制主成分意外的杂质，如无机杂质、有机杂质等。杂质检查分为限度检查和定量测定这两部分。用于限度检查的分析方法验证侧重专属性、检测限和耐用性。用于定量测定的分析方法验证强调专属性、准确度、精确度、线性、范围、定量限和耐用性。含量测定对准确度要求较高，因此所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性要求。中国药典2010年版中规定了不同的检验项目需要验证不同的内容，详见表一：表一 验证项目和验证内容验证内容检验项目鉴别杂质测定含量测定定量限度准确度否是否是精密度重复性否是否是中间精密度否是*否是*专属性*是是是是检测限否是*是否定量限否是否否线性否是否是范围否是否是耐用性是是是是备注：1. *：已有重现性验证，不需验证中间精密度；2. *：如一种方法不够专属，可由其他分析方法予以补充；3. *：视具体情况予以验证；4. “是”代表该项内容需要验证，“否”代表该项内容不需要验证。4.1.3 方法验证内容4.1.3.1 准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。一般用回收率表示。准确度应在规定的范围内测试。（1）验证方法准确度应在规定的范围内建立，至少用9个测定结果进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。准确度是定量测定的必要条件，因此含量测定、杂质定量测定均需验证准确度。原料药与制剂所用的具体方法见表二。表二 准确度验证方法检验项目原料药制剂备注含量测定方法1：用已知纯度的对照品或供试品进行测定方法2：用本法所得结果与已知准确的另一方法测定结果进行比较方法1：用含已知被测物的各组分混合物进行测定方法：如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定方法3：用本法所得的结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较如该分析方法已经测试并求出精密度、线性和专属性，在准确度也可推荐的情况下，准确度可不必再做杂质的定量测定方法1：可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定方法2：如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典方法或经过验证的方法在不能测得杂质降解产物的响应因子或不能测得对应原料药的响应因子。应明确单个杂质的杂质总量详单与主成分的重量比（%）或面积比（%）例如：测定含量的准确度，按标示的80%，100%和120%配制三个浓度的溶液，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。根据测定结果与配制浓度计算出平均回收率以及相对标准偏差。（2）数据要求需报告已知加入量的回收率（%），或测定结果平均值与真实值之差及相对标准偏差或可信限。4.1.3.2 精密度精密度系指在规定的测试条件下，同一均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。精密度与准确度不同。精密度体现了多次重复测定同一被分析物时各测定值之间的接近程度，但它不能表达与已建立的真实值或者参考值之间的符合程度，后者由准确度来测定。通过一系列的测定值，可以得到良好的精密度，但是由于所用分析方法存在的偏差，所得的平均值不一定与真实值或参考值相符，在这种状况下，需要修改方法以消除偏差。（1）验证方法精密度可从重复性、中间精密度、重现性三个层次考察。详见表三。表三 精密度验证方法名称定义验证方法重复性在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度成为重复性在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液或将相当于100%浓度水平的供试品溶液，用至少测定6次的结果进行评价中间精密度在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度，成为中间精密度为考察随机变动因素对精密度的影响，应设计方案进行中间精密度试验。变动因素为不同日期、不同分析人员，不同设备重现性不同实验室之间由不同分析人员测定结果之间的精密度，成为重现性法定标准采用的分析方法或在不同实验室之间进行方法转移时，应进行重现性试验。例如建立药典分析方法时，通过协同检验得出重现性结果。协同检验的目的、过程和重现性结果均应记载在起草说明中，应注意重现性试验用的样品本身的质量均匀性和贮存运输中的环境影响因素，以免影响重现性结果（2）数据要求 均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限。4.1.3.3 专属性专属性系指在其他成分（如：杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。通常，鉴别反应、杂质检查、含量测定均应考察其专属性。如一种方法不够专属，可由其他分析方法予以补充。例如检测具有旋光特性的活性物质，除采用非手性薄层色谱法或高效液相色谱法外，还应增加旋光度的检查。验证方法见表四。表四 专属性验证方法检验项目概述验证方法备注鉴别试验鉴别试验用于确认被测成分符合其特征专属性要求证明其能与可能共存的物质或结构相似化合物区分含被测成分的供试品呈正反应，而不含被测成分的供试品以及结构相似或组分中对与药品，辅料不得干扰其有效成分的鉴别杂质测定（包括限度检查和定量测定）作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分许物中杂质的含量测定，如有关物质、重金属、有机溶剂等。因此杂质检查要求分析方法有一定的专属性方法1：在杂质可获得的情况下，可向试验中加入一定量的杂质，考察杂质与共存物质能得到分离和检出，并具有适当的准确度与精密度方法2：在杂质或降解产物不恩能获得的情况下，专属性可通过测定含有杂质或降解产物的试样，与另一个已验证的方法或药典方法比较结果。