血清型和酶型法医学.ppt

2020 2 21 中山大学法医物证教研室李建金 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 血清型和酶型 2020 2 21 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 血清型 2020 2 21 血清型的概念 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 人类某些血清蛋白具有遗传多态性 表型有个体差异 称为血清型 Serumtypes 在法医学鉴定中应用的血清型主要有 结合珠蛋白 维生素D结合蛋白 1 抗胰蛋白酶 转铁蛋白 类粘蛋白 2 HS糖蛋白 纤维蛋白溶酶原 间 胰蛋白酶抑制因子 抗凝血酶 同种异型遗传标记以及部分补体蛋白等 2020 2 21 分类 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 同种异型遗传标记 指同一种属不同个体血清蛋白抗原性的差别 可采用特异性抗血清分型 如免疫球蛋白 链的同种异型Gm血清蛋白的电泳多态性遗传标记 指不同个体血清蛋白的电泳特性的差异 是血清蛋白多肽链中部分肽链段或个别氨基酸不同 引起电泳迁移率发生变化构成的多态性 电泳技术分型 如结合珠蛋白 2020 2 21 分型原理 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 传统的免疫学方法以特异性抗体检测同种异型抗原 可确定遗传标记的型别 如红细胞被动凝集抑制试验 酶联免疫分析 胶体金标免疫试验等 电泳技术法医鉴定中应用的血清型多数属于电泳性质上的多态性 需要采用凝胶电泳技术分型 不同表型的蛋白分子一级结构存在差异 分子量和等电点不同 在一定pH环境的凝胶中和一定的电场条件下 电泳迁移率不同 可依据蛋白谱带位置进行分型 2020 2 21 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 等电聚焦技术依靠不同蛋白分子之间等电点差异进行分型 分辨率比常规凝胶电泳高 能够揭示许多普通电泳难以检出的多态性 DNA分型技术也可用于血清型分型 2020 2 21 电泳后血清型谱带的显示可以用 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 普通蛋白染色 考马斯亮蓝R250 氨基黑10B和硝酸银染色等免疫固定 利用抗原抗体的特异性反应识别特异性蛋白免疫印迹法 是将凝胶中的蛋白转印制醋酸纤维膜上 在进行抗原抗体反应 利用标记在抗体上的酶或其他标记物显示抗原抗体复合物 2020 2 21 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 2020 2 21 结合珠蛋白 Haptoglobin 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 一 生化性质及生物学功能是一种血清糖蛋白 肝脏合成 PI 4 1 4 2 可以结合Hb 形成Hp Hb复合物 被网状内皮系统清除 利于Fe的再利用 保护肾脏 Hp由2条 链和2条 链构成 Hp1和Hp2之间仅 链的一级结构不同 链结构是相同的 Hp1 链83氨基酸 分子量9kD Hp2 链142氨基酸 2020 2 21 二 等位基因结构与命名 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 1 Hp基因 定位16q22 1 包含Hp基因及相关基因HprHp1 含5个外显子 根据第4外显子中第52 53位密码子不同 分为Hp 1F GAT AAG Hp 1S AAT GAG Hp 2 含7个外显子 分为Hp 2FF Hp 2FS Hp 2SS三个等位基因 2020 2 21 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 2 Hp表型 淀粉凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳将不同个体的Hp分为三型 Hp1 Hp2 1和Hp2 2 Hp的PAG电泳分型谱带 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 2020 2 21 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 8mol L尿素使Hp1 1分子中 链变性再用巯基乙醇还原后电泳 发现由Hp 1F Hp 1S和Hp 2三个共显性等位基因表达产物 有6种表型 Hp subtype等电聚焦分型谱带 2020 2 21 3 遗传Hp变异 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 Hp0型采用常规电泳技术检测不出Hp表型 又称无Hp血症 正常随机人群调查 中国汉族人群Hp0型占0 81 原因 1 溶血性贫血 特发性贫血 白血病 尿毒症等 患者的血浆Hp含量明显下降 2 严重肝脏疾病如急性肝炎 肝硬化 Hp合成障碍 3 胎儿及部分新生儿 4 少数正常个体 2020 2 21 三 群体遗传学调查结果 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 Hp表型分布存在种族差异 亚洲人Hp2 2居多 白人Hp2 1占优势 黑人Hp1 1出现频率最高 2020 2 21 四 分型及方法 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳 利用PAG的分子筛作用和电场作用 Hp Hb使联苯胺氧化变蓝 仅适用于新鲜血清中HpHp亚型等电聚焦电泳 用DEAE 纤维素将Hp纯化 加尿素 裂解液 硫代乙酰胺 考马斯或免疫技术分型 DNA分型 利用链特异探针进行杂交分型 灵敏简便 2020 2 21 维生素D结合蛋白 vitaminDbindingprotein 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 1 生化性质和生物学功能也称型特异性成分 groupspecificcomponent Gc 后来发现Gc实质是vitaminDbindingprotein 电泳属于 2球蛋白 由肝脏合成分子量52 58kD PI4 8 5 1 主要生理功能是结合和转运VitD 参与VitD代谢的转运和存储过程 目前仍称VitD结合蛋白为Gc 2020 2 21 2基因结构Gc基因定位4q12 基因长42 4kb 13个外显子 表达产物为含458个氨基酸残基的单一肽链 常见等位基因 Gc 2 Gc 1F Gc 1S 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 Gc基因11外显子多态密码子 2020 2 21 3分型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 a PAG Disc电泳可检出Gc 1及Gc 2两个基因产物 将Gc分为三种普通表型 2020 2 21 b 免疫电泳 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 2020 2 21 C 等电聚焦电泳技术可检出三个等位基因产物共六种常见表型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 d DNA分型在亲子鉴定及斑痕的个人识别都有较大的法医学应用价值 2020 2 21 4 群体遗传学调查结果 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 白人Gc 1S Gc 2 Gc 1F 蒙古人Gc 1F占优势 黑人Gc 1F出现频度很高 部分人群Gc基因频率分布 2020 2 21 血清类粘蛋白型 ORM 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 1 生物化学性质与生物学功能血清类粘蛋白 orosomucoid ORM 是存在人类血液 体液 分泌液中一组具有遗传多态性的 1糖蛋白 由183个氨基酸残基组成的单一肽链 分子量41 43kD PI2 7 3 5 主要有ORM1和ORM2两种分子 二者间有21个氨基酸的差异 ORM1具有明显的遗传多态性 生物学功能 属炎症急性相反应蛋白 具有免疫调节功能 2020 2 21 2 遗传及等位基因命名 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 ORM1等位基因DNA序列的主要区别 ORM基因定位9q43 qter 有两个基因座 ORM1和ORM2 ORM1基因座在所有人群中具有遗传多态性 编码区长度约70kb 2020 2 21 ORM型的等电聚焦分型图谱 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 2020 2 21 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 3汉族人群基因频率分布 ORM1 F10 703ORM1 F20 021ORM1 S0 2764法医学应用 汉族 群体参数 ORM1Dp0 5992PE0 1775人体血清 血痕 精液 精斑 均可检测出ORM1型 斑痕中可检测时间8周 2020 2 21 免疫球蛋白同种异型遗传标记 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 同种异型是免疫球蛋白上具有个体差异的抗原决定簇 由编码免疫球蛋白多肽链基因的等位基因所表达产生 表现为同一种属不同个体的免疫球蛋白抗原性不同 