或对试样用强光照射、高温、高湿、酸（碱）水解或氧化的方法进行加速破坏，以研究可能的降解产物和降解途径，并比较破坏前后检出的杂质个数。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行峰纯度检查色谱法和其他分离方法，应附代表性图谱，以说明方法的专属性，并应标明诸成分在途中的位置，色谱法的分离度应符合要求含量测定含量测定的目的是得到试样中被分析物的含量测定或效价准确结果方法1：在杂质可获得的情况下，可向试样中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并可与 未知杂质和辅料的试样比较测定结果。方法2：在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过测定含有杂质或降解产物的试样，与另一个已验证的方法或药典方法比较结果。或对试样用强光照射、高温、高湿、酸（碱）水解或氧化的方法进行加速破坏，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测进行峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分4.1.3.4 检测限检测限（LOD或DL）系指试验中的被测物能够被检测出的最低量。药品的杂质测定，应通过测试确定方法的检测限。（1）验证方法（表五）表五 杂质测定检测限验证方法检测项目验证方法杂质测定方法1：非仪器分析目视法用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量方法2：信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3:1或2:1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限（2）数据要求应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。4.1.3.5 定量限定量限（LOQ或QL）系指试样中的被测物能够被定量测定的最低量，其被测结果应具有一定的准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定方法的定量限。（1）验证方法（表六）表六 杂质定量测定验证方法检验项目验证方法杂质定量测定信噪比法：一般以信噪比为10:1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限4.1.3.6 线性线性是指在设计的测定范围内，检测结果与试样中被测物的浓度直接呈正比关系的程度。线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量测定和含量测定均需验证线性。（1）验证方法应在规定的测定范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试样品的方法进行测定，至少制备5个浓度的供试样品每个浓度各一份，每份供试样品测定3次，以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数字转换，再进行线性回归计算。（2）数据要求应列出回归方程、相关系数和线形图。4.1.3.7 范围范围系指能够达到一定的精密度、准确度和线性，测试方法使用的高低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果和要求确定，要求见线性内容4.1.3.6。4.1.3.8 耐用性耐用性系指测定条件有小的变动时，测定结果不收影响的承受程度，为使方法可用于常规检验提供依据。4.2 方法确认4.2.1 适用范围适用于：物料和产品中不需要进行验证的检验方法以及药典方法和其他已验证的法定标准。通过方法确认来证明方法在本实验室条件下的适用性。不适用于：实验室日常测试操作步骤不需要进行方法确认，例如（包括但不限于）干燥失重、炽灼残渣。各种湿法化学步骤如酸值和检定的仪器方法如pH计，除非有特殊要求。4.2.2 确认方法对于方法确认，通常采用如下两种方式：方式一：由亮膜检验人员分别独立对同一批产品进行检验（如可能，使用不同仪器），比较两人的检测结果来证明方法在本实验室（人员，分析仪器、试剂等）的适用性。方式二：根据验证目的和评估结果选择相关项目进行确认，如表七（仅供参考）。表七 检验项目确认内容示例检验项目准确度精密度专属性检测限定量限线性范围耐用性原料药鉴别（HPLC法）否否可能否否否否否有关物质（HPLC法）否可能是否是否否否含量测定（HPLC法）否可能可能否否否否否制剂鉴别（HPLC法）否否是否否否否否溶出度可能是是否可能否否否有关物质可能是是否是否否否含量测定可能是是否否否否否备注：“是”代表该项类容需要确认，“否”代表该项内容不需要确认。“可能”代表该项内容需根据实际情况评价确定。4.3 方法验证、方法确认的管理企业必须制定方法验证、方法确认的操作规程，应涵盖范围，方案的起草、审批和批准，方案的实施，报告的起草、审批和批准，以及文件的管理等方面内容。4.3.1 方案的准备在方法验证、方法确认前，必须依据操作规程进行方案的起草、审批和批准。对于方案，有如下要求：l 详细描述被执行程序；l 明确规定被测参数的接受标准；l 明确职责。4.3.2 方案的实施在方案的实施过程中，应注意以下的方面的内容：l 从事检验的人员必须是合格分析师。l 所用分析仪器已通过确认和校准。l 实验必须依据预先确定和批准的方案进行，并有记录。l 实验过程中任何失败的测试，过程中的偏差或异常均需复核和评估并查出原因。过程中的偏差或异常需通过正式的体系（如调查报告，验证/确认报告中偏差的鉴定和批准）进行记录和批准。4.3.3 报告 方法验证/确认工作完成后，应按规定的模板出具报告，并经审批和批准。报告中必须明确的写出结果和结论，包括评价和建议。4.3.4 文件的保存 方案、原始记录和报告均应长期保存。