具有遗传多态性 免疫球蛋白分子由四条多肽链组成 其中两条多肽链为重链 分别由450和 或 570个氨基酸组成 两条为轻链 分别由214个氨基酸组成 轻链和重链通过二硫键连接而成的单体是构成免疫球蛋白分子的基本结构 轻链N端1 2及重链1 4为可变区 其余为恒定区 2020 2 21 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 代表了不同个体的轻 重链中氨基酸序列的轻微差异 局限于恒定区 命名 根据抗原决定簇位于重链或轻链已发现30余种同种异型遗传标记 Gm系统 Am系统 Em系统 Km系统等 2020 2 21 常见的Gm Am Em单倍型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 2020 2 21 检测方法 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 1 抗D抗体致敏O型 D阳性红细胞 2 证实红细胞已被致敏 用抗人球蛋白抗体 3 测抗Gm抗体的效价 节约抗体 4 血清Gm检测 血清 抗Gm抗体 致敏红细胞凝集 阴性 不凝集 阳性 2020 2 21 其他血清型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 A1抗胰蛋白酶a1 AT PI14q31 32 复等位基因普通电泳分PI F PI M PI S 等电聚焦将PIM分 表型分型以固相 梯度等电聚焦技术为佳 转铁蛋白型 f3q21 26 共显性基因控制Tf C1与Tf C2常见 淀粉凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳分TfB TfC TfD又分许多变异型 等电聚焦将TfC分C1C1 C1C2 C2C2PCR RFLP也可进行测定 2020 2 21 血清中其他具有遗传多态性的蛋白 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 纤维蛋白溶酶原 PLG 间 胰蛋白酶抑制因子 ITI I I 抗凝血酶 AT 补体系统的众多成分如C1 C6 C7 C8 BF HF C2 C3 C4 C5 IF等 2020 2 21 思考题 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 1 血清型的分类与命名 2 Hp分型原理 方法及法医学应用评价 3 Gc分型原理 方法及法医学应用评价 4 ORM分型原理 方法及法医学应用评价 5 免疫球蛋白同种异型分型原理 方法及法医学应用评价 酶型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 一 同工酶概念 具有相同生物化学功能 催化同一生物化学反应但蛋白质分子结构不同的一类酶称为同工酶 ISOENZYME 因为酶活性中心结构相同 差异仅出现在酶的非催化部位 故不影响酶催化的特异性 在同工酶中 由遗传所致的 在不同个体之间表现出酶分子蛋白质一级结构差异 并可将人群分为若干类型的同工酶被称为多态性同工酶 polymorphicenzyme 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 二 同工酶分类 分类依据 遗传学理论 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 复基因座位同工酶 复等位基因同工酶 遗传变异体同工酶 复基因座位同工酶 由几个基因座的基因编码 编码产物经过组装成为完整的酶蛋白分子 这类同工酶各亚基的一级结构差异很大 例如乳酸脱氢酶LDH以5种四聚体酶分子H4 H3M1 H2M2 H1M3 M4存在 磷酸葡萄糖变位酶 PGM 以三种结构不同的同工酶 PGM1 PGM2 PGM 独立存在 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 2复等位基因同工酶 由同一基因座上不同等位基因编码 形成不同肽链一级结构的亚基 构成完整的酶蛋白分子 例如PGM1基因座有 1 1 2 2 四个等位基因 编码10种蛋白表型 复等位基因同工酶具有遗传多态性 是法医学常用的遗传标记 3遗传变异体同工酶 由于单个基因座的基因突变形成变异体基因 形成表达产物的肽链结构差异 但是变异基因没有达到多态性水平 不属于常规使用的遗传标记 例如 G 6 PD至今发现有140种变异体 复等位基因同工酶 由同一基因座上不同等位基因编码 这些基因一般都表现为显性基因 各等位基因编码的肽键一级结构不同 具有个体差异 成为个人识别的基础 是法医学常用的一类同工酶遗传标记 例如PGM1基因座有 1 1 2 2 四个等位基因 决定10种表型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 遗传变异体同工酶 由于单个基因座的基因突变产生的同工酶 其发生是由亲代某一基因发生突变 由突变等位基因编码的一条特异的多肽链 在不同人群中的分布尚无规律可循 例如 葡萄糖 6 磷酸脱氢酶G 6 PD 至今发现有140多种变异体 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 法医学应用同工酶标记的基本要求 1 酶型的多态性程度高 鉴别能力及非父排除率高 2 酶的催化活性容易测定 3 酶活性高而稳定 不易受干燥和外界理化因素影响 4 电泳检测操作简便 结果重复性好 5 除血液外 在人体其他组织及细胞中也可以检出相同的型别 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 法医学鉴定中常用的红细胞酶型 红细胞酸性磷酸酶 EAP 酯酶D EsD 磷酸葡萄糖变位酶1 PGM1 乙二醛酶 GLO 6 磷酸葡萄糖酸脱氢酶 G6PD 谷氨酸丙酮酸转氨酶 GPT 腺苷脱氨酶 ADA 腺苷酸激酶 AK 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 三 同工酶分型方法 A 分型的基本原理 凝胶电泳方法 区带电泳 利用酶蛋白分子的大小和所携带电荷数量即酶蛋白分子的电荷密度的差异 在介质中迁移率不同 而形成清晰的区带 等电聚焦电泳 根据酶蛋白分子的等电点不同 在PH梯度介质中 酶蛋白分子聚焦在相应的等电点PH位置上 形成狭窄而清晰的区带 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 B 凝胶介质上酶区带的显现及鉴定常见酶谱显示方法 直接底物显色法荧光染色法电子转移染料染色法 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 常用于测定水解酶 在酶的作用下 无色底物被酶的催化反应转变成有色产物 从而显现酶的谱带 酸性磷酸酶 ACP 酚酞磷酸盐 无色 磷酸 酚酞 红色 碱性条件 直接底物显色法 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 荧光染色法 在酶的催化下 非荧光底物生成高度荧光的产物 正荧光染色 或使荧光底物转化成非荧光产物 负荧光染色 例如 以非荧光物质4 甲基伞形酮醋酸盐作为底物 在酯酶D的催化下水解为羧酸阴离子和发荧光的甲基伞形酮 在紫外灯照射下能够显现出酯酶D谱区带 4 甲基伞形酮醋酸盐 非荧光 EsD羧基阴离子4 甲基伞形酮 荧光 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 在酶的催化下 反应底物转化成新的产物同时 使氧化型辅酶NAD 或NADP 还原成NADH或NADPH 同时提供电子 在中间媒介催化剂吩嗪甲酯硫酸盐 PMS 的参与下 染料MTT还原成暗蓝紫色的不溶性甲月替G 1 P 盐 PGM1Mg2 G 1 6 2P 盐 G 6 P 盐 NADP甲月替 蓝色 G 6 PDPMS吩嗪甲酯硫酸盐6 P G COO 盐 NADPHMTT噻唑蓝 电子转移染料染色法 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 磷酸葡萄糖变位酶 PGM Phosphoglucomutase PGM PGM广泛存在于人体和动物体内各种组织中 是糖代谢中重要的酶 PGM G 1 P G 6 P 可逆反应 需要G 1 6 dP作辅助因子 需要Mg2 参加 人体内有3个基因座编码表达PGM1 51kD 编码基因在1号染色体 PGM2 61kD 编码基因在4号染色体 PGM3 53kD 编码基因在6号染色体 其中PGM1活性最高 PGM2次之 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 等位基因结构与命名 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 普通凝胶电泳 PGM可检出a b c d e f g七条带 负极向正极方向 谱带a b c d具有个体差异 为PGM1基因产物 分为三种表现型 PGM1 1 a c PGM2 2 b d PGM2 1 a b c d 谱带e f g为PGM2基因产物 多态性较低 PGM1的凝胶电泳谱型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 等电聚焦电泳 PAGIEF 将PGM1分出10种亚型 分别由PGM1 1 PGM1 1 PGM1 2 PGM1 2 四个共显性等位基因控制 PGM1凝胶等电聚焦谱型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 部分群体PGM1亚型基因频率分布 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 群体 基因频率 PGM 1 PGM 1 其他 PGM 2 PGM 2 汉族 北京 汉族 广州 壮族纳西族朝鲜族蒙古族日本人英国 0 6080 5970 5660 5550 6630 6310 6560 619 0 1170 1260 1470 0350 1090 1570 1170 142 0 2080 1720 1350 3500 1790 1630 1670 122 0 0670 0940 1250 0400 0490 0450 0500 118 0 0110 0270 020 0 006 分型方法 一PGM1蛋白多态分型 1 普通凝胶电泳 采用琼脂糖 淀粉凝胶 pH7 4的Tris 马来酸缓冲液 电泳条件 15V cm 5h 循环水温4 8 2 PAG IEF正极液 1mol l磷酸负极液 1mol lNaOH凝胶规格 浓度T5 交联度C3 两性电解质 PH5 0 7 0 5 V V 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 二PGM1的DNA RFLP分型扩增外显子4的引物扩增基因组DNA得到长293bp的片段 外显子4中的nt723碱基突变 使PGM1 1基因序列AGATCC在PGM1 2基因中成为AGATCT 后者是限制酶Bgl的识别序列 可被消化成189bp和104bp两条片段 电泳显带可见纯合子PGM1 1为一条带 PGM1 2两条带 杂合子PGM1 2 1三条带 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 293bp189bp104bp PGM112 12 扩增外显子8的引物扩增基因组DNA得到长309bp的片段 外显子8中的nt1320碱基突变 使PGM1 基因序列TATG在PGM1 基因中成为CATG 后者是限制酶Nla 的识别序列 可被消化成200bp和109bp两条片段 电泳显带可见纯合子PGM1 为一条带 PGM1 两条带 杂合子PGM1 三条带 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 PGM1 309bp200bp109bp 检材处理 新鲜血液 取压积红细胞制成红细胞溶血液 以加样纸蘸取加样 血痕 先用0 05mol L二硫苏糖醇 DTT 浸泡 还原二硫键 恢复酶活性 提高阳性率 精液 分离精子 加等体积蒸馏水 冰冻处理 精斑 直接用蒸馏水浸泡后加样 毛发 取带毛囊的毛根部 压扁后用缓冲液加样 人体组织 匀浆后用干净纱线或加样纸提取加样 检出时限 室温血痕4 6周 三PGM1检材处理及检出时限 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 检材处理 新鲜血液 取压积红细胞制成红细胞溶血液 以加样纸蘸取加样 血痕 先用0 05mol L二硫苏糖醇 DTT 浸泡 还原二硫键 恢复酶活性 提高阳性率 精液 分离精子 加等体积蒸馏水 冰冻处理 精斑 直接用蒸馏水浸泡后加样 毛发 取带毛囊的毛根部 压扁后用缓冲液加样 人体组织 匀浆后用干净纱线或加样纸提取加样 检出时限 室温血痕4 6周 酯酶D是存在红细胞和组织中的水解酶 水解羧酸酯键 生成羧酸和醇 酯酶有A B C和D 只有EsD具有多态性 最适pH5 0 5 5 分子量为60kD EsD基因定位13q14 1 基因长度1 3kb 由一对共显性等位基因EsD 1和EsD 2所控制 由于外显子发生单个碱基替换 导致第190位密码改变产生 nt698处G A 有3种表型EsD1 1 EsD2 1 EsD2 2 变异稀有基因有EsD 3 EsD 4 EsD 5 EsD 7和EsD 0等 酯酶DEsteraseD 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 酯酶D1EsteraseD是存在红细胞和组织种一种水解酶 分解羧酸酯键 生成羧酸和醇 EsD与脂肪代谢有关 酯酶有A B C和D 只有EsD具有多态性 EsD分子量60kD 最适pH5 0 5 5 EsD基因定位13q14 1 基因长度1 3kb由一对共显性等位基因EsD 1和EsD 2所控制 由点突变构成 导致190位氨基酸变异 nt698处G A 有3种表现型EsD1 1 EsD2 1 EsD2 2 变异稀有基因有EsD 3 EsD 4 EsD 5 EsD 7等 EsD的凝胶电泳谱型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 表型 EsD1 EsD2 1 EsD2型 基因频率分布 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 琼脂糖 淀粉混合凝胶 Tris 马来酸缓冲体系 pH7 4 电泳条件 15V cm 循环水温度8 电泳时间3h 酶谱显示 4 甲基伞形酮醋酸盐EsD羧基阴离子4 甲基伞形酮 荧光 EsD分型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 Acidphosphatase是一组在酸性条件下催化磷酸单酯水解的酶类 又称之为酸性磷酸酯酶 ACP分子量为15 20kD 等电点5 0 7 0 酶促反应最适pH5 5 能催化正磷酸单酯水解成磷酸和醇 ACP按照体内分布不同分为三大类 1 ACP1 红细胞酸性磷酸酶 EAP 2 ACP2 细胞分泌的酸性磷酸酶 如精液ACP SAP 3 ACP3 组织细胞溶酶体中ACP 其中ACP1具有多态性 主要分布在红细胞 故又称Erythrocyteacidphosphatase EAP 红细胞酸性磷酸酶 AcidphosphataseEAP 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 基因结构 基因定位2p25 有3个共显性等位基因EAP A B和 C 基因有6个外显子 其中外显子3有3F和3S 序列相同 串联重叠 各有一同义突变C T 5外显子A G突变 是等位基因EAP A不同于EAP B和EAP C的原因 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 EAP是Hopkinson等 1963 用SGE发现的第一个红细胞酶型 在我国大部分群体调查未见C等位基因产物 仅检出A B基因 常见的表型为 A BA B EAP琼脂糖凝胶电泳谱型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 电泳酶谱 1 琼脂糖凝胶 柠檬酸 磷酸氢二钠缓冲液 pH6 0 12V cm电场强度 电泳3h 酶谱显示 方法一 4 甲基伞形酮磷酸盐 无荧光 磷酸 4 甲基伞形酮 有荧光 方法二 酚酞磷酸盐 无色 磷酸 酚酞 红色 方法三 奈酚磷酸盐 ACP显谱反应原理 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 ACP ACP 碱性条件 ACP 磷酸 萘酚 固蓝 甲月替 蓝色 基因频率分布 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 其他红细胞酶型 谷丙转氨酶GPT又称谷氨酸丙氨酸氨基转移酶 是氨基酸代谢中的重要酶类 催化谷氨酸与丙氨酸互换 GPT分子由2个亚基组成 MW约100 000道尔顿 最适pH8 0 GPT 1 GPT 2二个共显性等位基因控制三种常见表型 GPT1 1 GPT2 1 GPT2 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 基因结构 基因定位8q24 3 全长2 7kb 由11个外显子和10个内含子组成 编码495个氨基酸 其中第14密码子的突变导致相应氨基酸的替换 产生1型 组氨酸 和2型 天门冬氨酸 构成酶蛋白多态性 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 分型 分型方法 淀粉胶 琼脂糖胶Buffer pH7 5 混合淀粉凝胶电泳显色 1 丙氨酸 GPT 谷氨酸 GLD NADP NADPH2 MTT PMS 兰色 2 丙氨酸 GPT 谷氨酸 丙酮酸 LDH NADH 乳酸 NAD 无荧光 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 乙二醛酶 GLO I GLO I和GLO II两类酶共同参与催化甲基乙二醛转化为乳酸的反应 甲基乙二醛 GSH GLO I催化 S 乳酰谷胱甘肽S 乳酰谷胱甘肽 GLO II催化 乳酸 GSH1975年 Kompf 报导 GLO I具有遗传多态性 由GLO I 1和 2两共显性等位基因控制 基因定位6号染色体靠近HLA区 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 分型 琼脂糖 可溶性淀粉混和凝胶电泳显色 甲基乙二醛 GLOI 还原型GSH 氧化型GHS 淀粉 碘 兰色 还原型GSH可使兰色褪掉 Tris 马来酸缓冲液 pH7 4 场强15V cm 电泳时间1h 显色原理 化学显色法 分出3个表型 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 基因频率分布 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 其他酶型 6 PGDADA 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 思考题 1 同工酶的分类与命名 2 PGM1分型原理 方法及法医学应用评价 3 EsD分型原理 方法及法医学应用评价 4 EAP分型原理 方法及法医学应用评价 中山大学中山医学院法医学系法医物证学教研室李建金 谢谢 再见